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1-磷酸鞘氨醇受体在不同退变程度髓核组织中的表达变化

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中国脊柱脊髓杂志 2015年第12期25卷 1083-1089页

作者：杨匡李海音张伟路康周跃李长青第三军医大学附属新桥医院骨科重庆市400037

目的 :比较不同退变程度人椎间盘髓核组织中3种1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1/2/3)表达水平的差异,探讨椎间盘中S1PR表达水平与椎间盘退变的关系。方法:收集腰椎间盘退行性病变患者手术切除的椎间盘组织,其中轻度退变(Pfirrmann分级Ⅳ级)22例... 详细信息

目的 :比较不同退变程度人椎间盘髓核组织中3种1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1/2/3)表达水平的差异,探讨椎间盘中S1PR表达水平与椎间盘退变的关系。方法:收集腰椎间盘退行性病变患者手术切除的椎间盘组织,其中轻度退变(Pfirrmann分级Ⅳ级)22例,严重退变(Pfirrmann分级Ⅴ级)14例;同时取6例无椎间盘退变患者(单纯腰椎椎体骨折,Pfirrmann分级Ⅱ级)手术切除的椎间盘组织作为对照组;通过HE染色以及Saf-O染色观察不同退变程度椎间盘的组织学变化,免疫组化检测不同退变程度组织中的S1PR表达水平;Ⅱ型胶原酶消化分离提取原代髓核细胞,通过Real-time PCR、Western-bolt检测不同退变程度椎间盘髓核细胞中S1PR的表达水平,并通过细胞免疫化学方法对S1PR进行定位。结果:HE染色及Saf-O染色结果显示退变椎间盘的纤维环出现破损,髓核细胞形成明显的集落,细胞外基质减少。免疫组化结果显示正常和轻度退变的髓核组织中3种受体(S1PR1/2/3)都有表达,严重退变的组织中表达极弱;Real-time PCR结果显示对照组髓核细胞中S1PR1/2/3的m RNA表达水平分别是严重退变组的5.34±0.52倍、7.25±0.04倍、1.92±0.06倍,轻度退变组S1PR1/2/3的m RNA表达水平分别是严重退变组的4.35±2.45倍、4.96±3.44倍、2.19±0.82倍;Western-blot发现对照组和轻度退变组髓核细胞中S1PR1/2/3均有表达,严重退变组表达水平较低;免疫细胞化学显示S1PR主要集中在髓核细胞的细胞质和细胞膜上。结论:髓核组织中主要表达S1PR1/2/3,在严重退变的髓核组织和细胞中其表达水平明显下降,S1P及其受体可能参与椎间盘髓核组织的退变过程。

关键词：椎间盘退变 1-磷酸鞘氨醇受体髓核细胞

1-磷酸鞘氨醇受体表达失衡参与心梗后心室重塑的研究

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1-磷酸鞘氨醇受体表达失衡参与心梗后心室重塑的研究

作者：李军中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

1研究背景心室重塑是急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后发生慢性心力衰竭(heart failure,HF)的中心环节。心室重塑不仅归因于心肌细胞的凋亡、肥大,纤维组织的形成也发挥了重要作用,目前调控纤维化发生、发展的具体机制... 详细信息

1研究背景心室重塑是急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后发生慢性心力衰竭(heart failure,HF)的中心环节。心室重塑不仅归因于心肌细胞的凋亡、肥大,纤维组织的形成也发挥了重要作用,目前调控纤维化发生、发展的具体机制仍未完全揭示。较多文献报道1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)与心肌缺血/再灌注、冠心病、AMI之间有密切关系。目前在心脏组织发现有S1P1、S1P2、S1P33种S1P受体表达。研究发现:在缺氧条件下S1P对心肌细胞具有保护作用;体外实验证实S1P对心肌细胞的保护作用可能是通过S1P1作用实现;近期有文献报道S1P1信号通路在调节AMI后心肌炎症反应过程起重要作用;另外,通过体内、体外研究证实:S1P2、S1P3信号参与了心脏纤维化的进程。基于文献分析我们发现:S1P通过受体产生促进心肌细胞存活和加剧心肌纤维化的双重作用。我们推断:在正常心肌组织中S1P受体的表达处于一种平衡状态,这种状态参与维持心脏的正常组织形态及功能。那么,AMI后心室重塑的进程中是否存在S1P1、S1P2、S1P3表达失衡?它们在心脏非梗死区、梗死区的表达变化趋势是否一致?通过调节S1P受体是否能够抑制心室重塑的发生、发展?上述问题报道较少且存在争议,特别是梗死区上述3种受体的表达变化尚未发现文献报道。本研究旨在对上述3个问题进行探讨,通过在体研究干预S1P及下游信号,为改善AMI患者预后提供新的思路。2研究目的(1)探讨AMI后心室重塑阶段非梗死区、梗死区S1P1、S1P2、S1P3的表达变化。(2)通过干预S1P受体观察对AMI后心室重塑和心功能的影响。3研究方法(1)实验一:采用体重在220g50g雄性SD大鼠,随机分为:假手术组、心梗组,采取开胸结扎左侧冠状动脉的方法建立心梗后心衰模型。术后8周,通过HE染色、Masson染色、血清BNP(brain natriuretic peptide)检测、记录心电图、心功能测定等手段,对这种造模方法的可靠性进行验证。(2)实验二:实验动物随机分为4组:正常对照组、1周梗死组、4周梗死组、8周梗死组,按照实验一的方法构建模型。采用实时荧光定量PCR技术及酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)的检测方法,对正常心脏以及心梗后1周、4周、8周三个时间点大鼠心脏组织中S1P1、S1P2、S1P3m RNA和蛋白表达进行检测。(3)实验三:实验动物随机分为4组:假手术组(Sham组)、AMI组、Sham+SEW2871组、AMI+SEW2871组。对Sham+SEW2871组、AMI+SEW2871组,经口给予S1P1特异性激动剂SEW2871,剂量:7mg/kg/d,直至处死前。术后8周,通过心脏超声测定心功能,激光多普勒检测心脏微循环灌注,ELISA法检测血清心衰标志物BNP变化,Masson染色评估胶原容积分数。(4)统计学方法:计量资料数据采用均数±标准差(Mean±SD)的表示方法,利用Graph Pad Prism6.02软件对数据进行统计学分析。采用t检验对单因素两组之间进行数据分析,采用方差分析法对单因素多组间进行两两比较,当P<0.05认为具有统计学差异。4研究结果(1)实验一:(1)结扎左侧冠状动脉的造模方法能够保证较高的动物存活率,本研究中假手术组、心梗组大鼠存活率分别为:75.0%、72.5%。(2)心梗组左冠脉结扎5分钟后可记录到心电图I、II、a VL导联出现J点上移超过0.1mv,ST段抬高(多为弓背向上型)0.2mv以上,假手术组无上述变化。(3)术后8周心脏超声检测:心梗组左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS):29.20±1.75%,假术组:33.17±1.32%,心梗组LVFS低于假手术组(P<0.01);心梗组左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF):63.24±1.88%,假手术组:71.12±0.79%,心梗组LVEF均低于假手术组(P<0.01)。(4)HE染色可见梗死部位心室壁明显变薄,肌纤维被疏松结缔组织取代,残存肌细胞增生,成纤维细胞增生,血管增生充血明显。(5)Masson染色显示心肌梗死区域残存心肌之间纤维瘢痕形成,呈交错分布。(6)术后8周,心梗组与假手术组血清BNP水平分别为:648.44±9.37ng/m L、541.65±33.34ng/m L,心梗组明显高于假手术组(P<0.01)。(2)实验二:(1)在AMI后1周、4周、8周三个时间点,分别检测S1P1的m RNA和

关键词： 1-磷酸鞘氨醇 1-磷酸鞘氨醇受体心力衰竭心室重塑

1-磷酸鞘氨醇受体在晚期糖基化终产物介导的血管平滑肌细胞增殖中的作用

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1-磷酸鞘氨醇受体在晚期糖基化终产物介导的血管平滑肌细胞增殖中...

作者：袁咏军南方医科大学

学位级别：硕士

随着我国经济的发展和人民生活水平的提高,饮食结构和环境的改变,心脑血管疾病呈上升趋势。各种代谢性疾病,特别是肥胖、糖尿病及其代谢综合症所致的心脑血管疾病的比例也越来越高,以血管并发症为主的糖尿病并发症所造成的后果将成为家... 详细信息

随着我国经济的发展和人民生活水平的提高,饮食结构和环境的改变,心脑血管疾病呈上升趋势。各种代谢性疾病,特别是肥胖、糖尿病及其代谢综合症所致的心脑血管疾病的比例也越来越高,以血管并发症为主的糖尿病并发症所造成的后果将成为家庭与社会的沉重负担。血管重构也是糖尿病血管并发症发生的重要病理基础,深入探讨其发病机制有助认识和解决糖尿病血管并发症,寻找疾病早期诊断和疾病专柜的预警标志,为治疗提供新的思路。组织重构实际上是一个组织损伤修复的过程,,当修复过程失调或过度时,这些反应可以导致组织纤维化,其特征是病理的成纤维细胞和肌成纤维细胞的积聚和细胞外基质合成过度。血管重构的特征之一是血管平滑肌细胞的过度增殖和迁移,使动脉壁中层组织明显增厚,管腔狭窄,甚至导致动脉硬化。近年来,1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)在血管重构发生中的作用正逐渐被人们认识。S1P是一种存在于血浆中的多效信号脂质分子,主要来源于细胞膜鞘磷脂的分解和代谢。S1P是一种重要的平衡性物质,大多数情况下S1P即可在细胞内作为第二信使传递信号,也可作为第一信使和细胞膜上相应受体相互结合,参与包括细胞分化、迁移、存活、增殖、血管生成、免疫以及过敏反应等生物学作用。已有研究证实,S1P在组织损伤后的伤口愈合和纤维化反应中起重要作用。S1P通过其受体信号,调节血管通透性,调节上皮细胞凋亡、成纤维细胞迁移和肌成纤维细胞的分化。已有研究证明糖尿病的动物模型和患者血清均有S1P含量的增加,提示S1P可能参与糖尿病及其并发症的发生和发展。糖尿病代谢障碍引起的高糖、高脂和糖基化终产物的堆积是否通过S1P及其受体影响血管平滑肌细胞的增殖和迁移,从而介导血管重构等目前还未见报道。研究目的:本研究将在证明晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)可以导致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖迁移的前提下,探讨不同 S1P 受体(sphingosine-1-phosphate receptor,S1PR),特别是 S1PR1和S1PR2在其中的作用和机制。方法:实验的研究对象为人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cells,HUASMCs)。AGE 修饰的白蛋白(AGE-modified bovine serum albumin,AGE-BSA)由牛血清白蛋白与D-葡萄糖共同孵育8周并过滤而获得。采用CCK-8实验检测平滑肌细胞增殖能力,采用细胞划痕实验及Transwell实验检测内皮细胞的迁移能力;采用western blot技术检测S1P不同受体蛋白表达水平的变化,选用抑制剂或激动剂影响S1PR1和S1PR2的功能。本研究所有数值均用平均值±标准差表示,使用SPSS13.0软件进行数据分析,统计方法采用单因素方差分析(one-way analysis of variance,ANOVA)后进行 Post Hoc 检验(方差齐性是采用LSD法,方差不齐时采用Dunnet’sT3方法),以P<0.05为差异有统计学意义。结果:***和AGE-BSA促进血管平滑肌细胞的增殖与迁移。(1)BSA和AGE-BSA促进血管平滑肌细胞的增殖CCK-8实验的结果显示,不同组之间均有显著性差异(F=5.434,P=0.045)。与Control组相比,BSA组OD值明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05),与Control组相比,AGE-BSA组的增殖也明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05),AGE-BSA组与BSA组相比,其促增殖作用更加明显,具有统计学意义(P<0.05)。这一结果说明,BSA对平滑肌细胞的增殖具有促进作用,这一实验结果符合内皮细胞损伤后血清暴露导致平滑肌细胞过度增殖和动脉硬化的临床和实验现象,AGE-BSA对平滑肌细胞的增殖促进作用更加明显。(2)BSA和AGE-BSA促进血管平滑肌细胞的迁移划痕实验的结果显示,不同组之间均有显著性差异(F=16.35,P=0.006)。与Control组相比,BSA组的划痕恢复百分比明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05),与Control组相比,AGE组的划痕恢复百分比也明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05),AGE-BSA组与BSA组相比,其加快迁移的作用更加明显,具有统计学意义(P<0.05)。Transwell的结果显示,不同组之间均有显著性差异(F=225.2,P=0.0001)。与Control组相比,BSA组的迁移细胞数量明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05),与Control组相比,AGE组的迁移细胞数量也明显上升,差异

关键词：晚期糖基化终产物 1-磷酸鞘氨醇受体人脐动脉平滑肌细胞血管重构增殖迁移

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1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的研发现状

药学进展 2016年第7期40卷 548-554页

作者：蒋智李梦鹤徐璐刘恕药渡经纬信息科技(北京)有限公司北京100085

1-磷酸鞘氨醇(S1P)具有多种生物学功能,S1P受体(S1PR)调节剂可以用于治疗多种免疫性疾病。芬戈莫德是首个上市的S1PR调节剂,用于治疗多发性硬化症(MS),2015年销售额达到27亿美元。药渡网数据显示:目前全球有14个S1PR调节剂进入临床,适... 详细信息

1-磷酸鞘氨醇(S1P)具有多种生物学功能,S1P受体(S1PR)调节剂可以用于治疗多种免疫性疾病。芬戈莫德是首个上市的S1PR调节剂,用于治疗多发性硬化症(MS),2015年销售额达到27亿美元。药渡网数据显示:目前全球有14个S1PR调节剂进入临床,适应证包括MS、银屑病、类风湿性关节炎和炎症性肠病等。国内目前针对S1PR靶点的药物有1个新药奥芬米洛已获批临床,另1个新药CBP-307处于临床在审评阶段。简介S1PR的生物学功能和S1PR调节剂在国内外的开发情况,为靶向S1PR的药物开发提供参考。

关键词： 1-磷酸鞘氨醇受体调节剂免疫性疾病多发性硬化症

1-磷酸鞘氨醇受体1-3在Ⅰ型糖尿病ED大鼠阴茎海绵体组织中的表达

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中国男科学杂志 2017年第4期31卷 3-7,11页

作者：刘康崔凯李瑞冯海航刘继红文博饶可华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科武汉430030 南方医科大学附属深圳宝安医院泌尿外科广州医科大学附属深圳沙井医院泌尿外科

目的探讨1-磷酸鞘氨醇受体1-3(S1PR1-3)在糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中的表达。方法 20只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组,成功造模2个月后,测定两组大鼠阴茎海绵体内压/平均动脉压(Max ICP/MAP),采用Western ... 详细信息

目的探讨1-磷酸鞘氨醇受体1-3(S1PR1-3)在糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中的表达。方法 20只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组,成功造模2个月后,测定两组大鼠阴茎海绵体内压/平均动脉压(Max ICP/MAP),采用Western blot分析S1PR1-3、eNOS、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠勃起功能显著降低(P受体表达升高,激活RhoA/Rho激酶信号通路有关。

关键词： 1-磷酸鞘氨醇受体 rho相关激酶类一氧化氮合酶勃起功能障碍糖尿病

1-磷酸鞘氨醇受体1-3在Ⅰ型糖尿病ED大鼠阴茎海绵体组织中的表达

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1-磷酸鞘氨醇受体1-3在Ⅰ型糖尿病ED大鼠阴茎海绵体组织中的表达

1-磷酸鞘氨醇受体在心肌梗死后心室重塑过程中的变化差异

第十二次全国中西医结合男科学术大会暨全国中西医结合男科诊疗技术研修班暨2017上海市中西医结合学会上海市中医药学会泌尿男科专业委员会学术年会

作者：刘康崔凯李瑞冯海航刘继红文博饶可华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科南方医科大学附属深圳宝安医院泌尿外科广州医科大学附属深圳沙井医院泌尿外科

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体1-3在糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中的表达,以及其与NO/cGMP、RhoA/Rho激酶等信号通路之间的关系。方法:20只8周龄正常雄性SD大鼠随机取8只作为对照组,其余建立糖尿病(DM)大鼠模型,禁食12小时后,... 详细信息

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体1-3在糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中的表达,以及其与NO/cGMP、RhoA/Rho激酶等信号通路之间的关系。方法:20只8周龄正常雄性SD大鼠随机取8只作为对照组,其余建立糖尿病(DM)大鼠模型,禁食12小时后,予以60mg/Kg链佐菌素(STZ)腹腔注射。16周龄时,测定各组大鼠阴茎海绵体内压/平均动脉压(MaxlCP/MAP),米用Western blot分析S1PR1-3、eNOS、RhoA、ROCK1、ROCK2在各组大鼠阴茎海绵体组织内的表达水平。结果:糖尿病组大鼠体重[(220.3±24.18)g]明显低于正常对照组[(532.7±34.14)g],并且糖尿病组大鼠血糖水平[(27.12±2.58)mmol/L]较正常对照组大鼠[(6.41±0.72)mmol/L]显著升高;分别在2.5V、5.0V、7.5V电刺激海绵体神经,结果显示糖尿病组Max ICP/MAP(0.334±0.046、0.340±0.058、0.358±0.039)明显低于正常对照组(0.671±0.057、0.716±0.055、0.774±0.032);Western blot检测显示S1PR1、S1PR3、eNOS蛋白表达在糖尿病组明显低于对照组,而S1PR2、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达明显高于正常对照大鼠。结论:I型糖尿病可导致大鼠MaxlCP/MAP显著降低,引起勃起功能障碍,可能与阴茎海绵体组织内S1PR1、S1PR3表达下调,eNOS/NO/cGMP信号通路受抑制以及S1PR2受体表达升高,激活RhoA/Rho激酶信号通路有关。

关键词： 1-磷酸鞘氨醇受体 Rho激酶内皮型一氧化氮合酶勃起功能障碍

来源： cnki会议评论

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生物技术通讯 2016年第2期27卷 178-182页

作者：李军郭艳丽薛剑宁世锋于农吕双红刘安恒张孝忠军事医学科学院附属医院心血管内科北京100071

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)不同受体亚型(S1P1、S1P2、S1P3)在大鼠心肌梗死后心室重塑过程中的变化差异。方法:通过结扎大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠心肌梗死模型,在心肌梗死后1、4、8周,采用实时荧光定量PCR的方法,分别检测心脏非... 详细信息

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)不同受体亚型(S1P1、S1P2、S1P3)在大鼠心肌梗死后心室重塑过程中的变化差异。方法:通过结扎大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠心肌梗死模型,在心肌梗死后1、4、8周,采用实时荧光定量PCR的方法,分别检测心脏非梗死区、梗死区、正常对照心肌组织S1P1、S1P2、S1P3的m RNA相对表达。结果:心梗后心室重塑阶段,S1P1 m RNA的表达水平在非梗死区与梗死区的下降程度不一致,1周组非梗死区与正常对照组比较无统计学差异,而在梗死区2组间差异有统计学意义(P<0.05),在梗死区降低趋势更为明显。S1P2 m RNA在术后各组的非梗死区与正常对照心肌之间的表达比较,变化无统计学意义,且各时间点之间无差异,而在梗死区其表达变化较为显著(P<0.01)。S1P3 m RNA在心梗后1周表达显著增强(P<0.01),4周表达出现降低,这种表达抑制在梗死区更为明显(P<0.01和P<0.05)。结论:心室重塑阶段的S1P1、S1P2、S1P3 m RNA表达在非梗死区与梗死区变化不同步且各有特点,这种差异表达可能在心肌梗死后心室重塑过程中有重要意义。

关键词： 1-磷酸鞘氨醇心肌梗死心室重塑 1-磷酸鞘氨醇受体

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1-磷酸鞘氨醇受体的作用机制及研究进展

检验医学与临床 2018年第6期15卷 893-896页

作者：郑力彬黄东广东医科大学广东湛江524000 广东省第二人民医院创伤骨科广州510000

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一类重要的具有生物活性的信号分子,它们参与调节细胞的生长、分化、衰老和死亡等许多重要信号转化[1],S1P作用于1-磷酸鞘氨醇受体(S1PRs)后,能够在许多生理生化过程中起到重要的调节作用[2]。早在1992年,有研究者指... 详细信息

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一类重要的具有生物活性的信号分子,它们参与调节细胞的生长、分化、衰老和死亡等许多重要信号转化[1],S1P作用于1-磷酸鞘氨醇受体(S1PRs)后,能够在许多生理生化过程中起到重要的调节作用[2]。早在1992年,有研究者指出S1P通过一个假定的跨膜受体可以作为细胞外介质,从而控制细胞活性。

关键词： 1-磷酸鞘氨醇受体 1-磷酸鞘氨醇信号通路 1-磷酸鞘氨醇受体调节剂

大肠腺癌中鞘氨醇激酶-1与1-磷酸鞘氨醇受体mRNA和蛋白表达的研究

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大肠腺癌中鞘氨醇激酶-1与1-磷酸鞘氨醇受体mRNA和蛋白表达的研究

作者：金卉广西医科大学

学位级别：硕士

目的：检测鞘氨醇激酶1(SphK1)及1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体(S1P1,2,3)在正常大肠组织、大肠腺瘤、大肠腺癌、伴有远处转移的大肠腺癌组织中的表达情况,探讨SphK1/S1P通路在大肠癌发生发展中的可能作用及其临床意义。方法：收集人大肠腺癌... 详细信息

目的：检测鞘氨醇激酶1(SphK1)及1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体(S1P1,2,3)在正常大肠组织、大肠腺瘤、大肠腺癌、伴有远处转移的大肠腺癌组织中的表达情况,探讨SphK1/S1P通路在大肠癌发生发展中的可能作用及其临床意义。方法：收集人大肠腺癌组织标本24例、大肠腺瘤组织标本12例、正常大肠组织标本12例。应用RT-PCR方法检测各组织标本中SphK1与S1P1,2,3 mRNA表达水平。应用Western Blot方法检测各组织标本SphK1与1-磷酸鞘氨醇受体1(S1P1)的蛋白表达。结果：SphKl mRNA、SI P1 mRNA1 S1P2mRNA1 S1P3mRNA的表达在伴有远处转移的大肠腺癌组织、无远处转移的大肠腺癌、大肠腺瘤、正常大肠组织呈依次递减趋势,各组间比较均有显著的统计学差异(p受体表达异常可能参与了大肠肿瘤的发生发展。

关键词：鞘氨醇激酶-1 1-磷酸鞘氨醇受体大肠腺癌表达