检索结果-南通市图书馆

作者：杨超厦门大学

学位级别：硕士

艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染引起的获得性免疫缺陷综合征。艾滋在世界范围内流行,其中主要是1型HIV病毒给人类健康带来严重威胁。据世界卫生组织(Wor... 详细信息

艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染引起的获得性免疫缺陷综合征。艾滋在世界范围内流行,其中主要是1型HIV病毒给人类健康带来严重威胁。据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)报告,自从HIV被发现以来,被感染者已逾7千万人,2015年底全球仍有3千6百多万艾滋患者,15岁至49岁成人HIV感染率高达0.8%[1]。2012至2014年连续三年,我国艾滋病发病超过4万人/年[2]。目前高活性抗逆转录病毒治疗(Highly Active AntiretroViral Therapy,HAART)已经可以抑制艾滋感染者体内病毒的复制,延长患者寿命并使其可以像健康人一样正常生活。然而抗逆转录药物需要每天服用,37.74%的服药患者出现消化道反应、肝功能异常等副作用[3],而且HAART治疗不能从根源上斩断艾滋的流行,疫苗的研发正是当务之急。HIV-1包膜糖蛋白(envelope glycoprotein,Env)gp160 在成熟过程中水解为 gp120(surface glycoprotein,SU)和gp41(transmembrane protein,TM),这两个蛋白单体通过非共价键结合为异源二聚体,三个二聚体组装成成熟的三聚体刺突铆定在病毒包膜上。病毒入侵宿主细胞时,gp120上的CD4结合位点识别CD4细胞表面受体分子,引发Env变构靠近细胞膜从而发生膜融合,因此包膜蛋白是阻止病毒感染的重要切入点,也是疫苗研究的重要靶点[4]。广谱中和单抗N6,VRC01,b12,2F5等抗体分别针对gp120上的CD4结合位点和 gp41 上的近膜外区(Membrane Proximal External Region,MPER),能够实现对多种型别病毒的高效中和[5,6,7,8]。然而根据这些抗体表位设计的疫苗仍未取得理想的效果。RV144是第一个被证实具有降低HIV-1感染效果的疫苗。实验中,表达 E 亚型 Env 和 B 亚型 Gag(group specific antigen)、Pro(protease)的金丝雀痘病毒载体为初免,B/E亚型gp120和铝佐剂加强免疫,三年半后受试者仍保持31.2%的疫苗保护率[9]。体内具有高水平阻断和结合抗体,可能对艾滋感染有保护作用[9]。另有文献报道,通过对BG505毒株的Env进行改造,可以实现体外的可溶性表达,得到近似天然的蛋白三聚体[10]。重组包膜蛋白BG505 SOSIP.664和B41 SOSIP.664均可在兔子体内诱导得到较强的广谱中和抗体[11]。这些报道对艾滋疫苗的进一步研究提供了新的方向和信心。本研究的目的是通过优化HIV-1 gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现gp140蛋白在哺乳动物细胞HEK293中高效表达,并对纯化获得的蛋白进行抗原性质鉴定。本研究选择B亚型HIV-1 NL4-3基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性连接、三聚体辅助折叠序列等方法优化设计,确定了最终的重组克隆SOSIP(G4S)2 663CO-T4his用于蛋白表达和性质鉴定。此外我们验证了 HIV-1转录反式激活因子(Transactivator of Transcription,Tat)共转HEK293T细胞对gp140蛋白表达的促进作用,并摸索得到最佳的Tat/gp140共转比例。镍柱纯化后,每升培养基可获得0.5mggp140蛋白,目的蛋白纯度约为70%。通过ELISA鉴定发现该重组蛋白具有良好的抗原活性,电镜下呈现均匀的三聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,随着免疫次数增加小鼠血清中和能力逐渐提高,并最终筛选得到10株针对NL4-3毒株的中和单抗,其中两株具有型间交叉中和能力。本研究对B亚型HIV-1NL4-3gp140进行改造、优化转染条件,获得了 gp140三聚体在体外的高效表达,并对其抗原性和免疫原性进行了鉴定,探索了 HEK293系统表达gp140作为重组蛋白疫苗的可行性,为HIV-1包膜蛋白结构研究、疫苗和药物设计奠定基础。

关键词： 1型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白gp140 真核表达免疫原性

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

湖南省HIV-1感染者原发性耐药现况调查

引用

中国感染控制杂志 2023年第4期22卷 451-456页

作者：曹旭健曹静祁慧余维维曾紫微彭勇权王敏南华大学衡阳医学院、长沙市第一医院研究生协作培养基地湖南衡阳421001 长沙市艾滋病研究所、长沙市第一医院湖南长沙410000

目的了解湖南省1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者其基因亚型分布和原发性耐药(PDR)情况,为艾滋病防控及抗病毒治疗(ART)提供参考依据。方法收集湖南省2021年1月—2022年8月某院HIV门诊新确诊并且未接受ART的HIV-1感染者的人口学及流行... 详细信息

目的了解湖南省1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者其基因亚型分布和原发性耐药(PDR)情况,为艾滋病防控及抗病毒治疗(ART)提供参考依据。方法收集湖南省2021年1月—2022年8月某院HIV门诊新确诊并且未接受ART的HIV-1感染者的人口学及流行病学相关数据,采集患者血清,提取核糖核酸,利用In-house的方法采取2轮聚合酶链式反应进行基因扩增,Sanger法对产物进行测序,分析患者临床资料及HIV-1亚型及耐药情况。结果共纳入患者667例,基因型耐药检测失败20例,647例检测成功的新确诊HIV-1感染者纳入研究。53例患者感染的HIV-1株发生PDR,发生率为8.19%,主要集中于男性(88.68%)、未婚(71.70%)、男男性行为(MSM,60.38%)、21~40岁的群体(58.49%),且多为湖南省本地籍居民(98.11%)。共检测出15种HIV-1毒株亚型,主要亚型为CRF_01AE(35.70%)、CRF07_BC(25.19%)、B/C(18.86%)以及CRF55_01B(7.88%)。不同HIV-1亚型患者的PDR发生率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=18.62,P=0.017)。蛋白酶抑制剂(PIs)耐药率为0.15%,核苷酸类逆转录酶抑制剂(NRTIs)耐药率为2.78%,非核苷酸类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药率为6.65%,整合酶抑制剂(INSTIs)耐药率为0.31%。结论湖南省HIV-1毒株亚型分布复杂,PDR发生率已超过世界卫生组织制定的低水平耐药预警线(<5%),应加大感染预防与控制力度,阻断耐药毒株传播。

关键词：艾滋病 1型人类免疫缺陷病毒原发性耐药耐药突变抗病毒治疗

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

不同片段HIV-1膜蛋白三聚体的构建、表达及其免疫原性

引用

中国生物制品学杂志 2014年第2期27卷 145-150页

作者：李勋任丽康延申牛德云郝彦玲何彦平邵一鸣齐智中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206

目的构建、表达不同片段1型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的膜蛋白三聚体,并检测其免疫原性。方法以中国主要流行株HIV-1CRF_07 BC亚型基因为模板构建pFUSE-gp160重组质粒,以pFUSE-gp160为模板构建pFUSE... 详细信息

目的构建、表达不同片段1型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的膜蛋白三聚体,并检测其免疫原性。方法以中国主要流行株HIV-1CRF_07 BC亚型基因为模板构建pFUSE-gp160重组质粒,以pFUSE-gp160为模板构建pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF重组质粒,将重组质粒分别转染293F细胞,转染120 h后,收获上清,经Ni-NTA superflow、nProtein A SepharoseTM4 Fast Flow及Superose 12 Prep Grade分子筛纯化后,分别进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将各重组蛋白联合MF59佐剂经大腿肌肉注射免疫豚鼠,100μg/只,分别于第1、30及60天各免疫1次,初次免疫前7 d及末次免疫后第90天心脏采血,分离血清,ELISA法及假病毒系统分别检测血清特异性抗体效价及中和抗体滴度。结果质粒pFUSE-gp160、pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF经测序鉴定构建正确。各纯化蛋白的SDS-PAGE及Western blot鉴定均可见目的条带,gp120FF和gp140FF均可高通量表达,其表达量分别为6和2.5 mg/L,gp41FF、N55FF和N28FF蛋白的表达量均低于0.5 mg/L,纯化后的纯度均较高。gp140FF组和gp120FF组豚鼠血清抗体效价分别为3.2×105和5.33×105、中和抗体滴度分别为405和462,均显著高于其他组(P免疫反应和中和抗体,本实验为HIV-1疫苗的研发提供了参考。

关键词： 1型人类免疫缺陷病毒膜蛋白三聚体免疫原性

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

2013年江西省HIV-1耐药警戒线调查

引用

中国卫生检验杂志 2015年第3期25卷 425-428页

作者：张娜蒋岩廖清华刘丽萍易志强姚均江西省疾病预防控制中心江西南昌330029 中国疾病预防控制中心性病艾滋病中心北京102206

目的了解2013年江西省HIV-1耐药株的传播水平。方法采用WHO的二项顺序抽样法,随机抽取2013年江西省16岁-25岁符合耐药警戒线调查标准的HIV-1感染者血浆样本,提取病毒RNA,采用RT-PCR和巢式PCR扩增HIV pol区基因片段进行原发耐药基因变异... 详细信息

目的了解2013年江西省HIV-1耐药株的传播水平。方法采用WHO的二项顺序抽样法,随机抽取2013年江西省16岁-25岁符合耐药警戒线调查标准的HIV-1感染者血浆样本,提取病毒RNA,采用RT-PCR和巢式PCR扩增HIV pol区基因片段进行原发耐药基因变异分析。结果 47个研究对象的HIV亚型有CRF07_BC、CRF01_AE和B＇亚型,分别占51.06%（24/47）、42.55%（20/47）和6.38%（3/47）,其中CRF07_BC和CRF01_AE为主要亚型;不同传播途径的感染者中,HIV亚型分布差异无统计学意义。47份样本中仅有1份来自异性性接触感染者的样本存在RT区耐药突变位点（M184V）。结论 2013年江西省HIV-1耐药株的传播水平为低度（〈5%）,个体在抗病毒治疗前尚不需要进行耐药检测。但是随着抗病毒治疗规模的逐步扩大,有必要继续加强HIV耐药株传播的监测工作。

关键词： 1型人类免疫缺陷病毒耐药警戒线调查

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论