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1,25-维生素-d3体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的最适浓度

解剖学报 2019年第5期50卷 580-588,607页

作者：刘洋吕洋王浩宇李娇任君旭王海萍河北北方学院基础医学院组织学胚胎学教研室

目的探讨1,25-维生素d3(1,25-vitamin-d3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养Sd大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-d3对第2代BMSCs进行定向诱... 详细信息

目的探讨1,25-维生素d3(1,25-vitamin-d3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养Sd大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-d3对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。应用免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测诱导后4周的BMSCs原肌球蛋白(TPM)、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。运用透射电子显微镜观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。在诱导后1、2和4周这3个时间点,以Real-time PCR法检测细胞心肌早期转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、Nkx2.5的表达。结果 1.倒置相差显微镜下观察,原代细胞培养72 h后,大部分细胞呈短梭形;培养1周后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4周的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。不同浓度1,25-vitamin-d3诱导后的BMSCs,其数量及形态存在差异。2.流式细胞术的鉴定结果显示,Cd29、Cd45、Cd90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。3.免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测不同浓度1,25-vitamin-d3诱导4周后的BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中6 nmol/L组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(P3组(P25-vitamin-d3可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,其诱导分化最适浓度为6 nmol/L。

关键词：骨髓间充质干细胞 1,25-维生素-d3 心肌样细胞细胞分化免疫印迹法大鼠

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