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基于肾脑相关的龟鹿二仙膏抗阿尔茨海默病作用及其机制

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中国实验方剂学杂志 2022年第9期28卷 158-167页

作者：祁晓鸣刘晓琴苏晓娟熊超郝永熙李港静孟祥龙张朔生山西省中医药大学中药与食品工程学院中药炮制山西省重点实验室山西晋中030619

目的:基于“肾脑相关”理论,探讨龟鹿二仙膏对氢化可的松联合β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型的作用及其机制。方法:采用腹腔注射氢化可的松并脑室注射Aβ诱导大鼠AD模型,龟鹿二仙膏不同浓度进行干预。测定大鼠的海马... 详细信息

目的:基于“肾脑相关”理论,探讨龟鹿二仙膏对氢化可的松联合β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型的作用及其机制。方法:采用腹腔注射氢化可的松并脑室注射Aβ诱导大鼠AD模型,龟鹿二仙膏不同浓度进行干预。测定大鼠的海马、肾脏和肾上腺指数;采用Morris水迷宫实验观察大鼠空间学习记忆能力;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清样品中皮质酮(CORT)及睾酮(T)水平;液相色谱-质谱联用(LC-MS)代谢组学技术采集和分析模型大鼠血清代谢数据;利用中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)、中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)和中医药综合数据库(TCMID)收集龟鹿二仙膏活性成分及相应靶点;利用人类基因数据库(GeneCards)和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索得到的AD相关靶标信息;构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路富集分析、基因本体论(GO)富集分析;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织中白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果:与模型组比较,龟鹿二仙膏高、中、低剂量组海马指数、肾脏指数和肾上腺指数均显著升高,其中龟鹿二仙膏高剂量组升高最为显著(P龟鹿二仙膏高、低剂量组大鼠穿越平台次数均显著增加(P龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠血清CORT含量均显著降低(P龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠海马组织中IL-6表达水平均显著降低(P龟鹿二仙膏可显著改善氢化可的松并Aβ诱导的AD模型大鼠认知功能障碍,降低血清CORT,抑制海马组织炎症因子IL-6表达,并调节AD模型大鼠的代谢水平,为其临床应用提供依据。

关键词：肾脑相关龟鹿二仙膏阿尔茨海默病代谢组学网络药理学

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龟鹿二仙膏治疗肾虚证少弱精子症的临床研究

龟鹿二仙膏治疗肾虚证少弱精子症的临床研究

作者：任杰湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察龟鹿二仙膏对肾虚证少弱精子症的治疗效果,以及药物的安全性研究。通过对比其治疗前后精子浓度、向前运动精子百分率、精子存活率及中医证候量化评分,评价龟鹿二仙膏治疗肾虚证少弱精子症的有效性及安全性,为临床运用龟鹿二仙... 详细信息

目的:观察龟鹿二仙膏对肾虚证少弱精子症的治疗效果,以及药物的安全性研究。通过对比其治疗前后精子浓度、向前运动精子百分率、精子存活率及中医证候量化评分,评价龟鹿二仙膏治疗肾虚证少弱精子症的有效性及安全性,为临床运用龟鹿二仙膏治疗少弱精子症提供一定的依据。方法:在2021年6月-2022年12月在湖南中医药大学第一附属医院男性病外科杂病科门诊患者中,选取符合纳入标准的肾虚证少弱精子症患者60例,按随机数字表法分为试验组与对照组各30例,试验组患者采用龟鹿二仙膏治疗,对照组采用五子衍宗软胶囊治疗,共治疗90天,对比两组患者治疗前后疗效性指标(精子浓度、向前活动百分率、存活率)及中医证候量化评分,将两组受试患者临床数运用SPSS2 5.0版本统计学软件进行统计分析,得出临床观察结论。结果:共60例患者完成了为期3个月的临床研究,其后随访1月,统计结果:1.治疗前两组在病程、年龄及相应的观察指标差异均无统计学意义(P>0.0 5),具有可比性。2.组内对比:两组精液常规分析治疗前与治疗90天对比,差异均具有统计学意义性(P龟鹿二仙膏对于肾虚证少弱精子症具有较好的治疗效果,在停药后药效持久,在维持较高临床疗效方面更具优势,且有较高的安全性。

关键词：龟鹿二仙膏少弱精子症肾虚证

基于靶向代谢组学的加味龟鹿二仙膏干预高龄肾气虚型低预后患者IVF结局的机制

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基于靶向代谢组学的加味龟鹿二仙膏干预高龄肾气虚型低预后患者IV...

作者：马英杰山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究补肾益精之加味龟鹿二仙膏对高龄肾气虚型低预后不孕患者体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）结局的影响,并运用靶向代谢组学技术从代谢组学角度验证分析中药对改善高龄肾气虚型低预后患者的... 详细信息

目的:研究补肾益精之加味龟鹿二仙膏对高龄肾气虚型低预后不孕患者体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）结局的影响,并运用靶向代谢组学技术从代谢组学角度验证分析中药对改善高龄肾气虚型低预后患者的作用机制,明确相关代谢通路,为改善高龄低预后不孕患者提供代谢生物标志物依据和临床治疗思路。方法:本研究为双盲、随机、安慰剂对照试验,共选取119例于山东省中西医结合生殖与遗传中心行IVF-ET的不孕患者。80例接受IVF的高龄低预后不孕症患者根据R语言version 3.5.1生成表随机分成高龄治疗组和高龄安慰剂组,其中40人为治疗组,给予加味龟鹿二仙膏治疗,40人为安慰剂组,给予安慰剂治疗,另选取因男方因素而行IVF-ET或ICSI的年轻健康女性39例,为正常对照组。三组均采用灵活Gn RH拮抗剂方案促排卵,加味龟鹿二仙膏和安慰剂从月经第三天至IVF前用药。主要观察指标:获卵数、2PN受精数、可用胚胎总数、囊胚总数、优质胚胎总数,次要观察指标:Gn天数、Gn总量、HCG日雌激素、HCG日孕激素、鲜胚临床妊娠率、冻胚临床妊娠率。采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪（UHPLC-QTRAP MS）进行检测三组样本中的代谢物,其中治疗组23例,安慰剂组21例,正常对照组21例,并对结果进行单变量统计分析、多维统计分析、差异代谢物筛选、差异代谢物相关性分析、KEGG通路分析。结果:1.最终有114例患者完成了本试验,其中治疗组38例,安慰剂组37例,正常对照组39例。2.治疗组中医肾气虚证候总积分低于安慰剂组差异具有统计学意义（P﹤0.001）;单项证候积分表现中“腰骶酸痛、头晕耳鸣、疲倦乏力、小便清长”的积分均低于治疗前,差异具有统计学意义（P﹤0.05）,“月经量时多时少、大便不成形、失眠健忘、口燥咽干、畏寒肢冷”的积分变化没有统计学意义（P﹥0.05）,但有改善的趋势。3.治疗组与安慰剂组相比获卵数、2PN受精数、优质胚胎数、可用胚胎总数和HCG日雌激素均有提高,差异具有统计学意义（P﹤0.05）,鲜胚临床妊娠率与冻胚临床妊娠率,但无统计学意义（P﹥0.05）。4.靶向代谢组学分析结果显示治疗组卵泡液与正常青年组发生聚集,与安慰剂组发生偏离。在高龄肾气虚型低预后患者与正常青年组患者的卵泡液中共发现55种显著性差异代谢物,主要包括氨基酸类、脂肪酸类、胆汁酸类、吲哚类、羟基酸类、二元羧酸类,主要涉及Protein digestion and absorption、Glycine,serine and threonine metabolism、Biosynthesis of amino acids、Nicotinate and nicotinamide metabolism等代谢途径。5.加味龟鹿二仙膏干预后,L-Aspartic acid、Glycine、L-Serine、Palmitoleic Acid、Palmitelaidic acid、L-Alanine、Gamma-Linolenic acid、Alpha-Linolenic Acid、N-acetyltryptophan等代谢物发生下调,主要涉及氨基酸代谢和脂肪酸代谢。结论:1.加味龟鹿二仙膏能有效改善高龄肾气虚型低预后患者临床症状和IVF结局。2.高龄肾气虚型低预后患者与正常妇女卵泡液代谢物存在差异,其中L-Aspartic acid、L-Alanine、Aminoadipic acid、L-Asparagine、L-Arginine、L-Serine、Gamma-Linolenic acid、Pentadecanoic acid、Alpha-Linolenic Acid这9种代谢物与高龄肾气虚型低预后患者关系密切,推断可能成为生物标志物。3.加味龟鹿二仙膏干预的作用机制可能主要通过氨基酸代谢和脂肪酸代谢调节。

关键词：靶向代谢组学高龄低预后肾气虚型龟鹿二仙膏体外受精-胚胎移植

龟鹿二仙膏联合维生素E对少精弱精症患者疗效及性激素影响

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中国医药科学 2023年第9期13卷 9-12,29页

作者：任杰易港符方智林群芳周青湖南中医药大学第一附属医院男性病·外科杂病科湖南长沙410208

目的探讨对少精弱精症患者采用龟鹿二仙膏联合维生素E治疗的临床效果及对性激素的影响。方法选取2021年6月至2022年12月于湖南中医药大学第一附属医院男性病·外科杂病科收治的少精弱精症患者84例为研究对象,按治疗方式的不同将其分为... 详细信息

目的探讨对少精弱精症患者采用龟鹿二仙膏联合维生素E治疗的临床效果及对性激素的影响。方法选取2021年6月至2022年12月于湖南中医药大学第一附属医院男性病·外科杂病科收治的少精弱精症患者84例为研究对象,按治疗方式的不同将其分为对照组(n=42)及试验组(n=42)。对照组给予维生素E治疗,试验组给予龟鹿二仙膏联合维生素E治疗。比较两组临床疗效、精液参数及性激素水平。结果治疗后,试验组临床总有效率为83.33%,高于对照组的69.04%,差异有统计学意义(P0.05);治疗后,试验组精子密度、精子总数、精子总活力均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗前,两组患者睾酮(T)、雌二醇(E_(2))、卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)、黄体生成素(LH)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,试验组T、E_(2)、FSH、PRL、LH水平均优于对照组,差异有统计学意义(P龟鹿二仙膏联合维生素E对少精弱精症患者有良好的治疗效果,不仅能显著提高患者精液参数,还能改善其性激素水平。

关键词：龟鹿二仙膏维生素E 少精弱精症性激素精液参数

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龟鹿二仙膏对人子宫内膜基质增殖及纤维连接蛋白表达的影响

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中国老年学杂志 2016年第13期36卷 3135-3137页

作者：尚冰丛培玮王轶蓉吴兆利辽宁中医药大学中医文献研究院辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学教学实验中心辽宁中医药大学附属医院妇产科辽宁中医药大学针灸推拿学院

目的观察龟鹿二仙膏对人子宫内膜基质细胞(h ESCs)增殖功能,纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法体外培养h ESCs,细胞贴壁达75%后对细胞纯度通过免疫组化法进行鉴定。实验分成对照组、10-4mol/L龟鹿二仙膏组、10-6mol/L龟鹿二仙膏组、10-8... 详细信息

目的观察龟鹿二仙膏对人子宫内膜基质细胞(h ESCs)增殖功能,纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法体外培养h ESCs,细胞贴壁达75%后对细胞纯度通过免疫组化法进行鉴定。实验分成对照组、10-4mol/L龟鹿二仙膏组、10-6mol/L龟鹿二仙膏组、10-8mol/L龟鹿二仙膏组及雌二醇组,各组细胞无血清培养同步化24 h后,选取24 h、36 h、48 h分别处理细胞。应用MTT比色法检测细胞增殖率;Real-time PCR法检测细胞FN基因的相对表达量;Western印迹法检测细胞FN蛋白含量。结果细胞波形蛋白鉴定阳性率达95%。龟鹿二仙膏含药血清对h ESCs增殖呈时间及剂量依赖性,10-4mol/L龟鹿二仙膏组在培养36 h、48 h后能显著上调细胞增殖率。FN mRNA及蛋白表达在10-4mol/L龟鹿二仙膏组作用72 h后上升最为显著,明显高于对照组(P二醇组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论 10-4mol/L龟鹿二仙膏可显著促进h ESCs增殖,且呈时间及剂量依赖性。可在分子水平上调FN表达,可能与其治疗女性生殖健康机制相关。

关键词：龟鹿二仙膏子宫内膜基质细胞纤维连接蛋白雌二醇

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龟鹿二仙膏改善围绝经期女性骨质疏松的机制

中国老年学杂志 2016年第12期36卷 2847-2850页

作者：尚冰丛培玮张丽娜吴兆利辽宁中医药大学中医文献研究院辽宁中医药大学教学实验中心辽宁中医药大学针灸推拿学院

目的观察龟鹿二仙膏对人子宫内膜基质细胞(hESCs)增殖和胰岛素样生长因子(IGF)-1表达的影响。方法体外培养hESCs,6孔培养板细胞贴壁达75%~85%后对细胞纯度通过免疫组化法进行鉴定。细胞无血清培养同步化24 h后,龟鹿二仙膏采用不同浓度(1... 详细信息

目的观察龟鹿二仙膏对人子宫内膜基质细胞(hESCs)增殖和胰岛素样生长因子(IGF)-1表达的影响。方法体外培养hESCs,6孔培养板细胞贴壁达75%~85%后对细胞纯度通过免疫组化法进行鉴定。细胞无血清培养同步化24 h后,龟鹿二仙膏采用不同浓度(10^(-4)、10^(-6)、10^(-8)mol/L)处理细胞48 h,MTT法测定三个浓度下24、36、48 h龟鹿二仙膏对h ESCs增殖的影响,Real-time PCR和Western印迹法检测24、36、48 h子宫内膜基质细胞IGF-1 mRNA相对表达量和蛋白含量。结果细胞鉴定波形蛋白阳性率高达95%;10^(-4)、10^(-6)、10^(-8)mol/L龟鹿二仙膏组和雌二醇组细胞增殖率显著升高,呈时间依赖性(P龟鹿二仙膏组细胞增殖明显高于10^(-6)、10^(-8)mol/L组(P龟鹿二仙膏组可显著促进IGF-1 mRNA的表达和IGF-1蛋白含量(P龟鹿二仙膏能够显著促进hESCs增殖,升高IGF-1mRNA的表达和IGF-1蛋白含量。

关键词：龟鹿二仙膏子宫内膜基质细胞骨质疏松胰岛素样生长因子1

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龟鹿二仙膏的药理学研究

中成药 2000年第12期22卷 860-861页

作者：郑本端罗自文鄂州市药物研究所湖北鄂州436000 鄂州市制药厂湖北鄂州436000

龟鹿二仙膏为古方,明代(1569年)王三才著《医便》记述详细[1],为胶剂.1949年后,本方仍以胶剂收入《中国药典》1963年版一部.1990年,载入《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册,为煎膏剂.

关键词：龟鹿二仙膏药理学中药小鼠

龟鹿二仙膏对GIOP大鼠骨组织组蛋白去甲基化酶JMJD3表达影响的实验研究

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龟鹿二仙膏对GIOP大鼠骨组织组蛋白去甲基化酶JMJD3表达影响的实...

作者：张骞予辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:基于中医“肾藏精”理论,观察使用补肾填精中药复方龟鹿二仙膏,对糖皮质激素性骨质疏松大鼠的实验疗效,以及该实验过程中组蛋白去甲基化酶JMJD3、成骨相关蛋白RUNX2、OSTERIX的表达变化情况。材料与方法:选用12周清洁级Wistar雌性... 详细信息

目的:基于中医“肾藏精”理论,观察使用补肾填精中药复方龟鹿二仙膏,对糖皮质激素性骨质疏松大鼠的实验疗效,以及该实验过程中组蛋白去甲基化酶JMJD3、成骨相关蛋白RUNX2、OSTERIX的表达变化情况。材料与方法:选用12周清洁级Wistar雌性大鼠60只,分成6组,每组10只,具体各组名称为:正常组(CON组)、模型组(DXM组)、龟鹿二仙膏低剂量组(LD组)、龟鹿二仙膏中剂量组(MD组)、龟鹿二仙膏高剂量组(HD组)、阿仑膦酸钠组(AL组)。适应性饲养一周后,除CON组以外,其余组别均给予地塞米松注射,给药剂量依照0.5ml/100g体重为标准,每周两次,该过程持续8周,使GIOP大鼠模型得以建立。8周之后,除CON组与DXM组,其余组别按照组别给予相应药物及相应剂量灌胃,该过程持续8周。末次给药后,麻醉后取大鼠腰椎用于骨密度的检测,取右侧股骨上端,制作股骨头病理切片,用于HE染色与MASSON染色,观测用药后大鼠骨微结构的变化;取左侧股骨骨组织进行实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)和WES全自动蛋白质印迹定量分析,用于检测组蛋白去甲基化酶JMJD3,以及成骨蛋白RUNX2、OSTERIX的m RNA与蛋白表达变化情况。结果:1.影像学检测结果双能X线骨密度仪检测所得结果显示:与CON组相比,DXM组骨密度值明显降低(P龟鹿二仙膏在影像学方面,对GIOP大鼠起到一定作用,且MD组起到提升骨密度的最佳效果。2.组织形态学检测HE染色结果显示:与CON组相比,在相同视野下,DXM组可见骨小梁间距增大,骨小梁变细,骨小梁相对面积百分比下降(P龟鹿二仙膏影响GIOP大鼠的实验过程中,组蛋白去甲基化可能参与了该实验过程;与DXM组相比,LD组、MD组、HD组、AL组四组中,成骨相关蛋白RUNX2、OSTERIX的表达均有显著提升(P龟鹿二仙膏影响GIOP大鼠实验过程中,通过调节组蛋白去甲基化酶JMJD3含量变化,提示组蛋白去甲基化作用可能参与了该实验过程。2.补肾填精中药复方龟鹿二仙膏影响GIOP大鼠的过程中,能够提高成骨相关蛋白RUNX2、OSTERIX的表达,并且其中MD组在影像学、组织形态学、分子生物学三个方面中均表现最佳。

关键词：龟鹿二仙膏糖皮质激素性骨质疏松组蛋白去甲基化酶JMJD3 RUNX2 OSTERIX

龟鹿二仙膏对阳虚型少弱精子症大鼠的改善作用及CFTR蛋白表达的影响

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中医药信息 2021年第6期38卷 15-20页

作者：胡海林刘子毓何清湖周兴湖南中医药大学湖南长沙410036 湘潭县中医医院湖南湘潭411228 湖南医药学院湖南怀化418002 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的:观察龟鹿二仙膏对少弱精子症大鼠的改善作用以及睾丸囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)蛋白表达的影响。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、龟鹿二仙膏组、右归丸组和左卡尼汀组,除正常组外,其余均采用灌胃腺嘌呤造成... 详细信息

目的:观察龟鹿二仙膏对少弱精子症大鼠的改善作用以及睾丸囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)蛋白表达的影响。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、龟鹿二仙膏组、右归丸组和左卡尼汀组,除正常组外,其余均采用灌胃腺嘌呤造成少弱精子症模型,正常组和模型组给予生理盐水,其余各组灌胃相应药物28 d,最后一次灌胃后24 h处死,剪碎附睾,观察各组精子浓度及活力;采用Western Blot检测睾丸CFTR蛋白表达。结果:与模型组相比,龟鹿二仙膏组大鼠,阳虚症状得到相应的改善;并且龟鹿二仙膏组大鼠的睾丸组织得到一定程度的修复。正常组、龟鹿二仙膏组、右归丸组、左卡尼汀组精子密度、精子活力均高于模型组,差异具有统计学意义(P龟鹿二仙膏组、右归丸组、左卡尼汀组的CFTR蛋白的表达量均高于模型组,差异具有统计学意义(P龟鹿二仙膏能改善腺嘌呤所致少弱精子症大鼠的精子密度及活力,并且提高了其睾丸CFTR蛋白的表达。

关键词：龟鹿二仙膏腺嘌呤少弱精子症 CFTR