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龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性及动力学影响的研究

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中国药学杂志 2011年第8期46卷 589-594页

作者：高世勇苏怡君季宇彬哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所博士后科研工作站哈尔滨150076 黑龙江中医药大学中药学博士后科研流动站哈尔滨150040 国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心哈尔滨150076

目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的芳香胺N-乙酰化转移酶(NAT)1的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性。观察不同浓度、不同时间龙葵... 详细信息

目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的芳香胺N-乙酰化转移酶(NAT)1的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性。观察不同浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响;通过改变底物PABA浓度,采用双倒数作图法,以底物PABA浓度的倒数(1/S)对NAT1反应速率的倒数(1/V)作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax。结果在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性;随着作用时间的增加Ac-PABA生成的量逐渐增加,但在相同作用时间段龙葵碱能显著降低Ac-PABA生成的量。动力学研究表明,以PABA为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为(1.04×10-3±8.36×10-5)mmol.L-1、(1.64×10-4±9.57×10-6)nmol.106cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(1.06×10-3±6.97×10-5)mmol.L-1和(1.48×10-4±4.28×10-6)nmol.106cells-1.h-1。对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为(3.32×10-1±2.35×10-4)mmol.L-1、(2.60×10-3±6.79×10-6)*** pro-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(3.35×10-1±1.66×10-4)mmol.L-1和(2.22×10-3±8.12×10-6)***(Pro)-1,经统计学处理表明,对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax差异显著。结论龙葵碱是HepG2细胞NAT1酶的非竞争性抑制剂。龙葵碱通过作用于NAT1与PABA结合位点以外的其他位点抑制NAT1酶的活性而诱导HepG2细胞凋亡。

关键词：龙葵碱 HepG2人肝癌细胞 N-乙酰化转移酶米氏常数最大反应速率

龙葵碱调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG2细胞凋亡的研究

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中草药 2009年第10期40卷 1607-1612页

作者：高世勇徐丽丽季宇彬哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所博士后科研工作站黑龙江哈尔滨150076 国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心黑龙江哈尔滨150076

目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspas... 详细信息

目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化。结果在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。结论龙葵碱通过降低Bcl-2/Bax的值,激活caspase-3酶活性诱导HepG2细胞凋亡。

关键词：龙葵碱细胞凋亡 caspase-3 Bcl-2 Bax

龙葵碱调控还原型谷胱甘肽和活性氧氧化还原体系损伤线粒体超微结构诱导HepG2细胞凋亡

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中草药 2009年第11期40卷 1779-1784页

目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡与线粒体损伤的关系。方法倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率。透射电镜观察细胞线粒体超微结构,CDFH-DA染色激光共聚焦扫描显微术... 详细信息

目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡与线粒体损伤的关系。方法倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率。透射电镜观察细胞线粒体超微结构,CDFH-DA染色激光共聚焦扫描显微术检测活性氧(ROS)相对量,比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)量。结果龙葵碱组HepG2细胞贴壁细胞数量减少,部分出现死亡。Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微镜下观察发现龙葵碱组细胞Annexin V-FITC高染,细胞膜呈绿色荧光;PI低染,细胞核呈红色荧光,呈现明显的早期凋亡特征。流式细胞术分析0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h后,早期凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。透射电镜观察发现龙葵碱作用HepG2细胞24 h,细胞线粒体超微结构出现肿胀,嵴排列紊乱、嵴消失,重度空泡样变性等变化;细胞内ROS水平升高,GSH的水平降低。结论龙葵碱通过降低HepG2细胞内GSH量,使ROS不能被及时清除而损伤线粒体结构,导致HepG2细胞凋亡。

关键词：龙葵碱细胞凋亡线粒体活性氧(ROS) 还原型谷胱甘肽(GSH)

龙葵碱对白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其分子机制

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肿瘤 2017年第12期37卷 1276-1281页

作者：朱聪贾秀红伊英杰李有杰滨州医学院附属医院儿科山东滨州256603 滨州医学院肿瘤分子生物学重点实验室山东烟台264003

目的:研究中药龙葵碱对白血病耐药细胞株K562/ADR多药耐药性的影响,并进一步探讨其作用机制。方法:不同质量浓度(5~40μg/mL)的龙葵碱单独或联合多柔比星(doxorubicin,DOX)作用K562/ADR细胞24 h后,采用CCK-8法检测龙葵碱的细胞毒性及对... 详细信息

目的:研究中药龙葵碱对白血病耐药细胞株K562/ADR多药耐药性的影响,并进一步探讨其作用机制。方法:不同质量浓度(5~40μg/mL)的龙葵碱单独或联合多柔比星(doxorubicin,DOX)作用K562/ADR细胞24 h后,采用CCK-8法检测龙葵碱的细胞毒性及对DOX的增敏作用;FCM法检测细胞内DOX平均荧光强度的变化;蛋白质印迹法检测多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)和磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)的表达变化。结果:无毒剂量(5和10μg/mL)的龙葵碱可明显增强DOX对K562/ADR细胞的毒性(P值均龙葵碱处理后,K562/ADR细胞中MRP1和p-JNK蛋白的表达水平均明显下调(P值均龙葵碱在体外可有效逆转K562/ADR细胞的多药耐药性,其机制可能与阻滞JNK信号通路并下调MRP1表达有关。

关键词：白血病髓样抗药性肿瘤多药耐药相关蛋白质类龙葵碱

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龙葵碱对U251细胞增殖及凋亡的影响

中草药 2017年第10期48卷 2081-2086页

作者：郭玲盛华均刘茜杨清华朱淑娟重庆医科大学重庆400016

目的探讨龙葵碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法使用不同质量浓度的龙葵碱处理U251细胞,采用CCK-8法、划痕法、Transwell法、Hochest法、流式细胞术、免疫印迹法分别检测细胞增殖率、细胞迁移与侵袭、细胞凋亡及凋亡相关蛋白... 详细信息

目的探讨龙葵碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法使用不同质量浓度的龙葵碱处理U251细胞,采用CCK-8法、划痕法、Transwell法、Hochest法、流式细胞术、免疫印迹法分别检测细胞增殖率、细胞迁移与侵袭、细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果龙葵碱对U251细胞的48 h半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μg/μL,其质量浓度在5～35μg/μL时,能够抑制细胞增殖(P龙葵碱组抑制细胞迁移和侵袭的能力随药物质量浓度增高而增强(P龙葵碱可使凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达降低,Bcl-2/Bax值降低。结论龙葵碱在有效剂量(5～35μg/μL)对U251细胞增殖生长具有抑制作用,并呈浓度依赖性;龙葵碱可抑制U251细胞的侵袭与迁移,可以影响凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax值降低,从而抑制U251细胞的增殖生长。

关键词：龙葵碱人胶质瘤细胞U251 增殖凋亡迁移侵袭

龙葵碱对HepG2人肝癌细胞NAT酶动力学常数的影响

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中国药理学通报 2008年第9期24卷 1187-1191页

作者：季宇彬高世勇汲晨锋邹翔哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所博士后科研工作站

目的探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响。方法MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌3种肿瘤细胞株的细胞毒作用,采用高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为... 详细信息

目的探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响。方法MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌3种肿瘤细胞株的细胞毒作用,采用高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在以HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法,以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax。结果MTT法测定表明龙葵碱对HepG2人肝癌细胞比较敏感,酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为(2.37×10-3±8.37×10-5)mmol.L-1、(9.16×10-4±7.54×10-5)nmol.106cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(2.22×10-3±9.05×10-5)mmol.L-1和(5.14×10-4±3.72×10-5)nmol.106cells-1。对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为(8.95×10-3±2.61×10-4)mmol.L-1、(2.55×10-6±1.92×10-8)μ***-1g-1Pro,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(9.48×10-3±3.63×10-4)mmol.L-1和(2.43×10-6±1.32×10-8)μ***-1g-1Pro,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax差异有显著性(完整细胞P龙葵碱是HepG2人肝癌细胞NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂。

关键词：龙葵碱 HepG2人肝癌细胞 NAT酶米氏常数最大反应速率

龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响

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中草药 2012年第1期43卷 111-114页

作者：季宇彬刘家源高世勇哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心黑龙江哈尔滨150076 国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心黑龙江哈尔滨150076

目的研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响。方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白(MAP-2)的变化。结果龙葵碱对MCF-7细胞的I... 详细信息

目的研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响。方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白(MAP-2)的变化。结果龙葵碱对MCF-7细胞的IC50为22.08μg/mL,能够将MCF-7细胞阻滞于S期;能够增加MCF-7细胞内α-微管蛋白和MAP-2的量。结论龙葵碱通过升高MCF-7细胞内的微管蛋白及MAP-2的表达,将MCF-7细胞阻滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。

关键词：龙葵碱乳腺癌MCF-7细胞细胞周期微管蛋白细胞增殖

龙葵碱诱导HepG_2细胞凋亡的线粒体通路研究

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中国药学杂志 2008年第4期43卷 272-275页

作者：季宇彬高世勇哈尔滨商业大学生命科学与环境研究中心药物研究所博士后科研工作站哈尔滨150076

目的观察龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG2细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG2细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体... 详细信息

目的观察龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG2细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG2细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca2+]i的变化。结果龙葵碱对HepG2细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG2细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca2+]i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca2+顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca2+浓度启动细胞凋亡机制。

关键词：龙葵碱 HepG2 人肝癌细胞内Ca^2+ 膜电位激光共聚焦扫描显微术

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龙葵碱损伤睾丸支持细胞诱导生精障碍的研究

中国新药杂志 2018年第13期27卷 1544-1548页

作者：郎朗狄静波石磊王戈哈尔滨商业大学中药学博士后科研流动站哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心

目的:通过龙葵碱对睾丸支持细胞的损伤研究,阐释龙葵碱诱导生精障碍的途径。方法:选取小鼠睾丸的支持细胞进行实验,体外实验观察流式细胞仪检测细胞的周期变化,Cyclin A和CDK2蛋白的表达;激光共聚焦检测细胞早期凋亡形态;免疫组化法测... 详细信息

目的:通过龙葵碱对睾丸支持细胞的损伤研究,阐释龙葵碱诱导生精障碍的途径。方法:选取小鼠睾丸的支持细胞进行实验,体外实验观察流式细胞仪检测细胞的周期变化,Cyclin A和CDK2蛋白的表达;激光共聚焦检测细胞早期凋亡形态;免疫组化法测定支持细胞波形蛋白表达;体内实验Western blot法测定雄激素结合蛋白(ABP蛋白)表达。结果:龙葵碱引起支持细胞S期周期阻滞;降低睾丸支持细胞内Cyclin A和CDK2蛋白的表达量;细胞出现早期凋亡的形态学特征;龙葵碱使支持细胞波形蛋白解聚消失;ABP蛋白的表达显著下降(P龙葵碱通过周期阻滞诱导睾丸支持细胞出现凋亡,同时对支持细胞的骨架和分泌功能产生影响造成生精障碍。

关键词：龙葵碱睾丸支持细胞周期阻滞