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龙胆苦苷对肝纤维化大鼠TGF-β1和TIMP-1表达的影响

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中国老年学杂志 2023年第21期43卷 5292-5295页

作者：苗长瑜刘东璞杨晓帆张辉佳木斯大学基础医学院微生态-免疫调节网络与相关疾病重点实验室黑龙江佳木斯154000

目的研究龙胆苦苷对大鼠肝纤维化中肝脏中的转化生长因子(TGF)-β1和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1表达水平的影响。方法80只雄性SD大鼠正常喂养2 w后随机分成4组,正常组5只,模型组、秋水仙碱组、龙胆苦苷组各25只。各组均普通饲料喂养... 详细信息

目的研究龙胆苦苷对大鼠肝纤维化中肝脏中的转化生长因子(TGF)-β1和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1表达水平的影响。方法80只雄性SD大鼠正常喂养2 w后随机分成4组,正常组5只,模型组、秋水仙碱组、龙胆苦苷组各25只。各组均普通饲料喂养。模型组、秋水仙碱组和龙胆苦苷组每周腹腔注射2次40%四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液(1 ml/kg),正常组和模型组每周灌胃10 ml/kg的生理盐水3次,龙胆苦苷组每周灌胃龙胆苦苷(100 mg/kg)3次,秋水仙碱组每周灌胃秋水仙碱(0.12 mg/kg)3次,龙胆苦苷与秋水仙碱均溶于生理盐水中,按10 ml/kg灌胃。实验中实时监测大鼠体质量变化。在第3、5、7周各处死1只大鼠,取肝组织,进行苏木素-伊红(HE)染色观察肝纤维化程度。第8周处死全部大鼠,取肝脏进行HE、Masson、免疫组化染色。结果HE和Masson染色结果显示:正常组肝组织无纤维化,与正常组相比,模型组肝组织肝小叶结构被破坏,大量纤维间隔形成。与模型组相比较,秋水仙碱组与龙胆苦苷组肝纤维化程度较模型组均显著改善(P龙胆苦苷组的治疗效果相比较无显著性差异(P>0.05)。经免疫组化检测结果显示:TGF-β1和TIMP-1在正常组肝组织中无表达,在模型组中表达强阳性,在秋水仙碱组、龙胆苦苷组中的表达量较模型组显著下降(P龙胆苦苷组表达相比较无显著性差异(P>0.05)。结论龙胆苦苷可能通过降低大鼠肝组织中TGF-β1和TIMP-1表达水平,降低肝纤维化程度,从而实现对大鼠肝脏纤维化的预防治疗作用。

关键词：肝纤维化龙胆苦苷基质金属蛋白酶抑制剂-1 转化生长因子β1

基于近红外光谱的小波变换结合正交匹配追踪建立秦艽中龙胆苦苷的定量分析模型

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理化检验（化学分册） 2023年第7期59卷 812-817页

作者：陈方方李四海丁跃武杨友甘肃中医药大学信息工程学院兰州730000

针对近红外光谱高维小样本数据以及信号具有稀疏先验的特点,提出了小波变换(WT)结合正交匹配追踪(OMP)建立秦艽中龙胆苦苷定量分析模型的方法。将204个秦艽样品按照Kennard-Stone法以3∶1的比例进行划分,得到153个校正集样品和51个测试... 详细信息

针对近红外光谱高维小样本数据以及信号具有稀疏先验的特点,提出了小波变换(WT)结合正交匹配追踪(OMP)建立秦艽中龙胆苦苷定量分析模型的方法。将204个秦艽样品按照Kennard-Stone法以3∶1的比例进行划分,得到153个校正集样品和51个测试集样品,利用傅里叶变换近红外光谱仪采集样品的近红外光谱,采用WT对原始近红外光谱数据进行预处理,选择小波基函数为Daubechies(db5),小波分解层数为5,小波阈值为0.1,采用OMP建立龙胆苦苷的定量分析模型。结果表明:该模型预测性能较好,校正集对应的决定系数(R_(C)^(2))为0.9940,校正均方根误差(RMSEC)为0.0819,测试集对应的决定系数(R_(P)^(2))为0.9854,预测均方根误差(RMSEP)为0.1124;利用所建模型分析204个秦艽样品,龙胆苦苷预测值与参考值基本一致。

关键词：小波变换(WT) 正交匹配追踪(OMP) 近红外光谱法模型秦艽龙胆苦苷

基于龙胆苦苷的二吲哚甲烷类拟单萜吲哚生物碱类似物合成及其抗肿瘤、逆转紫杉醇耐药活性研究

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化学通报 2022年第12期85卷 1488-1498,1487,1409页

作者：陈岳巍李江邓璐璐马锦鸿杨发荣郝小江穆淑珍贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550014 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵阳550014 贵州医科大学药学院贵阳550025

以环烯醚萜类化合物龙胆苦苷为合成模块,利用拟单萜吲哚生物碱的仿生合成途径和组合化学的研究思路,与色胺类衍生物(吲哚结构的活性单元片段)通过缩合反应,合成了23个二吲哚甲烷类拟单萜吲哚生物碱类似物。利用核磁共振和高分辨质谱等... 详细信息

以环烯醚萜类化合物龙胆苦苷为合成模块,利用拟单萜吲哚生物碱的仿生合成途径和组合化学的研究思路,与色胺类衍生物(吲哚结构的活性单元片段)通过缩合反应,合成了23个二吲哚甲烷类拟单萜吲哚生物碱类似物。利用核磁共振和高分辨质谱等对合成化合物的结构进行了表征,并初步评价了其抗肿瘤活性和逆转耐药活性。结果表明,化合物4i脱掉糖基保护基后的化合物5i对3种肿瘤细胞系(TE-1、CAL-62和FaDu)的抑制作用强于阳性对照盐酸阿霉素(DOX)。通过与紫杉醇的联合用药,发现部分化合物如4m、4n、4o、4r等能够有效降低人肺癌细胞紫杉醇耐药株A549/Taxol对紫杉醇的耐药性,具有良好的逆转耐药潜力。

关键词：龙胆苦苷拟单萜吲哚生物碱二吲哚甲烷抗肿瘤活性逆转耐药

龙胆苦苷对糖尿病周围神经痛大鼠神经保护作用

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实用医学杂志 2020年第5期36卷 565-569页

作者：鲁义姚嘉茵王保陈陈燕劳俊铭刘栋尧新华广州市中医医院麻醉科广州510130 中山大学附属第六医院广州510126

目的探索龙胆苦苷对糖尿病周围神经痛(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠神经保护作用及具体机制研究。方法45只SPF级雄性SD大鼠,随机分为3组:空白对照组,DPN模型组以及龙胆苦苷治疗组。通过腹腔注射四氧嘧啶链脲佐菌素(STZ,55 m... 详细信息

目的探索龙胆苦苷对糖尿病周围神经痛(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠神经保护作用及具体机制研究。方法45只SPF级雄性SD大鼠,随机分为3组:空白对照组,DPN模型组以及龙胆苦苷治疗组。通过腹腔注射四氧嘧啶链脲佐菌素(STZ,55 mg/kg)构建DPN大鼠动物模型;龙胆苦苷治疗组大鼠在STZ造模的基础上每天龙胆苦苷灌胃治疗[20 mg/(kg·d),day 1~day 14]。通过行为学分析和刺激试验(冷、热、机械刺激)分析各组大鼠的疼痛阈值变化。检测各组大鼠血脂水平变化。采用生物电信号采集系统检测大鼠坐骨神经运动(motor nerve conduction velocity,MNCV)以及感觉(sensorynerveconductionvelocity,SNCV)传导速度。应用彩色多普勒检测下肢胫前动脉血流速度。采用RT-PCR检测PPAR-γ/AMPK/ACC信号通路中各因子的基因表达变化。结果与空白对照组比较,DPN模型组大鼠各刺激试验的疼痛阈值明显下降(P龙胆苦苷治疗组大鼠刺激试验的疼痛阈值较DPN模型组升高(P龙胆苦苷促进脊髓组织PPAR-γ与AMPK基因表达量,抑制ACC基因表达量(P龙胆苦苷增加神经血流速度,对DPN大鼠起神经保护作用,此作用可能通过调节PPAR-γ/AMPK/ACC信号通路介导。

关键词：龙胆苦苷糖尿病周围神经痛神经血流速度 PPAR-γ

龙胆苦苷下调LINC00520对肺癌细胞A549增殖和迁移的影响

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中国免疫学杂志 2021年第4期37卷 469-474页

作者：薛晴苏州第九人民医院内科苏州215200

目的:研究龙胆苦苷是否通过下调LINC00520影响肺癌细胞A549增殖和迁移。方法:将A549细胞分为对照组(正常培养)、龙胆苦苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L龙胆苦苷)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00520组(转染siLINC00520)、龙胆苦... 详细信息

目的:研究龙胆苦苷是否通过下调LINC00520影响肺癌细胞A549增殖和迁移。方法:将A549细胞分为对照组(正常培养)、龙胆苦苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L龙胆苦苷)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00520组(转染siLINC00520)、龙胆苦苷高剂量+pcDNA组(转染pcDNA+40μmol/L龙胆苦苷)、龙胆苦苷高剂量+pcDNA-LINC00520组(转染pcDNA-LINC00520+40μmol/L龙胆苦苷)。采用qRT-PCR测定LINC00520表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验分别检测A549细胞活性与克隆形成,Transwell实验评估细胞迁移,Western blot分析E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(Ncadherin)表达。结果:与对照组相比,龙胆苦苷低剂量组A549细胞的活性、克隆形成数、LINC00520表达量、迁移细胞数、Ecadherin蛋白和N-cadherin蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组或龙胆苦苷低剂量组相比,龙胆苦苷中、高剂量组A549细胞的活性、克隆形成数、LINC00520表达量、迁移细胞数、N-cadherin蛋白水平减少,E-cadherin蛋白水平升高,差异有统计学意义(P龙胆苦苷抑制A549细胞活性、克隆形成数、迁移细胞数、N-cadherin蛋白表达和促进E-cadherin蛋白表达的作用被逆转。结论:龙胆苦苷通过下调LINC00520,抑制肺癌细胞A549的增殖和迁移。

关键词：龙胆苦苷 LINC00520 肺癌细胞A549 增殖迁移

龙胆苦苷对骨关节炎大鼠软骨组织损伤和软骨细胞凋亡的作用

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中国老年学杂志 2021年第6期41卷 1248-1252页

作者：王富军贾峰张世华淄博市第一医院骨伤科山东淄博255200 山东省中医院关节骨科

目的探究龙胆苦苷(GPS)对骨关节炎大鼠软骨组织损伤和软骨细胞凋亡的作用。方法选取75只6周龄SPF级大鼠体重(180±20)g,并随机分为5组:假手术(Sham)组、模型(OA)组、GPS 50 mg/kg组、GPS 100 mg/kg组、GPS 200 mg/kg组。采用Hulth法复... 详细信息

目的探究龙胆苦苷(GPS)对骨关节炎大鼠软骨组织损伤和软骨细胞凋亡的作用。方法选取75只6周龄SPF级大鼠体重(180±20)g,并随机分为5组:假手术(Sham)组、模型(OA)组、GPS 50 mg/kg组、GPS 100 mg/kg组、GPS 200 mg/kg组。采用Hulth法复制大鼠骨关节炎模型,按照分组剂量使用龙胆苦苷对大鼠灌胃,每日1次,共8 w;采用苏木素-伊红(HE)染色和番红染色分别观察大鼠骨关节情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清中白细胞介素(IL)-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,使用Western印迹检测大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-13、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cl-caspase)-3、金属肽酶含血小板反应蛋白(ADAMTs)-4、转化生长因子(TGF)β活化激酶(TAK)1、TGF-β、胰岛素样生长因子(IGF)1、p-p65蛋白表达情况。结果HE染色和番红染色结果显示,GPS组软骨基质染色均匀,钙化层细胞正常排列有序。与Sham组比较,OA组大鼠cl-caspase-3、IGF1水平显著降低(P<0.05);MMP-13、ADAMTs-4、TAK1、TGF-β、p-p65水平显著升高(P<0.05)。与OA组比较,GPS组大鼠cl-caspase-3、IGF1水平显著升高,且GPS 200 mg/kg组显著高于GPS 100 mg/kg组,GPS 100 mg/kg组显著高于GPS 50 mg/kg组(P<0.05),MMP-13、ADAMTs-4、TAK1、TGF-β、p-p65水平显著降低,且GPS 200 mg/kg组显著低于GPS 100 mg/kg组,GPS 100 mg/kg组显著低于GPS 50 mg/kg组(P<0.05)。结论GPS可以降低体内炎症因子、平衡软骨细胞外基质的合成与降解达到保护骨关节大鼠软骨组织的效果。

关键词：骨关节炎软骨组织损伤龙胆苦苷细胞凋亡

基于随机森林算法的秦艽龙胆苦苷含量快速检测

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甘肃农业大学学报 2023年第6期58卷 257-264页

作者：陈建国李四海甘肃中医药大学信息工程学院甘肃兰州730000

【目的】基于近红外光谱技术,运用随机森林算法实现秦艽中龙胆苦苷含量的快速、准确、无损检测。【方法】采用HPLC法测定秦艽中龙胆苦苷的含量,正交信号校正结合小波压缩对原始光谱进行预处理,以抽取的小波系数作为光谱特征建立秦艽近... 详细信息

【目的】基于近红外光谱技术,运用随机森林算法实现秦艽中龙胆苦苷含量的快速、准确、无损检测。【方法】采用HPLC法测定秦艽中龙胆苦苷的含量,正交信号校正结合小波压缩对原始光谱进行预处理,以抽取的小波系数作为光谱特征建立秦艽近红外光谱和龙胆苦苷含量之间的随机森林定量分析模型,同时对4种模型的预测结果进行了对比分析。【结果】原始光谱正交信号校正预处理后分别建立偏最小二乘和随机森林定量分析模型,偏最小二乘回归模型在验证集上的均方根误差(RMSEP)和决定系数(R2)分别为0.2469和0.9368,随机森林定量分析模型在验证集上的均方根误差(RMSEP)和决定系数(R2)分别为0.2075和0.9695。原始光谱正交信号校正后进行离散小波分解,抽取63个中低频小波系数分别建立偏最小二乘和随机森林定量分析模型,偏最小二乘回归模型在验证集上的均方根误差(RMSEP)和决定系数(R2)分别为0.2126和0.9503,随机森林定量分析模型在验证集上的均方根误差(RMSEP)和决定系数(R2)分别为0.1663和0.9804。【结论】通过小波多尺度分解降低了决策树之间的相关性,进一步提高了随机森林定量分析模型的泛化能力和稳健性,该定量分析模型可用于秦艽中龙胆苦苷含量的快速准确检测。

关键词：秦艽近红外光谱龙胆苦苷随机森林小波变换

龙胆苦苷生物合成候选调控基因GrbHLH1的挖掘、克隆与表达分析

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生命科学研究 2020年第2期24卷 118-126页

作者：李彩霞王元忠王梅媛梁芳张晓东玉溪师范学院化学生物与环境学院中国云南玉溪653100 许昌学院食品与生物工程学院中国河南许昌461000 云南省农业科学院药用植物研究所中国云南昆明650223

为挖掘滇龙胆中调控龙胆苦苷生物合成的bHLH转录因子,使用长春花中调控环烯醚萜生物合成的转录因子bHLH环烯醚萜类合成1(CrBIS1)的基因序列比对滇龙胆转录组数据库,获得一个候选调控基因GrbHLH1,以该序列为基础,采用逆转录多聚酶链式反... 详细信息

为挖掘滇龙胆中调控龙胆苦苷生物合成的bHLH转录因子,使用长春花中调控环烯醚萜生物合成的转录因子bHLH环烯醚萜类合成1(CrBIS1)的基因序列比对滇龙胆转录组数据库,获得一个候选调控基因GrbHLH1,以该序列为基础,采用逆转录多聚酶链式反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术从滇龙胆幼叶克隆GrbHLH1基因,并对其进行生物信息学分析和组织特异性表达分析。结果表明滇龙胆GrbHLH1基因(GenBank登录号:KF941186.2)的开放阅读框长1104 bp,编码367个氨基酸,主要在叶中表达;GrbHLH1蛋白的相对分子质量为40.60 kD,理论pI为4.82,可能定位于细胞核,无信号肽,亲水、不稳定,主要由α-螺旋(18.53%)和环(70.30%)构成;该蛋白质具有HLH保守结构域,属于IVa型bHLH转录因子,与长春花CrBIS1和CtBIS2蛋白的亲缘关系最近。以上数据表明GrbHLH1基因是龙胆苦苷生物合成的候选调控基因,为进一步研究该基因的调控作用奠定了基础。

关键词：滇龙胆龙胆苦苷 GrbHLH1基因共表达分析基因克隆组织特异性表达分析

龙胆苦苷经PI3K/Akt信号通路减轻血管内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究

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龙胆苦苷经PI3K/Akt信号通路减轻血管内皮细胞氧化应激损伤的作用...

作者：杨凯强滨州医学院

学位级别：硕士

背景:内皮细胞在调节血管功能,生理和病理过程中起重要的作用,血管内皮细胞(VEC)的氧化应激损伤(OSI)是导致人体动脉粥样硬化、继发性高血压和2型糖尿病等疾病的重要原因,因此有效的管理内皮氧化应激损伤在心血管疾病的治疗中具有重要... 详细信息

背景:内皮细胞在调节血管功能,生理和病理过程中起重要的作用,血管内皮细胞(VEC)的氧化应激损伤(OSI)是导致人体动脉粥样硬化、继发性高血压和2型糖尿病等疾病的重要原因,因此有效的管理内皮氧化应激损伤在心血管疾病的治疗中具有重要的临床意义。然而,由于OSI涉及许多细胞因子和信号传导途径,因此目前尚不清楚OSI的病理生理学机制。PI3K/Akt信号通路是广泛存在于组织细胞间的一种信号传导通路,可以调控细胞间的信号联系、细胞质内的信号转导以及细胞核中的基因转录。此外,PI3K/Akt通路还在细胞增殖,迁移,生长,分化和死亡等活动中发挥了极其重要的作用,是一种高度保守的的信号传导通路。龙胆苦苷(Gentiopicroside,GPS)属于裂环环烯醚萜苷类化合物,其分子式是C16H2009。GPS是龙胆类植物发挥药效的主要有效成分。大量的临床及实验研究发现:GPS不仅有抗炎止痛、保肝利胆、促进胃肠动力和抗病毒等作用,更具有抗氧化损伤,抑制大动脉平滑肌细胞的增殖扩散等对心血管系统的保护作用,尤其在动脉粥样硬化等疾病中具有显著的效果。然而,GPS对血管内皮细胞的氧化应激损伤是否有保护作用却罕有报道,尚需进一步研究。目的:既往的研究发现内皮功能障碍往往在心血管疾病发病之前已经发生改变,其中,氧化应激在内皮功能障碍的发病机制中起着重要作用。本研究,通过过氧化氢(H2O2)模拟细胞的氧化应激损伤,探讨龙胆苦苷(GPS)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的保护作用及其在损伤治疗中的可能机制研究。方法:实验一:首先应用不同浓度得H2O2(100、200、400 μmol/L)处理人脐静脉内皮细胞2、4、8 h,目的是检测H2O2的毒性梯度范围,并建立合适的氧化应激损伤细胞模型。我们用H2O2的干扰来研究加入GPS的人脐静脉内皮细胞在氧化应激损伤中的存活率、凋亡率及迁移率等指标。把体外培养的人脐静脉内皮细胞分为4组,分别为Control组、H2O2组、H2O2+740Y-P组及740Y-P组。H2O2组用浓度为400 μmol/L的H2O2培养液处理内皮细胞;H2O2+740Y-P组在用400 μ mol/L浓度H2O2的培养液处理前2h加入500 mg/mL的740Y-P溶液处理HUVECs;740Y-P组只在培养基中加入500 mg/mL的740Y-P溶液。各组细胞均在37 ℃的恒定温度,5%CO2的饱和湿度细胞培养箱内培养6小时。细胞经过上述处理后,用MTT法和TUNEL法分别检测细胞存活率和细胞凋亡率,用划痕实验检测血管内皮细胞的迁移率。实验二:将龙胆苦苷(GPS)用DMSO预溶,并用细胞培养液稀释至相应浓度,首先应用不同浓度得GPS(10、20、40 μmol/L)处理人脐静脉内皮细胞4h,目的是检测GPS是否存在毒性梯度范围,探讨GPS是否有细胞毒性作用,并建立合适的氧化应激损伤细胞模型。取一组细胞并将内皮细胞分为4组,分别为Control组、H2O2组、GPS+H2O2组及GPS组。Control组不做任何处理,用无血清的DMSO(0.01%)培养液培养;H2O2组用400 μmol/L浓度H2O2的培养液处理进行干扰;GPS+H2O2组用400μ mol/L浓度H2O2的培养液处理的同时加入1 mol/L的GPS;GPS组仅在Control组的基础上加入1 mol/L的GPS。各组细胞均在37℃的恒定温度下及5%CO2的饱和湿度细胞培养箱内培养6小时。经过上述处理后,用MTT法和TUNEL法分别检测细胞存活率和细胞凋亡率,用划痕实验检测血管内皮细胞的迁移率。使用专业试剂检测盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量、GSH-Px和MDA的含量,West-blot检测各组细胞各蛋白Bcl-2、Caspase3、Bax、cytochrome C的表达水平的变化。实验三:将细胞按1 × 108/L均匀接种在96孔板内,首先将HUVECs细胞分为2组:Control组细胞加入siRNA处理,用无血清的DMSO(0.01%)培养液培养,PI3K siRNA组在Control组的基础上加入1mol/L的PI3K蛋白分子。2组细胞均在37℃的恒定温度下及5%CO2的饱和湿度细胞培养箱内培养4小时,观察SOD、GSH-Px和MDA含量变化和PI3K活性变化,探讨PI3K/Akt信号通路在信号传导中是否发挥作用。再取一组细胞并将细胞分为3组,分别为H2O2组、GPS+H2O2组及GPS+H2O2+PI3K siRNA组。H2O2组用400 μ mol/L浓度H2O2的培养液处理进行干扰;GPS+H2O2组用400 μmol/L浓度H2O2的培养液处理的同时加入1 mol/L的GPS;GPS+H2O2+PI3K siRNA 组在 GPS+H2O2 组的基础上加入 1 mol/L 的 PI3K siRNA。各组细胞均

关键词：龙胆苦苷人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤凋亡 PI3K/Akt信通路