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绿原酸—黄芩苷共载纳米鼻腔原位凝胶的制备及增强鼻黏膜免疫的初步考察

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绿原酸—黄芩苷共载纳米鼻腔原位凝胶的制备及增强鼻黏膜免疫的初...

作者：林宇建广东药科大学

学位级别：硕士

研究目的本研究从银黄制剂扶正祛邪治疗“上感”出发,制备绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻腔原位凝胶制剂。利用星点设计进行工艺优化,制备符合鼻用要求的绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻腔原位凝胶,通过对体外鼻黏膜渗透性及释放度和鼻黏膜刺激性、... 详细信息

研究目的本研究从银黄制剂扶正祛邪治疗“上感”出发,制备绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻腔原位凝胶制剂。利用星点设计进行工艺优化,制备符合鼻用要求的绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻腔原位凝胶,通过对体外鼻黏膜渗透性及释放度和鼻黏膜刺激性、鼻黏膜免疫应答,进行安全性及疗效的初步考察,为增强鼻黏膜免疫提供一种安全方便、药效持久的制剂。研究方法（1）采用液相色谱法,建立绿原酸-黄芩苷共载纳米粒的含量测定方法。采用离子交联法制备纳米粒,以包封率为评价指标,确定最佳的壳聚糖醋酸溶液的p H,药物的投放量和壳聚糖的浓度,制备绿原酸-黄芩苷共载纳米粒,并进行质量考察。（2）制备温敏凝胶,以相变温度为评价指标,P407和P188作为变量,进行工艺优化和质量评价。（3）采用透析袋装置对体外释放度考察,采用高效液相色谱法测定溶出液中的两种药物浓度绘制曲线。采用无膜溶出法考察凝胶在溶蚀作用下对释放药物的作用,并绘制累积溶蚀率曲线。（4）观察牛蛙上颚黏膜形态和纤毛运动情况,考察纳米粒原位凝胶安全性。建立免疫低下小鼠模型,分别测定小鼠唾液中SIg A含量和溶菌酶含量,考察绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻用凝胶对免疫应答的作用。研究结果（1）绿原酸与黄芩苷的色谱峰理论塔板数均大于8000,峰型稳定,拖尾因子在0.95～1.05之间,两峰之间的分离良好,不被杂峰干扰。表明该方法专属性强,符合实验要求。浓度与所对应的峰面积保持良好的线性关系,精密度及稳定性考察显示RSD%均少于2%,表明仪器和方法精密度良好,重复性良好,药物稳定性良好,符合样品分析要求。（2）通过星点设计得到绿原酸-黄芩苷共载纳米粒的优选处方为:将壳聚糖（CS）溶解于2%乙酸水溶液（25m L）中,用磁力搅拌器溶解均匀,配成2.8mg·m L的壳聚糖溶液。取黄芩苷、绿原酸对照品各11mg,加入PEG400 10m L溶解成黄色透明溶液,缓慢滴入壳聚糖溶液中,于磁力搅拌器中以1000r·min搅拌,加完后继续搅拌10min,用1mol·LNa OH溶液调节至p H5;以2滴/s加入1g·L三聚磷酸钠（TPP）溶液10m L,于1000r·min搅拌,加完三聚磷酸钠溶液后继续搅拌20min,即得绿原酸-黄芩苷共载纳米粒。预测值绿原酸包封率44.72%,黄芩苷为55.32%,优选处方重复3次。测试结果包封率分别为绿原酸44.32%、44.53%、45.15%,黄芩苷55.22%,55.87%、54.65%。测得纳米粒的平均粒径（536.1±16.24）nm,多分散系数=（0.310±0.053）,电镜观察下纳米粒形态为均一的类球形实体粒子,形状规则饱满,测得Zeta电位（24.39±0.27）m V。（3）绿原酸-黄芩苷共载纳米粒鼻腔原位凝胶制备工艺为:称取18.5%的P407,加入到绿原酸-黄芩苷共载纳米悬浮液中,于磁力搅拌下使其分散均匀,4℃冰箱静置过夜,至P407充分溶胀分散均匀。在体系中缓慢加入1%的P188,于磁力搅拌下分散均匀,继续静置于4℃冰箱中过夜,至P188完全溶胀分散均匀。最后在磁力搅拌下逐滴滴加1mol/L的Na OH调节体系的p H至5.5左右。优选工艺重复3次。测试结果T分别为32.1℃、31.7℃、32.3℃,重复性良好。绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻腔原位凝胶离心后无分层,测得p H为5.5,且在32℃下相变速度较快。（4）透析袋法模拟药物体外释放的过程,无膜溶出法模拟凝胶在鼻黏液中被溶蚀的过程。实验结果表明,绿原酸-黄芩苷的释放主要是受鼻黏液对凝胶溶蚀,同时部分通过扩散的方式释放。（5）在牛蛙上颚纤毛实验中,1%去氧胆酸钠组30 min后观察到黏膜表面零碎残缺,纤毛边缘完全脱落,说明其对黏膜组织纤毛有毒性;给予空白凝胶组、绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻用凝胶制剂组黏膜面较齐整,纤毛数量多,表明空白凝胶和含药凝胶都具有良好的安全性。在牛蛙纤毛持续运动百分率测定与测定纤毛输送速率的结果表明,绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻用凝胶制剂组的持续运动百分率和纤毛输送速率均远高于1%去氧胆酸钠组,说明绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻用凝胶无明显的纤毛毒性,可以应用于鼻腔内。小鼠免疫模型中发现与对照组比较,模型组小鼠唾液中SIg A含量显著地降低（P黏膜免疫功能,表明此次寒冷刺激小鼠造模成功。绿原酸-黄芩苷共载纳米鼻用凝胶制剂高剂量组SIg A含量、溶菌酶含量均较模型常显著地升高（P0.05）;银翘组中SIg A含量、溶菌酶含量均较模型组显著地升高（P黏膜免疫功能。结论利用星点设计进行工艺优化,制备符合鼻用要求的绿原

关键词：绿原酸黄芩苷壳聚糖鼻用凝胶鼻黏膜免疫

鼻黏膜免疫佐剂提高疫苗免疫效应的作用机制及进展

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重庆医科大学学报 2021年第10期46卷 1276-1280页

作者：刘霞白国辉遵义医科大学贵州省普通高等学校口腔疾病研究特色重点实验室遵义563006

大量研究表明,通过鼻黏膜免疫的疫苗可诱导机体生成免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA),有望成为疫苗的有效作用途径之一。但单独使用疫苗鼻黏膜免疫后不会在鼻腔中诱导强IgA产生,需要添加免疫佐剂激活先天免疫应答,增强抗原特异性IgA... 详细信息

大量研究表明,通过鼻黏膜免疫的疫苗可诱导机体生成免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA),有望成为疫苗的有效作用途径之一。但单独使用疫苗鼻黏膜免疫后不会在鼻腔中诱导强IgA产生,需要添加免疫佐剂激活先天免疫应答,增强抗原特异性IgA产生和细胞应答。目前应用的鼻黏膜免疫佐剂种类繁多,但佐剂促进免疫应答的具体机制仍不清楚。本文讨论了鼻黏膜免疫佐剂在鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)中促进免疫应答的途径,为进一步对鼻黏膜免疫佐剂的相关研究提供参考。

关键词：佐剂鼻黏膜免疫疫苗鼻相关淋巴组织

反复冷-热刺激对大鼠鼻黏膜免疫屏障功能的影响及中医解表方的作用研究

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中国实验动物学报 2021年第6期29卷 715-723页

作者：杨居崩赵显芳聂发龙肖纯代蓉李秀芳云南中医药大学昆明650500

目的探讨反复冷-热刺激对大鼠鼻黏膜免疫屏障功能的影响,考察中医常用解表方麻黄汤和银翘散的作用。方法将SD大鼠置于-15℃1 h,再转入25℃30 min,冷-热交替刺激4次,末次刺激后检测不同时间点鼻黏膜中IgA蛋白表达水平,检测1 d后鼻腔灌洗... 详细信息

目的探讨反复冷-热刺激对大鼠鼻黏膜免疫屏障功能的影响,考察中医常用解表方麻黄汤和银翘散的作用。方法将SD大鼠置于-15℃1 h,再转入25℃30 min,冷-热交替刺激4次,末次刺激后检测不同时间点鼻黏膜中IgA蛋白表达水平,检测1 d后鼻腔灌洗液中溶菌酶、sIgA及PGE2含量,血清中的炎症因子含量;冷-热刺激后第9天,再次给予相同条件刺激,分别于末次刺激后1~11 d检测鼻黏膜中IgA蛋白动态变化,鼻腔灌洗液中溶菌酶、PGE2动态变化,血清中炎症因子动态变化,再次刺激1 d后鼻腔灌洗液中sIgA含量;解表方麻黄汤2.43 g生药/kg BW水煎液、银翘散33.48 g生药/kg BW水煎液对两轮冷-热刺激的大鼠进行干预,经第二轮冷-热刺激24 h后检测相应指标。结果反复冷-热刺激后,大鼠鼻黏膜IgA蛋白表达在刺激后1、3 d明显降低,随后逐渐上升,刺激后7 d恢复正常;刺激后1 d sIgA明显降低,溶菌酶及炎症因子无明显变化。当大鼠再次受到冷-热刺激后,鼻黏膜IgA蛋白表达显著下降,鼻腔灌洗液中溶菌酶及PGE2的含量明显降低;血清中TNF-α、PGE2、IL-1β及IL-6的含量显著升高。麻黄汤和银翘散干预后,两方均可升高大鼠鼻黏膜中IgA蛋白表达及鼻腔灌洗液中sIgA的含量,银翘散还可升高溶菌酶含量,降低血清的TNF-α、IL-1β含量。结论反复冷-热刺激可导致大鼠鼻黏膜免疫屏障功能下降,血清中多种炎症因子或炎症介质释放增加,麻黄汤和银翘散均可提高大鼠鼻黏膜免疫屏障功能,麻黄汤增加IgA含量的作用较明显,银翘散减少炎症因子的作用更明显。

关键词：冷-热刺激鼻黏膜免疫炎症解表方

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壳聚糖微球作为鼻黏膜免疫载体的研究进展

中国人兽共患病学报 2010年第12期26卷 1163-1166页

作者：王吉玮潘丽张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

黏膜免疫是动物机体防御传染病的第一道屏障,而鼻黏膜是许多病原微生物进入机体的必经之路.鼻黏膜免疫与局部或全身性免疫相比,有许多优点,例如鼻黏膜免疫无刺激,无痛感,为非侵入性,且不需要严格的无菌处理.鼻腔内大量的微绒毛构成鼻黏... 详细信息

黏膜免疫是动物机体防御传染病的第一道屏障,而鼻黏膜是许多病原微生物进入机体的必经之路.鼻黏膜免疫与局部或全身性免疫相比,有许多优点,例如鼻黏膜免疫无刺激,无痛感,为非侵入性,且不需要严格的无菌处理.鼻腔内大量的微绒毛构成鼻黏膜较大的表面积,多孔的内皮组织及高度血管化的上皮组织可以起到很好的递呈作用.尽管鼻黏膜免疫有明显的优势,但是疫苗在鼻腔内的低渗透性和短暂的停留时间,严重阻碍了鼻黏膜的递呈.而有效的鼻黏膜载体可以提高其抗原的免疫原性,并对处于该环境中的抗原起到保护作用〔1〕

关键词：鼻黏膜免疫壳聚糖微球免疫载体机体防御病原微生物全身性免疫非侵入性无菌处理

DDA复合物脂质体流感疫苗鼻黏膜免疫效应及作用机制探讨

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DDA复合物脂质体流感疫苗鼻黏膜免疫效应及作用机制探讨

作者：于蕊宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,严重危害人类健康,接种流感疫苗仍是现阶段预防流感最有效的措施。现用流感疫苗多为灭活疫苗,其副反应多且免疫原性差,为提高疫苗的安全性及免疫原性,本研究选择DDA阳离子脂质作为疫苗佐剂... 详细信息

目的流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,严重危害人类健康,接种流感疫苗仍是现阶段预防流感最有效的措施。现用流感疫苗多为灭活疫苗,其副反应多且免疫原性差,为提高疫苗的安全性及免疫原性,本研究选择DDA阳离子脂质作为疫苗佐剂,构建DDA复合物脂质体流感疫苗,以期通过鼻黏膜免疫获得较高的免疫效力,从而有效预防流感,为新型疫苗及其佐剂的开发提供有价值的参考。方法1以DDA阳离子脂质作为脂质膜的主要成分,以中性磷脂DSPC作为辅助脂质,TPGS及PEG作为免疫调节剂,通过薄膜分散法制备DDA-DSPC、DDA-DSPC-TPGS和DDA-DSPC-PEG脂质体并包载流感抗原,考察粒径、Zeta电位、包封率(EE)、载药量(LE)等重要指标,对所制备的各脂质体流感疫苗进行特性评价。并通过筛选冻干保护剂及冻干条件,对脂质体流感疫苗的冻干处方及工艺进行初步探索。2体外培养小鼠骨髓树突状细胞(BMDCs),通过细胞毒性试验考察DDA阳离子脂质体复合物对树突细胞的毒性,通过流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM)考察未成熟BMDCs对包载荧光标记蛋白的不同脂质体的摄取情况,评价不同脂质体与抗原提呈细胞(APCs)相互作用并呈递抗原的能力。并以MHCII、CD80、CD86为指标,考察各组脂质体流感疫苗刺激DC2.4细胞分化成熟的能力。3以C57BL/6小鼠为动物模型,通过鼻黏膜免疫,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠黏液分泌型IgA(sIgA)、血清IgG1及小鼠脾脏细胞因子IFN-γ、IL-4的表达水平,对DDA复合物脂质体流感疫苗的免疫效应进行初步评价。结果1采用薄膜分散法制备的脂质体流感疫苗,分散介质为pH7.4的Tris-buffer,所得DDA-DSPC脂质体流感疫苗粒径685.0±17.8 nm,PDI 0.522±0.342,zeta电位25.4±1.9 mV,EE 65.7±2.0%,LE 6.2±0.2%;DDA-DSPC-TPGS脂质体流感疫苗粒径337.3±2.4 nm,PDI0.555±0.061,zeta电位15.4±2.1 mV,EE 78.5±1.5%,LE 4.2±0.2%;DDA-DSPC-PEG脂质体流感疫苗的粒径591.4±19.3 nm,PDI 0.470±0.023,zeta电位6.9±0.8 mV,EE 45.8±3.0%,LE 3.0±0.3%。透射电镜观察,以上各组脂质体疫苗外观均呈圆球形或椭球形。此外,通过对脂质体疫苗进行冻干处方及工艺的考察,优化得到脂质体疫苗冻干的最佳处方为5%的蔗糖和5%的乳糖按质量比1:1合用,冻干条件为预冻温度-80℃,预冻时间8 h,在此条件下脂质体疫苗冻干效果比较良好。2体外摄取实验结果显示未成熟的BMDCs和DC2.4与包载FITC-BSA的各组脂质体孵育2小时后,DDA-DSPC脂质体组摄取率最高,与其他各组相比,有极显著性差异(p鼻黏膜免疫后,可显著提高鼻黏液中IgA抗体滴度,DDA-DSPC-TPGS组脂质体流感疫苗可显著提高血清IgG1及小鼠脾脏细胞因子IFN-γ的表达水平(p鼻黏膜免疫后,能够诱导较高水平的血清IgG1抗体、鼻黏液IgA抗体及IFN-γ,体现了DDA复合物脂质体良好的佐剂特性,尤其是DDA-DSPC-TPGS组脂质体流感疫苗,其诱导的小鼠血清IgG1及脾细胞分泌上清中IFN-γ的表达水平高于其他各组,表明TPGS具有一定的免疫调节作用。

关键词：流感疫苗佐剂 DDA阳离子脂质鼻黏膜免疫

DDA/TDB阳离子脂质体流感疫苗制备及经鼻黏膜免疫效应的初步评价

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DDA/TDB阳离子脂质体流感疫苗制备及经鼻黏膜免疫效应的初步评价

作者：渠文静宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的为了克服现用流感疫苗免疫原性弱、不能有效诱导黏膜免疫应答、接种途径单一,病人顺应性差、副反应多等问题,本研究选择DDA/TDB阳离子脂质体为疫苗佐剂,构建DDA/TDB阳离子脂质体流感疫苗,并经过鼻黏膜免疫,以期获得能够诱导增强体... 详细信息

目的为了克服现用流感疫苗免疫原性弱、不能有效诱导黏膜免疫应答、接种途径单一,病人顺应性差、副反应多等问题,本研究选择DDA/TDB阳离子脂质体为疫苗佐剂,构建DDA/TDB阳离子脂质体流感疫苗,并经过鼻黏膜免疫,以期获得能够诱导增强体液及黏膜免疫效应的流感疫苗,有效预防流感的流行,为新型疫苗的研究开发提供有价值的研究参考。方法1分别选取不同性质磷脂DSPC、DOTAP-DC、DDA-TDB,以甲型流感H3N2为抗原原液,采用薄膜分散法制备中性DSPC-Chol、阳离子DOTAP-DC-Chol和DDA-TDB脂质体流感疫苗,以粒径、Zeta电位、包封率(EE)、载药量(LD)为评价指标优选处方及工艺,并对所得脂质体流感疫苗进行特性评价。2培养小鼠骨髓树突状细胞(Bone Marrow Dendritic cells,BMDCs),采用激光共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)及流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM)检测未成熟BMDCs对量子点(QDs)标记的不同脂质体的体外摄取情况,考察不同脂质体递送抗原的能力。选取标志树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟的细胞表面因子MHCII、CD80、CD86为指标,通过FCM检测各因子表达程度,考察不同脂质体流感疫苗刺激诱导BMDCs分化成熟能力。3以C57BL/6小鼠为动物模型,通过鼻黏膜免疫,采用间接酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠黏液分泌型IgA(sIgA)、血清IgG及IgG亚型的抗体效价和小鼠脾脏细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-5的表达水平,对DDA/TDB阳离子脂质体流感疫苗的免疫效应进行初步评价。结果1采用薄膜分散法制备脂质体流感疫苗,优选抗原与脂质质量比(A/L)为10:100,分散介质为pH7.4的Tris-buffer,所得DSPC-Chol脂质体流感疫苗粒径500.3±21.0nm,Zeta电位-4.2±0.1mV,EE 17.8±1.9%;DOTAP-DC-Chol脂质体流感疫苗粒径339.0±3.9nm,Zeta电位51.3±2.0 mV,EE 46.2±1.1%;DDA-TDB脂质体流感疫苗粒径1770.0±70.7nm,Zeta电位53.8±3.6mV,EE 77.5±2.7%。透射电镜观察各脂质体形态呈圆球形或椭球形。4℃下放置21天,各脂质体粒径及包封率变化均不大,表明其稳定性较好。2体外摄取实验结果显示,DCs对DDA-TDB脂质体摄取能力明显增强,给药2h后阳性细胞数百分比可达32.73±2.6%,与DSPC-Chol组(4.9±1.8%)和DOTAP-DC-Chol(12.2±0.9%)组相比,有极显著性差异(p鼻黏膜免疫组显著高于腹腔注射免疫组(p鼻黏膜免疫后,DDA-TDB组小鼠血清anti-H3N2 IgG滴度与H3N2原液、DSPC-Chol和DOTAP-DC-Chol组相比,具有显著性差异(p鼻黏膜免疫后,DDA-TDB组小鼠黏液anti-H3N2 sIgA和血清anti-H3N2 IgG、IgG1及IgG2b抗体滴度均高于其他三组,且细胞因子IFN-γ水平较高,表明DDA-TDB脂质体经鼻粘膜免疫能显著提高黏膜免疫、体液免疫及Th2类T细胞免疫应答效应,有希望成为新型疫苗佐剂。

关键词：流感疫苗疫苗佐剂阳离子脂质体鼻黏膜免疫量子点

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口蹄疫干粉制剂对动物鼻黏膜免疫效果研究

口蹄疫干粉制剂对动物鼻黏膜免疫效果研究

作者：王吉玮中国农业科学院

学位级别：硕士

黏膜免疫是动物机体防御传染病的第一道屏障,而鼻黏膜是许多病原微生物进入机体的必经之路,因此,鼻黏膜免疫对预防动物的传染病具有重要的意义。为了研究鼻黏膜的免疫效果,本研究首先对灭活口蹄疫病毒抗原进行浓缩纯化、冷冻干燥后... 详细信息

黏膜免疫是动物机体防御传染病的第一道屏障,而鼻黏膜是许多病原微生物进入机体的必经之路,因此,鼻黏膜免疫对预防动物的传染病具有重要的意义。为了研究鼻黏膜的免疫效果,本研究首先对灭活口蹄疫病毒抗原进行浓缩纯化、冷冻干燥后,与相应的黏膜保护剂混合制成干粉,经标准筛筛选颗粒大小后,运用电子扫描显微镜、TG-DSC同步热分析仪等对粉末进行理化特性分析。结果表明:制备的干粉制剂颗粒大小易于雾化,喷雾过程中能附着于鼻黏膜表面,且在一定温度和湿度范围内稳定性良好,适于进行鼻黏膜部位的免疫。采用喷鼻途径对实验豚鼠和牛进行黏膜免疫,通过液相阻断和间接ELISA对黏膜分泌液及血清进行特异性抗体检测,来评价其黏膜特定部位免疫反应和全身性体液免疫应答水平;通过淋巴细胞增殖试验、流式细胞术检测CD4+和CD8+细胞含量等,来评价其全身性细胞免疫应答水平。结果表明:首次免疫后的实验豚鼠和牛,在第7天检测,均出现了不同程度的特异性IgA抗体水平,随后在血清中出现特异性IgA及IgG抗体水平。进行二次免疫后,抗体水平明显高于首次免疫,且抗体产生快,维持时间长。但是,与常规灭活疫苗相比,鼻黏膜免疫抗体水平较低,维持时间略短。淋巴细胞增殖试验及CD4+和CD8+细胞含量的流式检测也表明,鼻黏膜免疫不仅可以诱导黏膜特定部位的免疫应答,还可以诱导机体全身性的免疫应答。综上所述,口蹄疫干粉制剂的黏膜免疫,可以首先在鼻黏膜部位产生局部免疫应答,之后诱导全身性免疫应答。本研究结果,不仅为黏膜免疫的研究提供了有用的实验数据,并在很大程度上,为探索及研制口蹄疫黏膜疫苗奠定了实验基础。

关键词：口蹄疫干粉制剂鼻黏膜免疫豚鼠牛

解表方对寒冷刺激致小鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下的影响

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解表方对寒冷刺激致小鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下的影响

作者：晏雪梅云南中医药大学

学位级别：硕士

目的:为探讨辛温解表方和辛凉解表方防治急性上呼吸道感染的作用机制,本课题以寒冷刺激致小鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下（mouse nasal mucosal barrier dysfunction,MNMBD）模型为研究对象,从调节鼻黏膜免疫屏障功能入手,考察了辛温解表... 详细信息

目的:为探讨辛温解表方和辛凉解表方防治急性上呼吸道感染的作用机制,本课题以寒冷刺激致小鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下（mouse nasal mucosal barrier dysfunction,MNMBD）模型为研究对象,从调节鼻黏膜免疫屏障功能入手,考察了辛温解表方的代表方剂麻黄汤及辛凉解表方的代表方剂银翘散的作用,以期明晰辛温、辛凉解表方防治急性上呼吸道感染的科学内涵。方法:1.解表方对MNMBD模型鼻黏膜免疫屏障功能的影响研究1.1麻黄汤对MNMBD模型鼻黏膜免疫屏障功能的影响研究取雄性KM种小鼠随机分为奥司他韦对照组（ASTW+Normal）、麻黄汤对照组（MH+Normal）、正常组（Normal）、模型组（Model）、麻黄汤组（MH+Model）和阳性药组（ASTW+Model）。奥司他韦对照组和阳性药组、麻黄汤对照组和麻黄汤组分别提前灌胃给予磷酸奥司他韦（即40mg/kg）和麻黄汤（即3.51g/kg）2天,1次/天;造模当天,在造模前30min再次灌胃给予相应的药物,其余组灌胃给予蒸馏水。于造模结束后24h,过量麻醉处死小鼠,摘取鼻黏膜组织,采用Western-blot法检测鼻黏膜组织中IgA和IFN-λ的蛋白表达。1.2银翘散对MNMBD模型鼻黏膜免疫屏障功能的影响研究取雄性KM种小鼠随机分为奥司他韦对照组（ASTW+Normal）、银翘散对照组（YQ+Normal）、正常组（Normal）、模型组（Model）、银翘散组（YQ+Model）和阳性药组（ASTW+Model）。奥司他韦对照组和阳性药组、银翘散对照组和银翘散组分别提前灌胃给予磷酸奥司他韦（即40mg/kg）和银翘散（即72.54g/kg）2天,1次/天;造模当天,在造模前30min再次灌胃给予相应的药物,其余组灌胃给予蒸馏水。于造模结束后24h,过量麻醉处死小鼠,摘取鼻黏膜组织,采用Western-blot法检测鼻黏膜组织中IgA和IFN-λ的蛋白表达。2.解表方增强MNMBD模型鼻黏膜免疫屏障的作用机制IFN-λ在上皮细胞产生后与IFN-λ受体结合,通过激活JAK1/STAT1/2信号通路产生具有抗病毒作用的效应分子如粘病毒抗性蛋白（myxovirus resistance protein 1,Mx1）等。本部分造模及药物干预方法同1.1、1.2,采用Western-blot法检测该信号通路中IL-10Rβ、IFNLR1、JAK1、STAT1、STAT2、p-JAK1、p-STAT1、p-STAT2、IRF9、Mx1的蛋白表达,考察麻黄汤和银翘散对JAK1/STAT1/2信号通路的影响。3.麻黄汤对聚肌胞苷酸（Poly I:C）滴鼻刺激MNMBD模型的影响Poly I:C是双链RNA的人工合成类似物,研究报道其可用模拟病毒入侵引起上呼吸道感染。为考察麻黄汤提高小鼠鼻黏膜免疫屏障后是否能够抵御病毒入侵造成的损伤,故进行本部分研究。3.1 Poly I:C滴鼻刺激对MNMBD模型的影响研究取雄性KM种小鼠随机分为正常组（Normal）、模型组（Model）、Poly I:C+Model组。所有动物于造模前禁食不禁水12h,正常组不予任何刺激,模型组和Poly I:C+Model组将动物置于-20℃环境中1h,再转移入25℃环境中30min,循环两次,正常组和模型组在造模结束后0h缓慢滴鼻PBS,Poly I:C+Model组在造模结束后0h缓慢滴鼻Poly I:C 5μg/μl（按100μg Poly I:C/20μl PBS配制）,20μl/只;于造模结束后24h,过量麻醉处死小鼠,摘取鼻黏膜组织,Western-blot法检测鼻黏膜组织中IgA和IFN-λ的蛋白表达。3.2麻黄汤对聚肌胞苷酸（Poly I:C）滴鼻刺激MNMBD模型的影响研究取雄性KM种小鼠随机分为正常组（Normal）、Poly I:C+Model组、麻黄汤组（MH+Poly I:C+Model）和阳性药组（ASTW+Poly I:C+Model）。MH+Poly I:C+Model组和ASTW+Poly I:C+Model组分别提前灌胃给予麻黄汤（即3.51g/kg）和磷酸奥司他韦（即40mg/kg）2天,1次/天;造模当天,在造模前30min再次灌胃给予相应的药物,其余组灌胃给予蒸馏水。复制MNMBD模型,正常组在造模结束后0h缓慢滴鼻PBS,Poly I:C+Model组、MH+Poly I:C+Model组和ASTW+Poly I:C+Model组在造模结束后0h缓慢滴鼻Poly I:C 5μg/μl（按100μg Poly I:C/20μl PBS配制）,20μl/只;于造模结束后24h,过量麻醉处死小鼠,摘取鼻黏膜组织,检测指标同3.1。结果:1.解表方对MNMBD模型鼻黏膜免疫屏障功能的影响研究结果显示,麻黄汤和银翘散均可升高MNMBD模型小鼠鼻黏膜组织

关键词：麻黄汤银翘散鼻黏膜免疫 IgA IFN-λ

低强度激光对六周递增负荷大鼠鼻黏膜免疫功能的影响

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低强度激光对六周递增负荷大鼠鼻黏膜免疫功能的影响