检索结果-南通市图书馆

慢病毒介导人白细胞介素12转染鼠骨髓间充质干细胞可抑制CT26瘤体的生长

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织工程研究 2018年第25期22卷 3944-3949页

作者：何杨林晨高琴宋京翔涂小煌解放军福州总医院普外科福建省福州市350025 解放军福州总医院普外科研究所福建省福州市350025 厦门大学附属东方医院普外科福建省福州市350025

背景:白细胞介素12作为最具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少。目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(h IL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响。方法:设计并合成引物,PCR扩... 详细信息

背景:白细胞介素12作为最具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少。目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(h IL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响。方法:设计并合成引物,PCR扩增并回收纯化后的p40和p35基因片段,行Overlap-ping PCR连接获得h IL-12的单链双亚基表达融合基因,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,构建慢病毒过表达重组体,再转染大鼠骨髓间充质干细胞,药物筛选培育出稳转株。32只裸鼠皮下注射CT26细胞悬液造模成功后,随机分为4组:瘤周分别注射0.2 m L h IL-12-BMSCs(h IL-12-BMSCs组)、0.2 m L PBS溶液(PBS组)、0.2 m L骨髓间充质干细胞(骨髓间充质干细胞组)、0.2 m L表达IL-12的慢病毒液(LV-IL-12组),统计并分析各组瘤体生长情况。结果与结论:(1)观察期内PBS组与骨髓间充质干细胞组肿瘤体积差异无显著性意义(P>0.05),表明骨髓间充质干细胞本身对CT26瘤体生长无明显促进或抑制作用;(2)注射7 d后h IL-12-BMSCs组与PBS组、PBS组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异均有显著性意义(P细胞介素12对CT26瘤体生长有明显抑制作用;(3)注射10 d后h IL-12-BMSCs组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异有显著性意义(P鼠CT26移植瘤体生长有明显的抑制作用。

关键词：结直肠癌人白细胞介素12 鼠骨髓间充质干细胞慢病毒载体干细胞福建省自然科学基金结直肠肿瘤白细胞介素12 骨髓间质干细胞慢病毒感染组织工程

成骨生长肽促进小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

成骨生长肽促进小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的研究

作者：孙姗姗锦州医科大学

学位级别：硕士

目的用乳鼠骨片法分离鼠骨髓间充质干细胞（mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mBMSCs）,检测成骨生长肽（osteogenic growth peptide 10-14,OG P（10-14））干预对mBMSCs成骨分化的诱导作用及其对细胞增殖中细胞周期cyclin B1/CDK2途径的影响,以期为OGP（10-14）在临床治疗骨损伤提供依据。方法无菌分离3日龄BALB/c乳鼠mBMSCs,用流式细胞术鉴定培养第3代的mBMSCs表面标记分子CD29、CD90、CD45和CD11b/c。实验分为对照组和成骨生长肽组（OGP（10-14）组）,对照组:成骨诱导培养基（0.1μmol/L地塞米松、10mmmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μmol/L 维生素 C、0.1μmol/L 谷氨酰胺、10%FBS、1%双抗）,2～3d换液一次,诱导14d,OGP（10-14）组:成骨诱导培养基（同对照组）和1 0-5mol/LOGP（10-14）,2～3d换液1次,诱导14d。采用MTS法检测诱导24h、48h和72h mBMSCs细胞增殖水平,茜素红染色检测诱导第7d和14d mBMSCs成骨分化情况,qPCR法和Western blot法检测mBMSCs成骨重要因子β-catenin、RUNX2、BSP 和周期相关因子 cyclin B1、CDK2、c-Myc mRNA水平及蛋白表达量。结果1、原代mBMSCs培养第三代细胞形态较为均一,呈长梭形,有漩涡状融合。流式细胞仪检测mBMSCs表面标记分子,结果显示mBMSCs高表达CD29（90.3±7.5）和 CD90（82.5±8.4）,低表达 CD45（3.6±0.4）和 CD11b/c（5.8±0.9）。2、MTS结果显示,OGP（10-14）能显著促进mBMSCs增殖,在培养24h、48h及72h时其增殖水平明显高于对照组（t=3.505,P=0.039;t=6.940,P=0.006,t=6.803,P=0.007）。3、茜素红染色结果显示,在成骨诱导培养基的诱导下,对照组和OGP（10-14）mBMSCs向成骨分化,部分细胞呈聚集生长,集落状,随诱导时间的延长,出现红色层状矿化结节。OGP（10-14）组mBMSCs矿化结节较比正常组有所增加,提示OGP（10-14）促进mBMSCs向成骨分化。4、qPCR和Western blot结果表明,与对照组相比,OGP（10-14）提高β-catenin、RUNX2 及 BSP mRNA 水平（t=6.224,P=0.008;t=4.985,P=0.016;t=5.560,P=0.012）,促进蛋白表达（t=7.053,P=0.006;t=8.927,P=0.003;t=8.580,P=0.003）。与对照组相比,OGP（10-14）组cyclin B1,CDK2和c-Myc mRNA水平明显提高（t=8.917,P=0.003;t=6.407,P=0.008;t=6.196,P=0.009）,蛋白表达有不同程度增加（t=10.821,P=0.000;t=8.200,P=0.004;t=7.181,P=0.006）。结论OGP（10-14）通过Wnt/β-catenin信号促进BMSCs向成骨分化,并触发细胞周期cyclin B1/CDK2途径促进mBMSCs增殖,进而增加骨形成。

关键词：成骨生长肽鼠骨髓间充质干细胞增殖成骨分化细胞周期

Mito KATP通道调节对鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖及成骨分化的影响实验研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Mito KATP通道调节对鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖及成骨分化的影...

作者：李红波海南医学院

学位级别：硕士

目的:鼠间充质干细胞诱导为成骨细胞的可行性及探究Mito KATP通道的状态变化对鼠骨髓间充质干细胞(MSC)活力及其向成骨细胞诱导分化是否存在相关性。方法:取体重约100克鼠,处死后迅速分离出双侧股骨骨髓冲洗液运用差样贴壁法进行体外扩... 详细信息

目的:鼠间充质干细胞诱导为成骨细胞的可行性及探究Mito KATP通道的状态变化对鼠骨髓间充质干细胞(MSC)活力及其向成骨细胞诱导分化是否存在相关性。方法:取体重约100克鼠,处死后迅速分离出双侧股骨骨髓冲洗液运用差样贴壁法进行体外扩增培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的形态及生长增殖情况。以已建系的鼠骨髓间充值干细胞进行分ABCD四组(A组空白对照组、B组0.16μmol/L二氮嗪、C组0.8μmol/L二氮嗪、D组二氮嗪4μmol/L)在不同浓度的Mito KATP通道激活剂二氮嗪下观察及检测其活力,同样以已建系的鼠MSC进行分组在不同浓度的Mito KATP通道激活剂二氮嗪下于2周以碱性磷酸酶、茜素红,核染色检测鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖及成骨分化的影响。结果:原代细胞培养结果细胞在不同大小的鼠取材应用不同的的提纯方法起细胞纯度、活力、增殖分化的能力及速度差异较大。已建系的骨髓间充质干细胞(MSC)所表现的均一性和纯度较高,但增殖分化能力及多样化增殖能力较弱。不同浓度的Mito KATP通道激活剂二氮嗪作用下鼠骨髓间充质干细胞(MSC)其活力组间无显著差异(P>0.05)。通过碱性磷酸酶、茜素红,细胞核染色鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖及成骨分化。Mito KATP通道激活剂二氮嗪溶液在一定浓度下0.16μmol/L二氮嗪、0.8μmol/L二氮嗪、二氮嗪4μmol/L在8天的实验研究中不影响鼠骨髓间充质干细胞的活力但是三种浓度与对照组相比在干预后14天能明显减少细胞凋亡。在诱导骨髓间种质干细胞成骨分化中,干预14天后0.8μmol/L二氮嗪、二氮嗪4μmol/L能明显诱导鼠间充质干细胞成骨分化。结论:Mito KATP通道激活剂二氮嗪不影响鼠骨髓间充质干细胞(MSC)其活力,且一定浓度(大于0.8μmol/L二氮嗪)下可以增强鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化。

关键词：鼠骨髓间充质干细胞 Mito KATP通道成骨分化活力

中药龟板提取物化学成分及其调控鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)增殖活性的实验研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

化学学报 2007年第3期65卷 265-270页

作者：陈薇曾和平王春燕王婷婷陈东风华南理工大学化学科学学院功能分子研究所广州510641 华南师范大学有机化学研究所广州510006 广州中医药大学广州510405

中药龟板提取物浸膏经硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯作洗脱剂,梯度洗脱,得到16个组分;采用MTT法和流式细胞技术研究了它们对鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)的增殖作用,实验结果显示组分Ts-12具有促进rMSCs增殖的作用(p0.05),不具统计学意义... 详细信息

中药龟板提取物浸膏经硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯作洗脱剂,梯度洗脱,得到16个组分;采用MTT法和流式细胞技术研究了它们对鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)的增殖作用,实验结果显示组分Ts-12具有促进rMSCs增殖的作用(p0.05),不具统计学意义.采用了GC-MS分析各组分化学成分,并用HPLC和9个标准物质鉴定确证了组分Ts-12中含有十六酸甲酯(S-1)、十六酸乙酯(S-3)、十八酸甲酯(S-4)和甾醇(S-7)以及十四酸甾醇酯(S-8),组分Ts-4主要含有十八酸(S-5).对标准品也采用了MTT法和流式细胞仪研究了它们对rMSCs的增殖作用,结果表明十四酸甾醇酯和十六酸甲酯具有促进rMSCs增殖的作用,而十八酸具有抑制作用.

关键词：龟板有效成分柱层析气质联用高效液相鼠骨髓间充质干细胞

血管内皮生长因子复合细胞支架复合物对修复大鼠股骨缺损的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

血管内皮生长因子复合细胞支架复合物对修复大鼠股骨缺损的影响

作者：徐成振江苏大学

学位级别：硕士

骨缺损在临床上十分常见,其治疗是骨科界的难题之一。目前常用的治疗方法是①保守治疗:包括更换外固定,绝对骨折端制动并延长固定时间等。②手术治疗:清理骨折端、内固定、植入物等;常用的植入材料主要有自体骨移植、异体骨移植和人工... 详细信息

骨缺损在临床上十分常见,其治疗是骨科界的难题之一。目前常用的治疗方法是①保守治疗:包括更换外固定,绝对骨折端制动并延长固定时间等。②手术治疗:清理骨折端、内固定、植入物等;常用的植入材料主要有自体骨移植、异体骨移植和人工骨移植等。随着植入材料的不断创新,组织工程学成为当前的热点。组织工程学是应用生命科学和工程学的原理与技术,设计、构造、培育和保养活细胞,研究生物替代物,修复和重建人体组织器官的结构,维持或改善组织器官功能的一门新兴学科。现阶段研究主要集中在种子细胞、支架材料和构建方式三个方面。目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)复合骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymal stem cells,MSCs)和纳米晶胶原基骨(nano-Hydroxyapatite/collagen,nHAC)的复合物对修复大鼠股骨骨缺损的影响。方法:本实验对鼠MSCs进行体外培养、纯化,取第3代MSCs与nHAC体外复合培养,5、10天扫描电镜(SEM)观察二者复合程度;将30只SD大鼠按照随机数字表法分三组形成5mm骨缺损制成股骨缺损模型:A组,缺损处植入单纯nHAC;B组,植入复合MSCs的nHAC;C组,植入复合VEGF、MSCs的nHAC。术后2、4、8、12周分批处死动物,行一般情况、缺损区大体标本观察、X线、骨密度测量、组织学染色分析及术后12周行骨痂扫描电镜观察等指标检测,行统计学分析,比较各组修复骨缺损的效果。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。结果:①鼠MSCs贴壁生长,增殖速度快,生长曲线符合Logistic生长曲线;②鼠MSCs与nHAC体外复合培养,在第5、10d进行扫描电镜观察,发现10d时粘附于nHAC的MSCs细胞数量(36.42±5.32)明显高于复合培养5d时的MSCs细胞数(22.56±4.45),P＜0.01;③各组大鼠术后3h清醒,术后一般情况好,各组鼠术后恢复及进食均正常,伤口无炎症反应,愈合良好;④大体观察:大体观察:C组术后12周骨缺损完全修复,骨缺损修复情况明显好于A、B组,A、B组骨缺损区部分修复;⑤X线及放射学评分:各组术后各时间段骨缺损区X射线片表现:C组:2周骨缺损处略见骨痂形成,8周可见明显形成骨缺损区的桥接,12周骨缺损区完全被新生骨组织填充。A组:12周骨缺损区骨痂形成增多,但未出现桥接,并可见两端有骨质硬化现象;B组可见骨痂增多,未见塑型。A组有2例12周形成骨不连。A组2、4、8、12周放射学评分分别为:1.51±0.16、1.87±0.20、2.16±0.33、3.86±0.30;B组为:2.30±0.18、2.87±0.16、3.25±0.48、5.60±0.29;C组为:2.68±0.17、4.15±0.37、5.43±0.31、7.63±0.35。多因素方差分析结果显示各实验组在4个时间点上评价新骨生成差异有显著性意义(P＜0.05)。⑥骨密度测量:术后A组2周、4周、8周、12周的骨密度分别为0.448±0.111、0.872±0.361、1.192±0.109、1.233±0.056;B组为:0.773±0.075、1.227±0.078、1.496±0.394、1.736±0.169;C组为:0.862±0.013、1.476±0.076、1.820±0.070、2.187±0.188。多因素方差分析结果显示两两比较均有统计学意义(P＜0.01);⑦组织学染色:术后2周:各组组织内均可见充血水肿、大量的淋巴细胞与中性粒细胞浸润。术后4周:炎性反应明显减轻,植入物内开始有新生微血管生成;C组可见新生的类骨质形成。术后8周:支架材料已经部分降解,B组可见大量成骨细胞,C组可见编织骨样组织。术后12周:植入的支架材料已完全降解,A组成骨不完全,部分标本见少许充血及坏死组织;B组可见大量成熟骨细胞,新生编织骨多见;C组缺损区见大量编织骨与板状骨的混合结构。 ⑧术后12周环境扫描电镜(Environment scanning electronmicroscope,ESEM)观察结果:术后12周A组显示:骨纤维排列不规则,可见大量骨陷窝;B组:可见骨小梁结构,但仍可见间隙;C组可见哈佛系统,大量骨小梁排列规则。结论:根据所进行实验的结果得出结论:鼠MSCs与nHAC体外复合培养结合程度较高,可以用来构建组织工程骨,复合了VEGF的MSCs/nHAC支架较单纯nHAC及MSCs/nHAC的支架对骨缺损的修复有更好的效果。对节段性骨缺损有较好的治疗效果。

关键词：血管内皮生长因子鼠骨髓间充质干细胞纳米晶胶原基骨骨缺损组织工程骨

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中药龟板化学成分调控干细胞增殖作用研究

中药龟板化学成分调控干细胞增殖作用研究

作者：王春燕华南师范大学

学位级别：硕士

本文结合传统和现代的分离、分析方法，对促进鼠骨髓间质干细胞(MSCs)增殖的中药龟板提取物有效部位，经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得16个样品;GC-MS技术研究它们的化学组成;并用MTT法研究它们对MSCs的增殖作用，结果显示，... 详细信息

本文结合传统和现代的分离、分析方法，对促进鼠骨髓间质干细胞(MSCs)增殖的中药龟板提取物有效部位，经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得16个样品;GC-MS技术研究它们的化学组成;并用MTT法研究它们对MSCs的增殖作用，结果显示，Ts-2，Ts-3，Ts-11，Ts-12，Ts-16能促进MSCs的增殖(P＜0.05);Ts-4对MSCs具有抑制作用，其它样品对MSCs的增殖作用不显著(P＞0.05)，不具统计学意义。根据GC-MS测定结果结合调控干细胞活性数据，预测龟板提取物中发挥主要作用的物质，并用HPLC和9个标准物质鉴定这些物质的存在。HPLC实验选取Ts-12和Ts-4，实验测得：组分Ts-12中含有十六酸甲酯(S-1)，十六酸乙酯(S-3)，十八酸甲酯(S-4)，甾醇(S-7)及十四酸甾醇酯(S-8)，组分Ts-4主要含有十八酸(S-5)。标准品采用MTT法和流式细胞仪研究了它们对rMSCs的增殖作用，结果表明十四酸甾醇酯和十六酸甲酯具有促进rMSCs增殖的作用，而十八酸具有抑制作用。为探求调控骨髓间质干细胞中药的共性，我们采用指纹图谱技术分析。根据生物活性结果和GC-MS测定的促进rMSCs增殖作用样品的总离子图的相似保留时间和相应峰面积，获得促rMSCs的增殖的指纹图;同样根据生物活性结果和GC-MS测定的抑制及无明显作用样品的总离子图的相似保留时间和相应峰面积，获得抑制rMSCs增殖的指纹图;用中药龟板提取物有效部位指纹图谱预测中药汤剂“四物汤”和“栽培红厚壳果仁”共七个样品。结果显示龟板活性部位指纹图谱预测其他中药活性正确率为86％，说明以生物活性为参照的指纹图谱具有科学性，为寻找相似活性的中药提供新思路。

关键词：龟板鼠骨髓间充质干细胞气质联用高效液相色谱 MTT法流式细胞法指纹图谱四物汤野生红厚壳

中药龟板活性部位GC-MS生物活性指纹图谱和应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中南药学 2007年第1期5卷 74-78页

作者：王春燕曾和平王婷婷陈薇张越华陈东风周健洪杜少辉黎晖华南师范大学有机化学研究所广州510006 华南理工大学化学科学学院功能分子研究所广州510641 广州中医药大学广州510405

目的探求调控骨髓间质干细胞中药的共性。方法硅胶柱层析龟板活性部位浸膏,用石油醚-乙酸乙酯作洗脱剂,梯度洗脱,得到16个样品;采用MTT法研究了它们对rMSCs的增殖调控作用,根据总离子图的相似保留时间和相应峰面积,获得促进rMSCs的增殖... 详细信息

目的探求调控骨髓间质干细胞中药的共性。方法硅胶柱层析龟板活性部位浸膏,用石油醚-乙酸乙酯作洗脱剂,梯度洗脱,得到16个样品;采用MTT法研究了它们对rMSCs的增殖调控作用,根据总离子图的相似保留时间和相应峰面积,获得促进rMSCs的增殖的指纹图;同样根据它们的总离子图的相似保留时间和相应峰面积也获得了抑制rMSCs增殖的指纹图;用中药龟板提取物有效部位指纹图谱预测中药汤剂“四物汤”和“栽培红厚壳果仁”共7个样品。结果活性实验结果显示Ts-2、Ts-3、Ts-11、Ts-12、Ts-16能促进rMSCs的增殖作用(P0.05),不具统计学意义;龟板活性部位指纹图谱预测其他中药活性正确率为86%。结论这种以生物活性为基础的指纹图谱具有科学性,为寻找相似活性的中药提供新思路。

关键词：龟板活性部位气质联用鼠骨髓间充质干细胞指纹图谱四物汤野生红厚壳