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鼠李糖乳杆菌LGG芳香酯酶的酶学表征与结构分析

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食品科学 2023年第8期44卷 162-169页

作者：李新锋郭彤彤李彬春山西大学大型科学仪器中心山西太原030006 山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西太原030006

为获得新型益生菌酯酶资源,通过挖掘鼠李糖乳杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus GG,LGG)的基因组信息,对芳香酯酶LggAE进行基因克隆、表达纯化、酶学表征与结构分析。结果表明:LggAE的最适反应pH值为7.5,在pH 7.0~10.0范围内保持75%以... 详细信息

为获得新型益生菌酯酶资源,通过挖掘鼠李糖乳杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus GG,LGG)的基因组信息,对芳香酯酶LggAE进行基因克隆、表达纯化、酶学表征与结构分析。结果表明:LggAE的最适反应pH值为7.5,在pH 7.0~10.0范围内保持75%以上酶活力,最适反应温度为50℃,偏好水解中链对硝基苯酚酯,最适底物为对硝基苯酚辛酸酯,在40℃条件下具有一定热稳定性,乙二醇可提升LggAE 17.3%酶活力,LggAE耐受二甲基亚砜,在较高盐浓度柠檬酸钠和氯化钠存在下能保持39.1%~71.0%酶活力,脱氧胆酸钠在高温下显著抑制酶活力。结构分析显示LggAE的底物结合口袋呈较小孔洞状,主要由脂肪族氨基酸残基构成。

关键词：芳香酯酶鼠李糖乳杆菌酶学表征结构分析底物结合口袋

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鼠李糖乳杆菌ZJ225细菌素的分离纯化及其特性研究

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中国食品学报 2015年第7期15卷 54-60页

作者：赵乙桢沈雷孙亚链姜雄韬顾青浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品微生物技术研究重点实验室杭州310035

从新鲜牛奶中分离筛选出1株有抑菌活性的乳酸菌,经形态学观察、生理生化分析及16S rDNA基因序列同源性分析,该菌为鼠李糖乳杆菌,命名为ZJ225。通过排除有机酸、过氧化氢对乳酸菌抑菌活性的干扰试验,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性;... 详细信息

从新鲜牛奶中分离筛选出1株有抑菌活性的乳酸菌,经形态学观察、生理生化分析及16S rDNA基因序列同源性分析,该菌为鼠李糖乳杆菌,命名为ZJ225。通过排除有机酸、过氧化氢对乳酸菌抑菌活性的干扰试验,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性;而用胰蛋白酶处理后,该菌的抑菌活性几乎完全丧失,说明该菌产生的活性物质是一种细菌素。该菌具有很广的抑菌谱,不仅对革兰氏阳性菌(藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、单增李斯特菌、表皮葡萄球菌等)有抑菌活性,而且对革兰氏阴性菌(大肠杆菌、铜绿假单胞菌等)有抑菌作用,甚至对真菌类(酿酒酵母)也有一定程度的抑制作用。经XAD-1180大孔树脂初步分离纯化的细菌素在121℃处理10 min,仍保持很强的抑菌活性,说明该细菌素的热稳定性很好。通过SDS-PAGE蛋白电泳分析该细菌素分子质量为4.4 ku。

关键词：鼠李糖乳杆菌细菌素分离纯化抑菌特性

鼠李糖乳杆菌LR-ZB1107-01的培养基优化及益生特性评价

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华南理工大学学报（自然科学版） 2022年第8期50卷 21-29页

作者：许喜林赵思博郑柳青刘冬梅华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

对课题组前期分离得到的对模拟胃肠道耐受良好的鼠李糖乳杆菌LR-ZB1107-01(Lactobacillus rhamnosus ZB1107-01)的培养基进行优化,初步研究了其益生特性,以提高单位体积发酵液中的菌体数量,为此菌株的开发和应用提供基础。首先,测定LRZB... 详细信息

对课题组前期分离得到的对模拟胃肠道耐受良好的鼠李糖乳杆菌LR-ZB1107-01(Lactobacillus rhamnosus ZB1107-01)的培养基进行优化,初步研究了其益生特性,以提高单位体积发酵液中的菌体数量,为此菌株的开发和应用提供基础。首先,测定LRZB1107-01菌株在MRS培养基中的生长曲线,明确其在液体培养基中的生长规律;其次,以LR-ZB1107-01菌株发酵液中的活菌数为检测指标,对不同种类的氮源、碳源及生长因子进行单因素考察,以确定最适培养基组分,并进行响应面试验来优化培养基配比,以筛选最优发酵培养基;最后,对LR-ZB1107-01的硝基还原酶活性、氨基脱羧酶活性等体外安全性进行评价。结果表明,在2%葡萄糖含量的MRS培养基基础上,改变3种显著影响活菌数的营养成分及含量,即添加0.02%D-异抗坏血酸、0.12%硫酸镁、3%蛋白胨,再结合优化后的培养条件,活菌数可达8.56×10^(8)CFU/mL,较在MRS培养基中提高了约10.7倍。体外安全性评价结果表明,LR-ZB1107-01对硝基还原酶和氨基酸脱羧酶均呈阴性,说明该菌株具有一定的安全性。文中研究成果对LR-ZB1107-01菌株微生态制剂的工业化生产和后续产品开发具有一定的指导作用。

关键词：鼠李糖乳杆菌培养基优化响应面设计益生特性

鼠李糖乳杆菌DHC32对小鼠肠道菌群和肠道黏膜免疫的影响

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中国食品学报 2020年第6期20卷 73-80页

作者：许女魏莎莎杨光陈旭峰张浩王如福山西农业大学食品科学与工程学院山西太谷030801 山西农业大学实验教学中心山西太谷030801

本文主要研究了鼠李糖乳杆菌DHC32对正常小鼠肠道菌群和肠道黏膜免疫的影响。结果表明,DHC32降低了粪便中氨、水分及pH值,提高了小鼠粪便菌群营养代谢率。与对照组相比,DHC32处理组小鼠粪便中乳杆菌、双歧杆菌等有益菌的数量显著提高,... 详细信息

本文主要研究了鼠李糖乳杆菌DHC32对正常小鼠肠道菌群和肠道黏膜免疫的影响。结果表明,DHC32降低了粪便中氨、水分及pH值,提高了小鼠粪便菌群营养代谢率。与对照组相比,DHC32处理组小鼠粪便中乳杆菌、双歧杆菌等有益菌的数量显著提高,而拟杆菌、肠杆菌等有害菌的数量显著下降,并且短链脂肪酸的含量大幅提高。本文还证明鼠李糖乳杆菌DHC32通过提高My D88、IL-23及IL-22等免疫因子和抗菌蛋白RegIIIγ,黏附蛋白MUC1、MUC2基因的表达,来稳固黏膜屏障功能,增强宿主的免疫机能而改善动物的肠道健康。

关键词：鼠李糖乳杆菌肠道菌群黏膜免疫

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鼠李糖乳杆菌纯种发酵大豆乳工艺研究

中国食品学报 2013年第7期13卷 19-24页

作者：苑社强谷新晰李晨许文涛田洪涛罗云波河北农业大学科教兴农中心河北保定071001 河北农业大学食品科技学院河北保定071001 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

以从益生菌乳制品中自行分离选育的生长繁殖力强、发酵活力高的鼠李糖乳杆菌(05-28)为试验菌株。通过正交试验研究鼠李糖乳杆菌纯种发酵大豆乳的工艺条件,确定大豆乳培养基的最适工艺条件为:总接种量5%(活菌数约为5×107cfu/mL),基质起... 详细信息

以从益生菌乳制品中自行分离选育的生长繁殖力强、发酵活力高的鼠李糖乳杆菌(05-28)为试验菌株。通过正交试验研究鼠李糖乳杆菌纯种发酵大豆乳的工艺条件,确定大豆乳培养基的最适工艺条件为:总接种量5%(活菌数约为5×107cfu/mL),基质起始pH 7.0,发酵温度37℃,有氧条件发酵。采用最适工艺条件进行鼠李糖乳杆菌纯种发酵大豆乳,凝乳时间为5h,发酵产品的总活菌数1.6×109cfu/mL,pH 4.5,滴定酸度79.6°T。发酵产品色泽呈乳白色,凝乳良好,酸甜适口。

关键词：鼠李糖乳杆菌发酵大豆酸乳工艺

鼠李糖乳杆菌LR ZB1107-01的体外抗氧化活性

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华南理工大学学报（自然科学版） 2021年第3期49卷 88-94页

作者：许喜林周晓莉郑柳青刘冬梅华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

将鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ZB1107-01(LR ZB1107-01)与Lactobacillus rhamnosus GG(LGG)商业菌株进行体外抗氧化能力的比较,以DPPH(1,1-二苯-三硝基苯肼)自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除率为指标,并建立Caco-2细胞氧化损伤模型,通过测定SOD、GSH-Px酶活性,探究LR ZB1107-01对细胞氧化应激的影响。结果表明:菌浓度越高,对3种自由基的清除能力越强,LR ZB1107-01的发酵液对DPPH自由基的清除率显著高于LGG,上清液对羟自由基的清除率略高于LGG,细胞裂解液对超氧阴离子自由基的清除率显著高于LGG;在Caco-2细胞氧化损伤模型中,对SOD、GSH-Px酶活性进行测定,发现LR ZB1107-01可以降低Caco-2细胞的氧化应激损伤,提高氧化应激状态下的抗氧化能力。

关键词：鼠李糖乳杆菌抗氧化能力自由基 Caco-2细胞

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鼠李糖乳杆菌电转化条件的研究

中国食品学报 2017年第4期17卷 65-71页

作者：北婷婷李晨谷新晰张会彦田洪涛罗云波河北农业大学食品科技学院河北保定071001 河北省农产品加工工程技术研究中心河北保定071001 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

目的:研究不同因素对鼠李糖乳杆菌电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,提高电转化效率。方法:以鼠李糖乳杆菌05-28为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒p MG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究了质粒浓度、电击缓冲液、电转... 详细信息

目的:研究不同因素对鼠李糖乳杆菌电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,提高电转化效率。方法:以鼠李糖乳杆菌05-28为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒p MG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究了质粒浓度、电击缓冲液、电转化参数、复苏培养基组成及复苏培养时间对电转化效率的影响。结果:利用1μL质量浓度为1μg/μL的质粒p MG36e,在电场强度8 k V/cm,电阻200Ω,电容25μF的条件下进行电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl_2、CaCl_2且无吐温80的MRS再生培养基复苏培养2.5 h,并采用添加红霉素的筛选培养基,获得1.66×105CFU/μg DNA的电转化效率。结论 :实现了鼠李糖乳杆菌的高效遗传转化,为遗传育种提供了技术支持。

关键词：鼠李糖乳杆菌质粒pMG36e 电转化电转化效率

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鼠李糖乳杆菌原生质体制备与再生

中国食品学报 2015年第12期15卷 39-46页

作者：杨子萱李晨卢海强田晶晶谷新晰田洪涛罗云波河北农业大学食品科技学院河北保定071001 北京农学院食品科学学院北京102206 中国农业大学食品科技与营养工程学院北京100083

目的:以鼠李糖乳杆菌为试验菌株,探究其原生质体制备和再生的影响因素。方法:从菌龄、前处理、溶菌酶浓度及酶解时间等方面研究其对鼠李糖乳杆菌原生质体制备的影响。通过正交试验获得鼠李糖乳杆菌原生质体制备的最优组合,通过添加不同... 详细信息

目的:以鼠李糖乳杆菌为试验菌株,探究其原生质体制备和再生的影响因素。方法:从菌龄、前处理、溶菌酶浓度及酶解时间等方面研究其对鼠李糖乳杆菌原生质体制备的影响。通过正交试验获得鼠李糖乳杆菌原生质体制备的最优组合,通过添加不同再生稳定剂确定鼠李糖乳杆菌原生质体再生的最适条件。结果:菌龄7 h,以1.5%的甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖进行前处理,溶菌酶浓度30 mg/m L、酶解时间60 min,在此条件下进行试验原生质体形成率可达97%;同时,以蔗糖作为再生稳定剂的RM1再生培养基,可实现33.8%的原生质体再生率。结论:为实现鼠李糖乳杆菌原生质体转化以及乳酸菌遗传育种提供了技术支持。

关键词：鼠李糖乳杆菌原生质体制备再生

鼠李糖乳杆菌对河豚毒素的免疫活性消减作用方式

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食品科学 2021年第14期42卷 103-109页

作者：叶精勤肖叶阎俊许长华汪立平卢瑛上海海洋大学食品学院农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306

为探究鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)免疫活性的消减作用方式和可能作用位点,分别采用活化、热灭活和破碎的鼠李糖乳杆菌以及去除胞外多糖、原生质体、细胞壁和肽聚糖的分离样品,与TTX标准品在37... 详细信息

为探究鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)免疫活性的消减作用方式和可能作用位点,分别采用活化、热灭活和破碎的鼠李糖乳杆菌以及去除胞外多糖、原生质体、细胞壁和肽聚糖的分离样品,与TTX标准品在37℃孵育1 h,使用竞争性酶联免疫吸附法分析作用前后TTX的免疫活性变化。通过化学处理掩蔽鼠李糖乳杆菌表面的羧基和氨基,采用傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)分析菌体表面的化学键振动类型和官能团变化情况。结果发现,活化、热灭活和破碎后的鼠李糖乳杆菌均可消减TTX的免疫活性,因此TTX免疫活性的变化和鼠李糖乳杆菌的活性无关。各分离样品对TTX的消减作用表明肽聚糖成分对TTX免疫活性的消减率最高可达到47%。FTIR分析发现鼠李糖乳杆菌表面羧基掩蔽后可显著降低TTX免疫活性的消减率至18%,而掩蔽氨基则对作用前后的TTX消减率影响无显著差异(P>0.05)。实验表明,消减TTX免疫活性的原因可能为TTX与鼠李糖乳杆菌表面肽聚糖上的羧基结合。

关键词：河豚毒素鼠李糖乳杆菌消减作用免疫活性