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作者：徐亚光南京医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨地塞米松(DEX)对鼠抗血清引起的人足细胞损伤的保护作用及影响机制。方法:1.足细胞的培养与传代:细胞生长在含ITS(胰岛素5ug/ml、转铁蛋白5ug/ml和亚硒酸钠5ng/ml)、10%胎牛血清、100 U/ml青链霉素、100 mg/L链霉素的RPMI1640... 详细信息

目的:探讨地塞米松(DEX)对鼠抗血清引起的人足细胞损伤的保护作用及影响机制。方法:1.足细胞的培养与传代:细胞生长在含ITS(胰岛素5ug/ml、转铁蛋白5ug/ml和亚硒酸钠5ng/ml)、10%胎牛血清、100 U/ml青链霉素、100 mg/L链霉素的RPMI1640培养液中,在5%CO2、33℃培养孵箱传代培养。然后转入37℃、5%CO2培养孵箱分化培养至少14d后进行实验。分化成熟的足细胞以含1%胎牛血清RPMI1640培养基同步化处理12h用于实验。2.足细胞的分组与干预:将细胞分为以下4组:①正常对照组;②鼠抗血清(rat anti-serum,RA)(20μl/ml)组:RA(20μl/ml)组、RA+myosin9多肽(polypeptide,P)(20μl/ml)组,分别培养足细胞24h、48h、72h;③灭活鼠抗血清组:灭活RA(20μl/ml)组、灭活RA+正常鼠血清(20μl/ml)组,培养足细胞72h;④DEX(10-5mol/L)干预组:RA(20μl/ml)+DEX(10-5mol/L)组、RA(20μl/ml)+P(20μg/ml)+DEX(10-5mol/L)组,共同培养足细胞72h。用倒置显微镜及荧光显微镜观察足细胞形态,用Western印迹和RT-PCR法分别检测足细胞nephrin、myosin9和α-tubulin的表达。***[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,简称噻唑蓝]法检测足细胞活力,其分组为:①正常对照组;②RA(20μl/ml)组;③灭活RA(20μl/ml)组;④灭活RA+正常鼠血清(20μl/ml)组;⑤ RA(20μl/ml)+P(20μg/ml)组;⑥ RA(20μl/ml)+DEX(10-5mol/L)组;⑦ RA(20μl/ml)+P(20μg/ml)+DEX(10-5mol/L)组,以上7组分别培养24h、48h、72h。结果:1.各种干预因素作用后人足细胞形态的变化与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞形态无明显影响;灭活鼠抗血清加正常鼠血清组足细胞形态发生改变,细胞膜变形,胞浆减少;鼠抗血清单组作用组及鼠抗血清加多肽组足细胞形态均发生变化,细胞膜皱缩,足突减少,地塞米松干预后,可在一定程度上改善足细胞形态。2.鼠抗血清对人足细胞nephrin表达的影响与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞nephrin蛋白及mRNA表达无明显影响(P>0.05);鼠抗血清作用24h、48h、72h后,与正常对照组比较,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达逐渐下降,呈时间依赖性(P鼠抗血清对人足细胞nephrin的表达的影响与正常对照组相比,作用72h后,灭活鼠抗血清作用组nephrin蛋白表达无明显变化(P>0.05),鼠抗血清单独干预组和灭活鼠抗血清加正常鼠血清组nephrin蛋白均表达减少(P均鼠抗血清及myosin9多肽对人足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin表达的影响与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin蛋白及mRNA表达无明显影响(P>0.05);鼠抗血清及鼠抗血清加myosin9 多肽作用 72h 后,足细胞 nephrin、myosin9 及 α-tubulin 蛋白及 mRNA表达均明显下降(P鼠抗血清及鼠抗血清加myosin9多肽干预后的人足细胞nephrin、myosin9 及 α-tubulin 表达的影响与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin蛋白及mRNA表达无明显影响(P>0.05);地塞米松可上调鼠抗血清单独干预及鼠抗血清加多肽共同干预的足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin蛋白及mRNA 表达(P鼠抗血清对人足细胞形态无明显影响(P>0.05);作用72h后,灭活鼠抗血清加正常鼠血清组、鼠抗血清单独干预组及鼠抗血清加多肽干预组足细胞活力均下降(P鼠抗血清及鼠抗血清加多肽作用后人足细胞的活力(P鼠抗血清及鼠抗血清加多肽均可使足细胞形态发生改变,细胞活力下降,nephrin、myosin9、α-tubulin 蛋白及 mRNA 表达下调。2.地塞米松作用后,在一定程度上恢复足细胞形态,改善细胞活力,上调nephrin、myosin9蛋白及mRNA表达,改善足细胞损伤。目的:探讨氟伐他汀(Flu)对高

关键词：地塞米松足细胞鼠抗血清 nephrin myosin9 高糖氟伐他汀血管紧张素Ⅱ

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中华按蚊幼虫肠壁膜泡的制备及其鼠抗血清对幼虫的作用

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中国媒介生物学及控制杂志 1998年第6期9卷 424-426页

作者：刘相萍张洪花孔任秋徐旭东山东省寄生虫病防治研究所

目的：搞清Ｂ．ｓ杀虫蛋白对蚊幼虫肠细胞膜的作用机理，从而改进杀虫蛋白活性。方法：差速离心制备肠细胞膜泡，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析其蛋白组分；测试其鼠抗血清对蚊幼虫的效应。结果：膜制备物蛋白组分分析显示了膜泡的纯度，而... 详细信息

目的：搞清Ｂ．ｓ杀虫蛋白对蚊幼虫肠细胞膜的作用机理，从而改进杀虫蛋白活性。方法：差速离心制备肠细胞膜泡，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析其蛋白组分；测试其鼠抗血清对蚊幼虫的效应。结果：膜制备物蛋白组分分析显示了膜泡的纯度，而抗血清则对Ⅰ龄幼虫有明显的致死效应；日龄越小，致死率越高。

关键词：中华按蚊肠道膜泡鼠抗血清

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原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

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实验动物科学 2017年第3期34卷 1-5页

作者：王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原... 详细信息

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

关键词：鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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中华按蚊幼虫肠细胞膜级分的制备及其鼠抗血清对幼虫的效应 (英文)

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中国寄生虫病防治杂志 1994年第1期7卷 46-49页

作者：刘相萍张洪花孔任秋徐旭东刘仑华胡玉祥山东省寄生虫病防治研究所济宁市272133

已知芽孢杆卤杀虫蛋白的毒效依赖于它们与幼虫肠细胞膜的亲合力。对于其机理的研究和应用蛋白质工程手段改造杀蚊蛋白来说,蚊幼虫肠细胞膜的制备是必不可少的。本研究收集了万余只中华按蚊幼虫肠道,用于分离其细胞膜级分,进行蛋白组分分... 详细信息

已知芽孢杆卤杀虫蛋白的毒效依赖于它们与幼虫肠细胞膜的亲合力。对于其机理的研究和应用蛋白质工程手段改造杀蚊蛋白来说,蚊幼虫肠细胞膜的制备是必不可少的。本研究收集了万余只中华按蚊幼虫肠道,用于分离其细胞膜级分,进行蛋白组分分析,鼠抗血清的制备以及该抗血清对幼虫的作用的观察。仅在一龄幼虫观察到致死效应。

关键词：中华按蚊幼虫肠细胞膜鼠抗血清

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用基因融合技术进行杀蚊幼毒蛋白基因的研究Ⅱ.蚊幼虫肠壁细胞膜抗体基因的克隆

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中国寄生虫病防治杂志 1999年第3期12卷 226-228页

作者：刘相萍闫歌徐旭东孔任秋山东省寄生虫病防治研究所济宁272033

为了提高Ｂ．ｓ．对蚊幼虫肠壁细胞膜的识别与结合力从而提高其杀蚊活性，本实验解剖了万余只中华按蚊幼虫肠道，制备了按蚊幼虫肠壁膜泡抗原及其鼠抗血清。抗原蛋白组分分析表明膜泡的纯度较高，而抗血清实验则显示出抗体组分与肠壁... 详细信息

为了提高Ｂ．ｓ．对蚊幼虫肠壁细胞膜的识别与结合力从而提高其杀蚊活性，本实验解剖了万余只中华按蚊幼虫肠道，制备了按蚊幼虫肠壁膜泡抗原及其鼠抗血清。抗原蛋白组分分析表明膜泡的纯度较高，而抗血清实验则显示出抗体组分与肠壁的结合作用。利用ＰＣＲ技术成功扩增了小鼠抗体重链区基因，借助Ｔ４ＤＮＡ聚合酶的修饰，使抗体基因得以成功克隆，为研制抗体基因与毒蛋白基因融合编码的“生物导弹”打下了基础。

关键词：中华按蚊肠细胞膜鼠抗血清抗体基因基因综合

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青霉素过敏休克机制的研究 Ⅳ、6-氨基青霉烷酸蛋白结合物免疫学的进一步观察

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中国抗生素杂志 1986年第5期 446-448页

作者：马统勋段民江张启堂裴森岳河南医科大学药理教研室河南医科大学药理教研室郑州

6-氨基青霉烷酸(6-APA)为青霉素的母核及半合成青霉素原料,文献报道其蛋白结合物属次要抗原决定簇,与青霉素过敏反应有关,但关于其蛋白结合物的免疫学研究

关键词：过敏休克 APA BSA 反应致敏青霉素抗菌素蓝斑小白鼠尾静脉注射鼠抗血清豚鼠荷兰猪动物热灭活青霉烷氨基

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