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黔北麻羊CYP17A1、CYP19A1基因组织表达、功能预测及与产羔数的关联性分析

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农业生物技术学报 2022年第6期30卷 1140-1152页

作者：张艳陈祥周志楠付开斌王忠李世军杨沛方惠茂茂贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州大学动物科学学院贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室

细胞色素P450c17 (cytochrome P450c17, CYP17A1)及细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom, CYP19A1)对卵泡发育、排卵、主要生殖激素分泌及合成均有重要作用，并影响动物的繁殖性能。本研究以健康黔北麻羊(Capra hircus)为研究对... 详细信息

细胞色素P450c17 (cytochrome P450c17, CYP17A1)及细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom, CYP19A1)对卵泡发育、排卵、主要生殖激素分泌及合成均有重要作用，并影响动物的繁殖性能。本研究以健康黔北麻羊(Capra hircus)为研究对象，利用qPCR检测CYP17A1、CYP19A1基因的组织表达，以PCR直接测序法筛选SNP突变位点，通过建立一般线性模型分析SNPs对黔北麻羊不同胎次产羔数的影响；分析了CYP17A1、CYP19A1基因在各组织中的表达规律及SNPs与产羔数之间的关联性。结果显示，CYP17A1基因在单、多羔个体卵巢均表达最高，且极显著高于垂体、下丘脑、子宫、输卵管(PC、g.128G>A、g.129A>G、g.164T>C均位于第1外显子，g.2045G>A位于第2外显子，g.4387G>A和g.4456C>T位于第6外显子；关联性分析表明，CYP17A1基因SNPs与黔北麻羊产羔数均不相关。CYP19A1基因编码区第9外显子检测出一个变异位点g.48818C>A，其AA基因型的产羔数显著高于CA基因型(P黔北麻羊CYP17A1、CYP19A1基因在多羔个体卵巢组织中均表达最高(P黔北麻羊产羔数之间不相关，CYP19A1基因g.48818C>A位点AA基因型150只羊中仅存在4只，因样本量少，还需验证。本研究为进一步探究CYP17A1、CYP19A1基因变异与动物繁殖繁育之间的关系提供了基础数据。

关键词：黔北麻羊细胞色素P450c17 (CYP17A1) 细胞色素P450芳香化酶(CYP19A1) 产羔数 SNP

黔北麻羊CTSK、FN1基因生物信息学分析及其在性腺轴中的表达

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西南农业学报 2023年第4期36卷 854-860页

作者：赵佳福周明帅徐畅杨秀远陈祥贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

【目的】研究组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)和纤维连接蛋白1(Fibronectin 1,FN1)基因与黔北麻羊繁殖率之间的相互关系,为研究CTSK、FN1基因调控山羊卵泡发育的分子机制提供参考。【方法】通过生物信息学方法分析黔北麻羊CTSK、FN1蛋白... 详细信息

【目的】研究组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)和纤维连接蛋白1(Fibronectin 1,FN1)基因与黔北麻羊繁殖率之间的相互关系,为研究CTSK、FN1基因调控山羊卵泡发育的分子机制提供参考。【方法】通过生物信息学方法分析黔北麻羊CTSK、FN1蛋白理化性质、亚细胞定位、信号肽位点和蛋白高级结构,并进行氨基酸同源性分析,构建系统发育进化树;采用荧光定量PCR法检测CTSK、FN1基因在单羔、多羔黔北麻羊性腺轴(下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢)中的表达量。【结果】CTSK、FN1基因分别编码330和2478个氨基酸,理论PI值分别为8.82和5.37,CTSK是一种具有信号肽的稳定亲水性蛋白,而FN1是一种具有信号肽的不稳定亲水性蛋白;亚细胞定位结果说明:CTSK蛋白可能主要在细胞外和内质网中发挥生物学作用,而FN1蛋白可能主要在细胞核中发挥生物学作用;高级结构预测结果显示,CTSK和FN1蛋白均主要由无规则卷曲构成;与其他动物相比,黔北麻羊CTSK、FN1基因均与反刍动物绵羊及牛的亲缘关系最近。qPCR分析表明:CTSK和FN1基因在单羔、多羔黔北麻羊下丘脑、垂体、子宫、输卵管和卵巢组织中均有表达,与单羔组相比,多羔组CTSK基因在卵巢、下丘脑、子宫中的表达量均极显著下调(P黔北麻羊的繁殖性状呈负相关,FN1基因则呈正相关,CTSK和FN1基因均是影响黔北麻羊繁殖性能的重要候选基因。

关键词：黔北麻羊性腺轴 CTSK基因 FN1基因生物信息学

黔北麻羊GPx3基因克隆、生物信息学分析及在不同性腺组织中的表达分析

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中国畜牧杂志 2022年第1期58卷 77-84页

作者：付开斌陈祥周志楠张艳惠茂茂洪磊贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

为探究GPx3基因在产单、多羔黔北麻羊不同性腺组织中的表达规律及其蛋白质的结构与功能,本实验以黔北麻羊为研究对象,采集单、多羔黔北麻羊的下丘脑、垂体、子宫、输卵管和卵巢提取总RNA,运用qRT-PCR技术,分析GPx3基因mRNA在单、多羔黔... 详细信息

为探究GPx3基因在产单、多羔黔北麻羊不同性腺组织中的表达规律及其蛋白质的结构与功能,本实验以黔北麻羊为研究对象,采集单、多羔黔北麻羊的下丘脑、垂体、子宫、输卵管和卵巢提取总RNA,运用qRT-PCR技术,分析GPx3基因mRNA在单、多羔黔北麻羊5个不同性腺组织中的表达水平;PCR法扩增克隆黔北麻羊GPx3基因的CDS区;生物信息学分析并预测黔北麻羊GPx3蛋白的结构与功能。qRT-PCR结果显示:GPx3基因在单、多羔黔北麻羊的5个不同性腺组织中均有表达,且均在卵巢的表达量最高;除下丘脑外,其余各组织在多羔组中的表达量均极限著高于单羔组。T克隆结果表明:黔北麻羊GPx3基因CDS区序列为681 bp,与NCBI上收录的山羊的mRNA序列同源性达99.85%。生物信息学分析发现:黔北麻羊GPx3蛋白可能位于细胞外,且具有信号肽,属于不稳定的亲水性分泌蛋白,其三级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋构成;遗传进化树分析得出,黔北麻羊GPx3基因与绵羊的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。本研究对GPx3基因进行了克隆和生物信息学分析,并揭示了GPx3基因在黔北麻羊不同性腺组织中的表达差异性,为进一步探究GPx3基因对黔北麻羊繁殖性状的调控机制提供基础。

关键词：黔北麻羊 GPx3基因克隆生物信息学分析荧光定量PCR

黔北麻羊RARs基因在不同组织中的表达分析

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中国畜牧杂志 2022年第2期58卷 87-91页

作者：吴寿堂祝家秘温晓艳周志楠陈祥贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

为研究视黄酸受体α(Retinoic Acid Receptor Alpha,RARA)、视黄酸受体β(Retinoic Acid Receptor Beta,RARB)与视黄酸受体γ(Retinoic acid receptor gamma,RARG)基因在黔北麻羊不同组织中的表达情况,本研究提取黔北麻羊心、肝、脾、肺、肾、下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢10个组织总RNA并逆转录合成cDNA第1链,随后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RARA、RARB与RARG基因在黔北麻羊10个组织中的表达水平。结果显示:RARA、RARB、RARG 3个基因在黔北麻羊10个组织中均有不同程度的表达,其中,RARA基因表达量由大到小依次为肝>心>下丘脑>脾>垂体>肺>输卵管>子宫>肾>卵巢,肝脏RARA基因表达量最高,卵巢RARA基因表达量最低,两者之间差异极显著。黔北麻羊RARB基因表达由大到小依次为输卵管>下丘脑>子宫>卵巢>肝>心>肺>肾>垂体>脾,其中,输卵管RARB基因的表达量极显著高于其余组织;而RARG基因表达顺序依次为下丘脑>卵巢>输卵管>肝>心>子宫>肾>肺>垂体>脾,RARG基因的表达量在下丘脑中极显著高于其余9个组织,除下丘脑外,卵巢RARG基因表达量也极显著高于其余8个组织。本研究探明了RARA、RARB与RARG在黔北麻羊不同组织中的表达规律,研究结果为今后进一步探明其功能及对黔北麻羊繁殖性状的调控机理奠定基础。

关键词：黔北麻羊 RARA RARB RARG 组织表达

黔北麻羊RARRES1基因的克隆表达及功能初步研究

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畜牧兽医学报 2020年第7期51卷 1548-1562页

作者：周志楠陈祥敖叶洪磊唐文陈浩瀚贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1(retinoic acid receptor responder 1,RARRES1)基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、... 详细信息

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1(retinoic acid receptor responder 1,RARRES1)基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、高级结构、疏水性、氨基酸同源性及亚细胞定位,并构建系统进化树,同时应用qRT-PCR法检测RARRES1基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平,随后构建目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1 RNA干扰载体,并转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞,利用qRT-PCR法从细胞水平检测并分析目的基因真核表达载体与RNA干扰载体对目的基因RARRES1及多胎性状候选基因BMPR-IB mRNA表达的影响。qRT-PCR结果显示,RARRES1 mRNA在卵巢中的表达量最高,单羔组黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于多羔组(P黔北麻羊RARRES1基因共编码289个氨基酸,RARRES1是一种定位在细胞质中的亲水性蛋白,蛋白质二级结构分析显示,其主要是由α-螺旋与无规则卷曲构成,三级结构预测与二级结构分析一致;同源性以及系统进化树结果显示,黔北麻羊RARRES1基因序列与绵羊、牛的同源性高、遗传距离近,与鸡的同源性最低、遗传距离最远。经双酶切、测序验证后,表明目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1干扰载体构建成功。将各载体转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞后,与空白对照相比,重组质粒pEGFP-N3-RARRES1能极显著提高RARRES1与BMPR-IB的表达量(P黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列并进行了生物信息学分析。将重组质粒pEGFP-N3-RARRES1、pGPH1/GFP/Neo-RARRES1成功转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞并验证其表达变化。结果表明,RARRES1可能对山羊多胎性状具有促进作用,为进一步探究RARRES1基因对山羊多胎性状的调控机理提供依据。

关键词：黔北麻羊 RARRES1基因超表达载体干扰载体卵泡颗粒细胞

黔北麻羊PPP3CA基因克隆、生物信息学分析及不同组织表达研究

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中国畜牧杂志 2021年第10期57卷 84-88,95页

作者：惠茂茂陈祥敖叶周志楠贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

为克隆获得黔北麻羊PPP3CA基因的编码序列进行生物信息学分析并探究PPP3CA基因在黔北麻羊不同组织中的表达情况,本实验应用RT-PCR克隆PPP3CA基因的CDS区序列,构建pMD19-T-PPP3CA亚克隆载体,用实时荧光定量PCR法检测黔北麻羊PPP3CA基因... 详细信息

为克隆获得黔北麻羊PPP3CA基因的编码序列进行生物信息学分析并探究PPP3CA基因在黔北麻羊不同组织中的表达情况,本实验应用RT-PCR克隆PPP3CA基因的CDS区序列,构建pMD19-T-PPP3CA亚克隆载体,用实时荧光定量PCR法检测黔北麻羊PPP3CA基因在心、肝、脾、肺、肾、背最长肌6个组织中的表达水平。结果显示:黔北麻羊PPP3CA基因CDS区序列全长为1 566 bp,编码521个氨基酸,理论等电点为5.58;黔北麻羊PPP3CA蛋白属亲水性、非跨膜蛋白,二级结构分析显示其主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构预测与二级结构结果相符。黔北麻羊PPP3CA基因核苷酸序列与绵羊同源性最高;PPP3CA基因在黔北麻羊不同组织中均有表达,在背最长肌组织中表达量极显著高于其他组织,背最长肌组织表达量极显著高于其他组织。本实验揭示了PPP3CA基因在黔北麻羊的表达差异并初步分析了其生物学功能,为进一步探究PPP3CA基因对山羊的生长发育奠定基础。

关键词：黔北麻羊 PPP3CA 克隆生物信息学分析表达

黔北麻羊TGFβ2基因克隆、表达及生物信息学分析

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中国畜牧杂志 2021年第10期57卷 125-130页

作者：张艳敖叶洪磊周志楠陈祥贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

为探究转化生长因子β2基因(Transforming Growth Factor beta 2,TGFβ2)在黔北麻羊性腺轴组织的表达水平和蛋白结构功能。本研究以健康成年黔北麻羊母羊为对象,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个组织并提取总RNA,逆转录合成cDN... 详细信息

为探究转化生长因子β2基因(Transforming Growth Factor beta 2,TGFβ2)在黔北麻羊性腺轴组织的表达水平和蛋白结构功能。本研究以健康成年黔北麻羊母羊为对象,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个组织并提取总RNA,逆转录合成cDNA第一链,使用RT-qPCR技术检测TGFβ2基因在黔北麻羊性腺组织中的差异表达;进一步使用RT-PCR法克隆黔北麻羊TGFβ2基因CDS区,并构建pMD-19T-TGFβ2亚克隆载体。克隆测序结果显示:通过RT-PCR法成功获得的黔北麻羊TGFβ2基因CDS区,包含1 329 bp,与NCBI上山羊TGFβ2基因序列相似度达到99.85%,共编码442个氨基酸;TGFβ2蛋白存在信号肽位点,且主要定位于细胞质的相对不稳定分泌蛋白;分子式为C2245H3535N615O662S25;遗传进化树分析得出,与9个物种相比较,黔北麻羊TGFβ2基因与绵羊和牛的遗传距离最近,与马和狗的遗传距离最远。RT-qPCR结果显示,TGFβ2基因在子宫组织中表达最高,极显著高于输卵管和下丘脑组织,显著高于垂体及卵巢组织。本实验完成了黔北麻羊TGFβ2基因T-克隆和蛋白结构的功能预测,揭示了TGFβ2基因在黔北麻羊性腺轴组织中的表达差异性,这为进一步探索TGFβ2基因对黔北麻羊繁殖性能的分子机制提供了基础数据。

关键词：黔北麻羊克隆相对表达量 TGFβ2 生物信息学分析

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黔北麻羊规模化饲养管理技术

养殖与饲料 2024年第4期23卷 55-60页

作者：蔡玉波钟怀涛安小焱李世春李光全贵州省习水县农业农村局贵州习水564600 贵州省习水县二郎镇农业服务中心贵州习水564611 习水县富兴牧业有限公司贵州习水564699 遵义职业技术学院现代农业系贵州遵义563000

贵州省习水县依托龙头企业,采取订单养殖模式,推进以黔北麻羊为资源的良种繁育、标准养殖、精深加工、销售、文旅融合发展,打造成推动乡村振兴、拉动县域经济增长的优势支柱产业。但受养殖技术薄弱、规模养殖户少、繁殖效率低等限制,阻... 详细信息

贵州省习水县依托龙头企业,采取订单养殖模式,推进以黔北麻羊为资源的良种繁育、标准养殖、精深加工、销售、文旅融合发展,打造成推动乡村振兴、拉动县域经济增长的优势支柱产业。但受养殖技术薄弱、规模养殖户少、繁殖效率低等限制,阻碍了黔北麻羊规模化发展。本文结合黔北地区自然生态资源实际,对黔北麻羊规模化饲养管理技术进行分析探讨,带动发展家庭农场和适度规模养殖大户,提高规模养殖占比,以促进黔北麻羊产业健康可持续发展。

关键词：黔北麻羊规模化饲养羊舍设计饲养管理技术规程健康养殖

NGF基因在黔北麻羊卵巢颗粒细胞及组织的表达分析

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中国兽医学报 2023年第7期43卷 1558-1566页

作者：陈祥敖叶李诚兰赵佳福周志楠韦仕南贵州大学动物科学学院贵州高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点试验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点试验室贵州贵阳550025

旨在验证NGF基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究NGF基因对黔北麻羊产羔性状的影响。选取健康、体质量45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qPCR法检测NGF基因在单、多羔组黔北麻羊母羊不同组织的表达水... 详细信息

旨在验证NGF基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究NGF基因对黔北麻羊产羔性状的影响。选取健康、体质量45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qPCR法检测NGF基因在单、多羔组黔北麻羊母羊不同组织的表达水平,构建pEGFP-N3-NGF重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-NGF重组质粒进入卵巢颗粒细胞,分为超表达NGF试验组和pEGFP-N3空载体对照组,通过检测培养基中雌二醇、孕酮的浓度,及对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、NGF、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因mRNA表达的影响,来探究NGF基因对卵巢颗粒细胞的影响。结果表明,NGF基因在黔北麻羊各组织中均有表达,组间比较可知,卵巢和输卵管在多羔组表达极显著高于单羔组(P黔北麻羊发情及妊娠的维持,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,也极显著促进繁殖相关基因mRNA的表达,而这些繁殖相关基因都能够调控卵泡数、卵泡的发育与形成以及排卵,因此,NGF基因能够促进这些基因表达,进而促进卵泡的发育、形成及排卵,提高山羊的产羔力,这为产羔性状相关基因的研究提供了理论基础,初步认为NGF基因可作为探究影响山羊产羔性状的候选基因。

关键词：黔北麻羊 NGF 卵巢颗粒细胞差异表达