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大黄素与P-gp、MRP2、MRP3相互作用及与黑豆主要成分配伍的研究

大黄素与P-gp、MRP2、MRP3相互作用及与黑豆主要成分配伍的研究

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作者：谭瑞湘广州中医药大学

学位级别：硕士

目的采用Ussing chamber技术建立药物与大鼠肠粘膜MRP2、MRP3的肠道转运实验模型,并应用这两种模型分别研究大黄素与MRP2、MRP3的相互关系。此外,在课题组前期研究基础之上,考察大黄素对P-gp的影响,并将大黄素与黑豆中主要单体成分染料... 详细信息

目的采用Ussing chamber技术建立药物与大鼠肠粘膜MRP2、MRP3的肠道转运实验模型,并应用这两种模型分别研究大黄素与MRP2、MRP3的相互关系。此外,在课题组前期研究基础之上,考察大黄素对P-gp的影响,并将大黄素与黑豆中主要单体成分染料木素,染料木苷,大豆苷元,大豆苷进行配伍实验,探讨黑豆主要成分是否影响大黄素在肠道内的吸收转运。方法:1.建立药物与大鼠肠粘膜MRP2、MRP3相互关系的实验验证模型。(1)在大鼠肠组织粘膜侧加入MRP2抑制剂MK-571后,考察MRP2底物普伐他汀经大鼠十二指肠、空肠、回肠段吸收方向与分泌方向的表观渗透系数Papp及外排转运率Er值的变化,若加入抑制剂MK-571后底物普伐他汀经肠转运吸收方向Papp增加或分泌方向Papp减少及外排转运率减少,则表明该实验验证模型建立成功。(2)在大鼠肠组织粘膜侧加入MRP3抑制剂苯溴马隆后,考察MRP3底物替尼泊苷经大鼠空肠、回肠及结肠吸收方向与分泌方向表观渗透系数Papp及外排转运率Er值的变化,若加入抑制剂苯溴马隆后底物替尼泊苷经肠转运吸收方向表观渗透系数增加或分泌方向表观渗透系数及外排转运率减少,表明采用该技术研究药物与肠道MRP3实验验证模型建立成功。2.应用已建立的实验模型,研究大黄素与MRP2之间的相互关系。(1)考察在大鼠肠粘膜组织加入不同浓度大黄素后,MRP2底物普伐他汀在大鼠空肠段吸收方向的表观渗透系数与分泌方向的渗透系数及外排转运率的变化情况,与不含大黄素的对照组相比,研究大黄素对底物普伐他汀经肠吸收的影响,推测大黄素是否为MRP2的抑制剂或诱导剂。(2)在大鼠肠组织粘膜侧加入MRP2抑制剂MK-571后,不同浓度大黄素在大鼠空肠段吸收方向与分泌方向表观渗透系数及外排转运率的变化,将其与不含抑制剂MK-571的对照组相比,据此推测大黄素是否为MRP2的底物。3.应用已建立的实验模型,研究大黄素与MRP3之间的相互关系。(1)考察在大鼠肠粘膜组织加入不同浓度大黄素后,MRP3底物替尼泊苷在大鼠空肠段吸收方向的表观渗透系数与分泌方向的渗透系数及外排转运率的变化情况,与不含大黄素的对照组相比,研究大黄素对底物替尼泊苷经肠吸收的影响,推测大黄素是否为MRP3的抑制剂或诱导剂。(2)在大鼠肠组织粘膜侧加入MRP3抑制剂苯溴马隆后,不同浓度大黄素在大鼠空肠段吸收方向与分泌方向表观渗透系数及外排转运率的变化情况,将其与不含抑制剂苯溴马隆的对照组相比,据此推测大黄素是否为MRP3的底物。4.考察大黄素对P-gp底物地高辛经肠吸收的影响,判断大黄素是否为P-gp的抑制剂或诱导剂。在肠组织粘膜侧加入不同浓度大黄素时,观察底物地高辛在大鼠空肠段吸收方向与分泌方向的表观渗透系数及外排转运率的变化情况。5.在大鼠肠组织粘膜侧分别加入黑豆中四个主要单体成分染料木素、染料木苷、大豆苷元、大豆苷后,考察大黄素在大鼠空肠段吸收方向与分泌方向的表观渗透系数及外排转运率的变化情况,将其与不含黑豆单体成分的对照组相比较,初步探索黑豆中主要单体成分对大黄素经肠吸收转运的影响。结果:1.(1)对照组中普伐他汀经大鼠十二指肠、空肠、回肠分泌方向的表观渗透系数分别为 28.73±16.52、49.60±22.56、67.84±32.52。与对照组相比,浓度为 100μg/mL的MK-571使普伐他汀在各肠段的分泌方向的表观渗透系数降低,其中空肠(12.72 ±3.34)与回肠(22.45 ±14.09)有统计学差异,十二指肠段无统计学差异。100 μ g/mL的MK-571可减少普伐他汀经大鼠十二指肠、空肠及回肠段的外排转运率,且空肠与回肠段具有显著性差异。(2)与对照组相比,200 μg/mL的苯溴马隆可使替尼泊苷经大鼠空肠、回肠、结肠段吸收方向的表观渗透系数增多,其中空肠段(3.72±0.97)有显著差异(P<0.01);200 μ g/mL的苯溴马隆使替尼泊苷经大鼠空肠,回肠及结肠段分泌方向的表观渗透系数降低,与对照组相比,空肠,回肠与结肠段均有显著统计学差异;200 μg/mL的苯溴马隆减少了替尼泊苷经大鼠空肠、回肠及结肠段的外排转运率,且均具有统计学差异(P<0.01)。2.(1)与对照组相比,加入不同浓度大黄素后,低、中、高浓度组中普伐他汀经空肠段吸收方向的表观渗透系数有所增加,但均无统计学意义,分泌方向的表观渗透系数及外排转运率无明显改变。(2)联合使用抑制剂MK-571后,低浓度组,大黄素经空肠段吸收方向表观渗透系数增加,分泌方向表观渗透系数及外排转运率减少,但均无统计学差异;中浓度组,大黄素经空肠段吸收方向表观渗透系数增加(P<0.01),分泌方向表观渗透系数及外排转运率减少,具有统计学意义;高浓度组,大黄素经空肠段吸收方向表观渗透系数增加(P<0.

关键词：大黄素 P-糖蛋白 MRP2 MRP3 Ussing chamber 黑豆单体成分

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