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植物血凝素-ECM830细胞融合法融合黑色素瘤细胞

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中国医学科学院学报 2013年第5期35卷 515-518页

作者：米蕊芳刘福生金贵善首都医科大学附属北京天坛医院北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心北京100050 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系北京100005

目的以黑色素瘤细胞为模型,研究高效率肿瘤细胞融合方法。方法慢病毒荧光标记黑色素瘤细胞,ECM830电融合法及改良的植物血凝素(PHA)-ECM830电融合仪细胞融合法融合黑色素瘤细胞,流式分选黑色素瘤融合细胞,碘化亚啶染色法测定DNA含量。... 详细信息

目的以黑色素瘤细胞为模型,研究高效率肿瘤细胞融合方法。方法慢病毒荧光标记黑色素瘤细胞,ECM830电融合法及改良的植物血凝素(PHA)-ECM830电融合仪细胞融合法融合黑色素瘤细胞,流式分选黑色素瘤融合细胞,碘化亚啶染色法测定DNA含量。结果荧光标记带有绿色和红色荧光的黑色素瘤细胞,通过PHAECM830细胞融合法获得黑色素瘤融合细胞,细胞融合效率较ECM830电融合法从0.50%提升到7.18%,流式分选得到单一的黑色素瘤融合细胞,DNA含量分析显示黑色素瘤融合细胞的DNA含量翻倍,体内外实验表明黑色素瘤融合细胞增殖速度降低。结论运用改良的PHA-ECM830细胞融合法成功高效得到黑色素瘤融合细胞,黑色素瘤融合细胞增殖速度降低。

关键词：植物血凝素 ECM830 细胞融合法黑色素瘤细胞

蛋白4.1家族在小鼠黑色素瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

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南方医科大学学报 2016年第5期36卷 649-654页

作者：门颖丽康巧珍丁聪刘诗梦江慧王晓东汲振余刘鑫王婷郑州大学生命科学学院河南省医药科学研究院河南郑州450000

目的筛选小鼠黑色素瘤细胞中蛋白4.1家族的表达,探讨蛋白4.1对小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响。方法以MEF、B16、B16-F10细胞基因组RNA和总蛋白为模板,经PCR法和Western blot筛选蛋白4.1在小鼠黑色素瘤细胞中的表达;通过分子克隆构建真核... 详细信息

目的筛选小鼠黑色素瘤细胞中蛋白4.1家族的表达,探讨蛋白4.1对小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响。方法以MEF、B16、B16-F10细胞基因组RNA和总蛋白为模板,经PCR法和Western blot筛选蛋白4.1在小鼠黑色素瘤细胞中的表达;通过分子克隆构建真核表达载体p EGFP-N1-EPB41L3并转染黑色素瘤细胞;检测表达蛋白4.1B后B16、B16-F10细胞增殖的变化。结果蛋白4.1B在黑色素瘤细胞中表达缺失;通过转染成功构建的真核表达载体p EGFP-N1-EPB41L3发现,表达蛋白4.1B的黑色素瘤细胞的增殖作用被显著性抑制。结论通过真核表达载体p EGFP-N1-EPB41L3转染表达蛋白4.1B可显著抑制B16和B16-F10黑色素瘤细胞的增殖。

关键词：黑色素瘤细胞蛋白4.1 真核表达抑制增殖

丝裂原活化蛋白激酶15纳米抗体的制备及其在B16-F10黑素瘤细胞生长过程中的抑制作用

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第1期40卷 72-80页

作者：贾琼金聪俐胡世雄秦蓉芬赵立峰范瑞文山西农业大学动物医学学院山西晋中030801 天津市北辰区农业发展服务中心天津300400

丝裂原活化蛋白激酶15(mitogen-activated protein kinase 15,MAPK15),又称ERK7或ERK8,是MAPK家族的非典型新成员。MAPK15不同程度地促进不同肿瘤细胞的增殖、迁移、自噬等细胞活动。本研究以MAPK15为靶点,筛选特异性的MAPK15纳米抗体,... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶15(mitogen-activated protein kinase 15,MAPK15),又称ERK7或ERK8,是MAPK家族的非典型新成员。MAPK15不同程度地促进不同肿瘤细胞的增殖、迁移、自噬等细胞活动。本研究以MAPK15为靶点,筛选特异性的MAPK15纳米抗体,评估其是否能够作为免疫组织化学和Western印迹中的一抗用于其抗原表达的检测,并探究该纳米抗体在B16-F10黑色素瘤细胞中的作用。通过噬菌体展示技术从B16-F10黑色素瘤细胞纳米抗体文库中进行筛选,得到1株MAPK15特异性纳米抗体,命名为MAPK15-VHH;将该菌株构建原核表达载体,进行优化诱导表达条件时发现,0.6 nmol/L IPTG,15℃,100 r/min条件下该纳米抗体的上清表达量最高。通过竞争ELISA法检测MAPK15-VHH的亲和力,结果显示,该抗体KD值为0.9829。通过Western印迹和免疫组织化学检测脑组织中MAPK15在蛋白质水平的表达量及分布情况,结果表明,MAPK15-VHH可与组织中的MAPK15结合,用于检测MAPK15蛋白的表达情况。在B16-F10黑色素瘤细胞中过表达MAPK15后向其中添加MAPK15-VHH,通过CCK8、Western印迹以及实时荧光定量PCR检测其对该细胞增殖和自噬的影响,结果显示,该MAPK15-VHH能作为MAPK15的拮抗剂,抑制B16-F10细胞的增殖和自噬,从而抑制黑素瘤细胞的生长。综上所述,本研究成功得到一株亲和力较强的MAPK15纳米抗体,可用于Western印迹及免疫组织化学以检测MAPK15在蛋白质水平的表达及分布;此外,该MAPK15纳米抗体可以作为MAPK15拮抗剂,有效地抑制B16-F10细胞的增殖和自噬进程,为临床检测试剂和治疗药物的开发提供理论基础。

关键词：丝裂原活化蛋白激酶15 纳米抗体黑色素瘤细胞增殖自噬

黑色素瘤细胞来源的外泌体通过上调Treg的CXCR3促进其趋化

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免疫学杂志 2020年第9期36卷 790-795页

作者：颜丽雅陈欣薛雅方台州市中西医结合医院皮肤科 317523 台州市中西医结合医院泌尿科 317523 陆军军医大学西南医院超声科重庆400038

目的检测黑色素瘤细胞通过外泌体途径上调CD4^+CD25^+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)CXCR3(chemokine receptor 3)受体表达,提高Treg向肿瘤免疫抑制微环境趋化的能力。方法以超速离心法纯化小鼠黑色素瘤细胞B16上清中的外泌体,透... 详细信息

目的检测黑色素瘤细胞通过外泌体途径上调CD4^+CD25^+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)CXCR3(chemokine receptor 3)受体表达,提高Treg向肿瘤免疫抑制微环境趋化的能力。方法以超速离心法纯化小鼠黑色素瘤细胞B16上清中的外泌体,透射电镜检测外泌体形态,Western blot检测外泌体标记性蛋白的表达。B16细胞荷瘤小鼠。流式细胞术检测荷瘤小鼠(1、2、3周)和尾静脉注射外泌体后脾脏、肿瘤内Treg的频率。磁珠法分离纯化小鼠的Treg;Transwell实验检测Treg的趋化能力。Western blot检测Treg的CXCR3、p-Smad2的表达水平。结果电镜结果显示,B16细胞释放的外泌体为直径30~100 nm的圆形或类圆形结构;高表达标志性蛋白CD63和Alix,不表达Calnexin。在外泌体刺激下Treg的趋化能力显著增强,但可被抗CXCR3的单克隆抗体阻断。Western blot结果显示外泌体可提高Treg细胞内Smad2的磷酸化,并上调CXCR3的表达水平,Treg的趋化能力随之增强。结论B16细胞来源的外泌体通过Smad2磷酸化途径提高了Treg细胞内CXCR3的表达,进而增强其趋化能力。

关键词：外泌体 Treg 黑色素瘤细胞 CXCR3 B16

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1例脑膜恶性黑色素瘤的脑脊液细胞学检查

宁夏医科大学学报 2024年第5期46卷 539-540页

作者：侯玉婷王妍柏何学仙吴若芬宁夏医科大学总医院神经内科脑脊液检测室宁夏医科大学第一临床医学院银川750004

脑膜恶性黑色素瘤是中枢神经系统较为少见的肿瘤,其恶性程度高、预后差[1-2]。脑脊液(cerebro-spinal fluid,CSF)细胞学检查对于疾病的诊断具有重要的参考价值。宁夏医科大学总医院神经内科于2018年收治了1例脑膜恶性黑色素瘤患者,现报... 详细信息

脑膜恶性黑色素瘤是中枢神经系统较为少见的肿瘤,其恶性程度高、预后差[1-2]。脑脊液(cerebro-spinal fluid,CSF)细胞学检查对于疾病的诊断具有重要的参考价值。宁夏医科大学总医院神经内科于2018年收治了1例脑膜恶性黑色素瘤患者,现报道该病例的CSF细胞学变化及黑色素瘤细胞的形态特征。

关键词：宁夏医科大学黑色素瘤细胞恶性黑色素瘤细胞学检查神经内科中枢神经系统恶性程度脑膜

ANGPTL4基因调控黑色素瘤细胞醛缩酶A表达水平的机制

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中南大学学报（医学版） 2015年第8期40卷 851-857页

作者：孙杨王先成方柏荣熊祥龙剑虹中南大学湘雅二医院烧伤整形美容外科长沙410013 中南大学湘雅医院整形美容外科长沙410008

目的:探讨黑色素瘤细胞血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like 4,ANGPTL4)对醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)表达水平的影响及其机制。方法:分别扩增和沉默黑色素瘤细胞系WM-115及WM-266-4 ANGPTL4基因,运用PKC激动剂及阻断剂处理转染细胞。检... 详细信息

目的:探讨黑色素瘤细胞血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like 4,ANGPTL4)对醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)表达水平的影响及其机制。方法:分别扩增和沉默黑色素瘤细胞系WM-115及WM-266-4 ANGPTL4基因,运用PKC激动剂及阻断剂处理转染细胞。检测ALDOA在人黑色素瘤细胞中m RNA及蛋白质水平的表达,荧光素酶测定ALDOA基因启动子活性。结果:ANGPTL4基因扩增的黑色素瘤细胞组,ALDOA在m RNA及蛋白质的水平的表达均增高,ALDOA基因的启动子活性增加,且可被PKC阻断剂抑制(P细胞组中ALDOA在m RNA及蛋白质水平的表达均减低,ALDOA基因的启动子活性降低,且可被PKC激动剂恢复(P黑色素瘤细胞中ALDOA的表达。

关键词：黑色素瘤细胞血管生成素样蛋白4 醛缩酶A PKC

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女贞子多糖对黑色素瘤细胞黏附能力的影响

中国药理学通报 2009年第10期25卷 1367-1369页

作者：李璘邱蓉丽程革谢付波李寰舟陆茵南京中医药大学药学院江苏南京210029

目的探讨女贞子多糖对黑色素瘤细胞B16BL6黏附能力的影响。方法观察女贞子多糖对黑色素瘤细胞黏附力的抑制作用,分别将琼脂糖和Matrigel铺于细胞板中,用女贞子多糖作用后,MTT法观察女贞子多糖对B16BL6黏附能力的影响;同时观察了女贞子... 详细信息

目的探讨女贞子多糖对黑色素瘤细胞B16BL6黏附能力的影响。方法观察女贞子多糖对黑色素瘤细胞黏附力的抑制作用,分别将琼脂糖和Matrigel铺于细胞板中,用女贞子多糖作用后,MTT法观察女贞子多糖对B16BL6黏附能力的影响;同时观察了女贞子多糖对黏附分子E-cadherin表达的影响。结果女贞子多糖抑制了黑色素瘤细胞的粘附能力,抑制黑色素瘤粘附分子E-cadherin的表达。结论女贞子多糖具有抑制黑色素肿瘤细胞的黏附,破坏了肿瘤细胞的整体性,利于女贞子多糖的抗肿瘤作用。

关键词：女贞子多糖黑色素瘤细胞黏附 E-cadherin MTT法 RT-PCR

银杏双黄酮介导AMPK/COX-2通路对黑色素瘤细胞凋亡的影响

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广西医科大学学报 2022年第1期39卷 81-86页

作者：杨丰侨柏磊盛玉清季娟马葵芬浙江大学附属第一医院杭州311100 江苏省镇江市第一人民医院镇江212000 南京医科大学药理学系江苏省神经退行性疾病重点实验室南京210000

目的:基于单磷酸腺苷活化蛋白激酶/环氧合酶-2(AMPK/COX-2)通路探究银杏双黄酮(GBB)对黑色素瘤细胞发生凋亡的影响。方法:体外培养人黑色素瘤细胞株A875,用不同浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)GBB、10μmol/LAMPK抑制剂Compoun... 详细信息

目的:基于单磷酸腺苷活化蛋白激酶/环氧合酶-2(AMPK/COX-2)通路探究银杏双黄酮(GBB)对黑色素瘤细胞发生凋亡的影响。方法:体外培养人黑色素瘤细胞株A875,用不同浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)GBB、10μmol/LAMPK抑制剂Compound C、200μmol/L GBB+10μmol/L Compound C作用于A875细胞24 h。采用倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染色法检测GBB对A875细胞凋亡的影响,Western blotting法检测磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、磷酸化AMPK(p-AMPK)及COX-2蛋白表达。结果:随着GBB浓度的增加,细胞凋亡率升高(P细胞形态回缩变小、变圆、变亮,细胞间接触消失,部分细胞脱落裂解为碎片状,悬浮细胞增多,折光性减弱,呈现典型的细胞凋亡形态。GBB可提高p-ACC、p-AMPK蛋白表达,降低COX-2蛋白表达(均P黑色素瘤A875细胞凋亡,且呈剂量依赖性,此过程可能是通过介导AMPK/COX-2通路实现的。

关键词：银杏双黄酮黑色素瘤细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶环氧合酶-2 凋亡

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吴茱萸碱对黑色素瘤细胞的耐药逆转作用

中国生物化学与分子生物学报 2020年第2期36卷 225-230页

作者：李丽莎周鹏赵爽曾娣胡玲李静陈地龙重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 重庆医科大学基础医学院组织与胚胎教研室重庆400016 重庆三峡医药高等专科学校重庆404120

黑色素瘤是目前恶性程度最高的肿瘤之一。临床上,常采用维罗非尼(PLX4032)作为晚期患者的治疗药物,但患者很快就出现了耐药。因此,如何克服耐药、提高患者生存率成为急需解决的问题。本文选用中药吴茱萸碱(EVO)与黑色素瘤A375细胞、对PL... 详细信息

黑色素瘤是目前恶性程度最高的肿瘤之一。临床上,常采用维罗非尼(PLX4032)作为晚期患者的治疗药物,但患者很快就出现了耐药。因此,如何克服耐药、提高患者生存率成为急需解决的问题。本文选用中药吴茱萸碱(EVO)与黑色素瘤A375细胞、对PLX4032耐药的A375细胞(A375/R)进行相关研究。采用CCK-8法检测发现,用EVO的细胞非毒性浓度0.5μmol/L处理A375/R,PLX4032对A375/R细胞的半数抑制浓度(IC50)降低,逆转倍数为3.85。显示EVO能够增强黑色素瘤A375/R细胞对PLX4032的敏感性。后续实验分为对照组、EVO组、PLX组、PLX+EVO组。流式细胞仪检测结果显示,EVO组细胞凋亡率为5.88%,PLX组细胞凋亡率为17.88%,PLX+EVO组细胞凋亡率为30.28%。细胞集落结果证明,PLX4032联合EVO能够抑制A375/R细胞的克隆形成。免疫印迹法结果证明,联合用药能够上调促凋亡蛋白质Bax、胱天蛋白酶3的表达量,下调p-Akt、p-NF-κB-p65及抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白质水平。以上结果均表明,EVO能够有效逆转黑色素瘤A375/R细胞耐药,并且诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。

关键词：吴茱萸碱维罗非尼黑色素瘤细胞耐药