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川芎、益母草有效成分配伍对酪氨酸酶活性、黑色素生成的抑制效应研究

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中药与临床 2024年第1期15卷 40-44页

作者：王代波孙露瑶余倩田云才周勤梅彭成成都中医药大学药学院、西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137 上海致臻志臣科技有限公司中国上海201100

目的:探索川芎与益母草有效成分配伍对酪氨酸酶活性和黑色素生成的影响。方法:采用左旋多巴氧化法测定川芎水煎液和益母草水煎以及川芎总生物碱和益母草总生物碱不同质量配比对酪氨酸酶活性的抑制作用,筛选出最佳组合进行后续实验。MTT... 详细信息

目的:探索川芎与益母草有效成分配伍对酪氨酸酶活性和黑色素生成的影响。方法:采用左旋多巴氧化法测定川芎水煎液和益母草水煎以及川芎总生物碱和益母草总生物碱不同质量配比对酪氨酸酶活性的抑制作用,筛选出最佳组合进行后续实验。MTT法检测所筛选出的组合对B16细胞存活率的影响。随后实验分为细胞对照组、α-MSH诱导模型组和模型+所筛选出的最佳组合(50、100、200μg·mL^(-1))、模型+阳性组(曲酸,100μg·mL^(-1))。NaOH裂解法和多巴氧化法检测细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性。结果:通过筛选得出川芎总生物碱和益母草总生物碱质量比为1:2的组合效果最佳。药物配伍25、50、100、200、250μg·mL^(-1)对B16细胞无明显抑制作用。与空白组相比,模型组B16细胞中酪氨酸酶活性、黑色素水平增高(P黑色素瘤细胞B16中酪氨酸酶活性、黑色素水平降低(P黑色素的生成。

关键词：益母草川芎生物碱酪氨酸酶活性黑色素生成

四氢姜黄素抗氧化、抑制黑色素生成及其作用机制

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中国药理学通报 2022年第5期38卷 698-704页

作者：刘俐曾安琪张敏赵军宁华桦四川省中医药科学院转化药理与临床应用研究所四川省中医药转化医学中心四川省道地药材系统开发工程技术研究中心四川省道地药材形成原理与品质评价工程研究中心国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室中医药转化医学四川省重点实验室四川成都610041 成都中医药大学药学院四川成都610075

目的评价四氢姜黄素(tetrahydrocurcuminoids,THC)的抗氧化作用及对黑色素生成的影响,并探索其抑制黑色素生成的作用机制。方法抗氧化作用评价采用人类永生化表皮细胞(HaCaT细胞)模型,ELISA法检测HaCaT细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘... 详细信息

目的评价四氢姜黄素(tetrahydrocurcuminoids,THC)的抗氧化作用及对黑色素生成的影响,并探索其抑制黑色素生成的作用机制。方法抗氧化作用评价采用人类永生化表皮细胞(HaCaT细胞)模型,ELISA法检测HaCaT细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、乳酸脱氢酶(LDH)活性水平;DPPH法、T-AOC法检测THC总抗氧化活性。抑制黑色素生成试验采用小鼠黑色素瘤细胞B16F10模型,CCK8法测定THC对小鼠B16F10细胞增殖活性的影响,NaOH裂解法及多巴氧化法分别测定B16F10细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性;划痕实验探究THC对B16F10细胞迁移的影响,Western blot测定黑色素生成相关蛋白小眼转录因子(MITF)的表达。结果THC可增加HaCaT细胞的SOD、GSH-PX水平,降低LDH含量,同时可增加对DPPH自由基的清除率和对Fe^(3+)的还原能力;THC可抑制小鼠B16F10细胞增殖和迁移,降低B16F10细胞内黑色素含量,降低酪氨酸酶活性,抑制MITF的表达。结论四氢姜黄素具有抗氧化作用,可抑制黑色素生成,其作用机制与抑制MITF的表达有关。

关键词：四氢姜黄素抗氧化 HaCaT细胞黑色素瘤细胞黑色素生成 MITF

LncRNA00067110通过靶向Cabyr调控B16-F10细胞增殖、凋亡和黑色素生成

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第6期38卷 799-808页

作者：杨婉赟 Ajab Khan 贾琼胡世雄焦丁兴于雷涛范瑞文山西农业大学动物医学学院山西太谷030801 农业大学兽医和动物科学学院巴基斯坦开伯尔普赫图赫瓦省德拉伊斯梅尔汗29050

长非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA。现已证明,多个lncRNA是潜在的癌症治疗靶点。LncRNA00067110是从小鼠黑色素瘤B16-F10细胞和正常黑色素细胞转录物组图谱中发现的差异表达基因。为研究lncRNA00067110是... 详细信息

长非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA。现已证明,多个lncRNA是潜在的癌症治疗靶点。LncRNA00067110是从小鼠黑色素瘤B16-F10细胞和正常黑色素细胞转录物组图谱中发现的差异表达基因。为研究lncRNA00067110是否调控B16-F10细胞的增殖、凋亡和黑色素生成,本文通过LncTar预测和双荧光酶活性验证了钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)和lncRNA00067110存在靶向关系。通过构建lncRNA00067110的过表达载体,转染B16-F10细胞,经过对B16-F10细胞的转录图谱分析,并对细胞增殖、凋亡和黑色素生成的表型以及相关基因表达变化进行了检测。结果显示,lncRNA00067110靶向Cabyr,在过表达lncRNA00067110的B16细胞中,17个基因呈差异表达。其中,Cabyr的表达被上调,细胞增殖相关基因MEK/ERK/MNK/CREB和黑色素生成相关基因TYR家族成员及CREB的mRNA和蛋白质水平显著被下调,凋亡相关基因AKT和Bcl-2的mRNA水平和蛋白质丰度被上调。进一步通过细胞增殖和凋亡的表型的变化验证了lncRNA00067110的功能。结果提示,lncRNA00067110通过靶向Cabyr,调控相关基因表达,从而抑制B16-F10细胞的增殖和黑色素生成,并诱导黑色素瘤细胞的凋亡,可能成为治疗和抑制黑色素瘤的新的靶点。

关键词： lncRNA00067110 B16-F10 增殖凋亡黑色素生成钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)

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黑色素的生成代谢机制及研究方法进展

日用化学工业（中英文） 2023年第10期53卷 1194-1203页

作者：杨小玉刘金俊刘蕾何聪芬毕永贤李昊北京工商大学化学与材料工程学院植物资源研究开发北京市重点实验室北京100048 浙江宜格企业管理集团有限公司浙江杭州310000

随着时代的发展,“以白为美”思潮在近几年迎来了高涨期,美白市场空前繁荣。黑色素合成代谢过程在很大程度上调控着皮肤的颜色,因此美白剂的开发主要依赖于活性物质对黑色素的调节作用。本文将黑色素的合成、转运以及代谢过程细分为以... 详细信息

随着时代的发展,“以白为美”思潮在近几年迎来了高涨期,美白市场空前繁荣。黑色素合成代谢过程在很大程度上调控着皮肤的颜色,因此美白剂的开发主要依赖于活性物质对黑色素的调节作用。本文将黑色素的合成、转运以及代谢过程细分为以下五个步骤:1)黑素细胞内黑素小体的装配;2)黑素小体的成熟及黑素的合成;3)成熟的黑素小体向黑素细胞树突状远端移动;4)黑素小体转移至角质形成细胞;5)黑素小体在角质形成细胞中的再分布或降解、排出。结合以上五个步骤的最新研究进展对其关键机制、重要标志物以及检测方法进行总结阐述,为美白剂的开发提供更加具体且科学的理论基础及开发思路。

关键词：美白黑素细胞黑素体黑色素生成

山羊皮肤组织miRNA测序与miR-129-5p调控黑色素生成的功能研究

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畜牧兽医学报 2023年

作者：肖敏赵威孙武娜日苏赵乐刘陶禄张继攀赵永聚青海大学畜牧兽医科学院西南大学动物科学技术学院草食动物科学重庆市重点实验室重庆市牧草与草食家畜重点实验室内蒙古农业大学动物科学学院

旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA，并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制。本研究采集了健康酉州乌羊（Youzhou dark goat，YZDG）、川东白山羊（Chuandong white goat，CDWG）100日龄胎羊皮肤样本（n=3），和健康2～3周岁大足黑... 详细信息

旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA，并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制。本研究采集了健康酉州乌羊（Youzhou dark goat，YZDG）、川东白山羊（Chuandong white goat，CDWG）100日龄胎羊皮肤样本（n=3），和健康2～3周岁大足黑山羊（Dazu black goat，DBG）、内蒙古绒山羊（Inner Mongolia cashmere goat，IMCG）个体皮肤样本（n=3），利用组织切片染色技术观察皮肤中黑色素沉积情况；通过小RNA测序技术筛选差异miRNAs；培养B16-F10皮肤黑色素瘤细胞，利用细胞转染、qPCR、Western Blot、黑色素含量检测等技术验证miR-129-5p对黑色素生成的影响。结果显示，黑色素颗粒明显在YZDG胎羊皮肤和DBG毛囊的毛球、毛干、外根鞘等部位沉积，而在CDWG胎羊皮肤和IMCG表皮、毛囊中没有被观察到。经测序分析，在肤色差异的YZDG和CDWG中筛选到62个差异表达miRNAs，其中31个在乌皮山羊中上调，31个下调。在毛色差异的DBG和IMCG中，筛选到38个差异表达miRNAs，其中10个在黑色被毛山羊中表达上调，28个表达下调。两组测序结果均显示miR-129-5p在乌皮和黑色被毛山羊皮肤中高表达（P黑色素沉积量提高了18.9%（P0.05）。在抑制miR-129-5p后，inhibitor组TYR基因mRNA表达下调38.9%、蛋白表达水平下调21.1%（P黑色素的生成，是山羊肤色和毛色形成过程的重要调节因子。

关键词：山羊肤色 miR-129-5p 黑色素生成 TYR

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黑色素生成信号通路研究进展

生物工程学报 2019年第9期35卷 1633-1642页

作者：赵美娟户晶晶倪辉姜泽东王力集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021

黑色素生成是一种在黑色素细胞中产生黑色素的生物合成途径,涉及一系列复杂的酶催化和化学催化反应。主要有5条信号通路参与调控,其中小眼相关转录因子(Microphthalmia-associated transcription factor,MITF)是各个通路的重要靶标。此... 详细信息

黑色素生成是一种在黑色素细胞中产生黑色素的生物合成途径,涉及一系列复杂的酶催化和化学催化反应。主要有5条信号通路参与调控,其中小眼相关转录因子(Microphthalmia-associated transcription factor,MITF)是各个通路的重要靶标。此外,许多细胞因子也参与调控黑色素生成,在黑色素细胞的发育、增殖、分化、迁移过程中发挥重要作用。结合课题组研究成果,发现多金属氧酸盐可作为一种潜在的黑色素抑制剂用于切断黑色素生成途径。因此,文中对黑色素生成信号通路作用机制进行综述,并简单介绍已报道的相关通路调控因子,以期有助于多金属氧酸盐在黑色素生成途径中的应用研究。

关键词：黑色素生成信号通路小眼相关转录因子

转录因子PBX1抗UVB诱导的黑色素细胞黑色素生成及其机制初探

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转录因子PBX1抗UVB诱导的黑色素细胞黑色素生成及其机制初探

作者：王子瑜吉林大学

学位级别：硕士

背景:黑色素细胞主要存在于毛囊、表皮和眼睛中,主要负责生成黑色素,这是头发以及皮肤色素沉着的基础。紫外线辐射(UVR)作为主要外在因素,可通过产生活性氧(ROS)来调节黑色素的生成,其中,UVB刺激启动黑色素的合成并导致色素在皮肤表面... 详细信息

背景:黑色素细胞主要存在于毛囊、表皮和眼睛中,主要负责生成黑色素,这是头发以及皮肤色素沉着的基础。紫外线辐射(UVR)作为主要外在因素,可通过产生活性氧(ROS)来调节黑色素的生成,其中,UVB刺激启动黑色素的合成并导致色素在皮肤表面的积累,在产生色素沉着中发挥主要作用。前B细胞白血病同源盒基因(pre-B-cell leukemiahomeobox 1,PBX1),负责编码转录因子PBX1,在多种组织中广泛表达并在诸多发育生长过程中发挥其作用。PBX1不仅在胚胎发育中发挥重要作用,在许多器官中也发挥调控作用。本研究通过构建稳定过表达PBX1的PIG1细胞,并利用UVB构建黑色素生成模型,探讨PBX1对PIG1细胞生物学行为及功能的影响,并初步探究在UVB诱导黑色素生成模型中PBX1对PIG1细胞功能、黑色素生成及保护作用的影响。目的:研究转录因子PBX1对PIG1细胞生物学行为及功能的影响,并探讨PBX1在UVB致PIG1细胞产生黑色素、产生ROS及DNA损伤中的作用及作用机制。确保表皮黑色素细胞的存活、基因组稳定性及其正常功能,对于抑制色素障碍性疾病、肿瘤的发生至关重要。因此本研究试图全面了解PBX1在黑色素细胞中发挥的作用,更好地了解黑色素细胞的生物学及PBX1对黑色素细胞的作用及影响,为色素障碍性疾病及黑色素瘤的治疗提供理论依据。方法:1.利用慢病毒构建稳定过表达的细胞系;通过细胞计数法绘制细胞生长曲线图及克隆形成实验检验增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况,并辅助Western Blot法检测凋亡相关蛋白(PARP1、PAR、Cleaved Casepase 3、AIF、Cyt C)。2.碱裂解法检测细胞黑色素含量;使用分光光度法检测酪氨酸酶活性改变;Western Blot检测黑色素生成相关蛋白表达情况;DCFH-DA染料染色观察及流式细胞术检测ROS生成变化。3.使用MTT法检测存活率;活细胞工作站观察细胞状态;碱裂解法检测黑色素含量及分光光度法检测酪氨酸酶活性,选择合适的UVB照射剂量建立UVB照射产生黑色素的模型。4.UVB照射细胞后:碱裂解法检测黑色素含量;分光光度法检测酪氨酸酶活性改变;Western Blot检测黑色素生成相关蛋白;DCFH-DA染料染色观察及流式细胞术检测ROS变化;碱性彗星实验检测DNA损伤情况;Western Blot检测DNA损伤修复相关蛋白。结果:1.PBX1对PIG1细胞生物学的影响过表达PBX1后:PIG1细胞增殖能力及克隆形成能力增强,迁移能力增强,凋亡率降低。2.PBX1对PIG1细胞黑色素及ROS生成的影响过表达PBX1后:PIG1细胞的黑色素量生成减少,并降低酪氨酸酶活性,黑色素生成相关蛋白表达下降,同时ROS生成减少。3.UVB诱导黑色素生成模型使用不同UVB照射剂量处理细胞,发现在90 mJ/cm2细胞活力无明显差异,黑色素生成量最多,酪氨酸酶活性最强,因此选择90 mJ/cm2作为实验剂量。4.PBX1减少UVB照射引起的PIG1细胞黑色素及ROS生成过表达PBX1后进行90 mJ/cm2的UVB照射处理:(1)UVB照射组的黑色素含量明显增加,酪氨酸酶活性升高,黑色素生成相关蛋白的表达升高,同时ROS生成增多。(2)各组UVB照射后,过表达PBX1组相较于Control组及Vector组黑色素含量减少,酪氨酸酶活性降低,黑色素生成相关蛋白表达减少,同时ROS生成减少。(3)检测到UVB照射可引起DNA损伤增加,DNA损伤修复相关蛋白表达升高,过表达PBX1能够降低由UVB照射引起的相关指标升高。结论:1.过表达PBX1可促进PIG1细胞增殖、迁移,并降低PIG1细胞凋亡。2.UVB照射可导致PIG1细胞黑色素生成增加,并导致ROS累积,伴随DNA损伤增加。3.过表达PBX1能够减少黑色素生成,并降低由UVB照射所致的黑色素生成增多、ROS累积及DNA损伤。

关键词：黑色素细胞黑色素生成 PBX1 紫外线 ROS DNA损伤修复

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纤毛与黑色素生成的关系和作用机制

纤毛与黑色素生成的关系和作用机制

作者：刘松山东师范大学

学位级别：硕士

黑色素是动物皮肤或者毛发中存在的一种黑褐色的色素。人类肤色的深浅主要由皮肤中黑色素的含量决定,黑色素不仅能为皮肤、头发和眼睛提供颜色,也能使皮肤免受紫外线(UV)的过度刺激。当皮肤受到紫外线的照射时,表皮-真皮交界处的黑色素... 详细信息

黑色素是动物皮肤或者毛发中存在的一种黑褐色的色素。人类肤色的深浅主要由皮肤中黑色素的含量决定,黑色素不仅能为皮肤、头发和眼睛提供颜色,也能使皮肤免受紫外线(UV)的过度刺激。当皮肤受到紫外线的照射时,表皮-真皮交界处的黑色素细胞会在黑色素小体中合成黑色素,并运输到临近的角质细胞。紫外线照射能激活黑色素细胞中α-MSH-MC1R通路,从而上调小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)的表达,进而促进了酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1,TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-related protein2,TRP2)等黑色素生成相关酶的表达,最终产生黑色素。黑色素生成异常会导致Hermansky–Pudlak综合症、眼皮肤白化病、Chediak–Higashi综合症和Griscelli综合症等黑色素相关疾病的发生,而目前针对以上疾病的治疗方法仍有待完善。因此,探究黑色素生成的具体机制将有利于揭示相关疾病的发病规律,这会对色素异常类疾病的治疗提供有益线索。初级纤毛(primary cilia)是位于大多数哺乳动物细胞表面以微管为基础的细胞结构,在接收外界刺激、信号传导和调节细胞周期中发挥着重要作用,当纤毛发生和结构异常时会引发多种疾病。目前已知黑色素细胞中也有纤毛的存在,但其在这一特化的细胞中发挥何种功能仍不清楚。我们早期的生物信息学结果显示纤毛相关的基因在黑色素生成过程中发生了富集,暗示纤毛发生与黑色素生成存在相关性。接着我们通过免疫荧光染色实验发现,UV和α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone,α-MSH)共同刺激黑色素细胞能诱导纤毛的发生,细胞中纤毛的数量和长度都明显增加;但在黑素皮质激素受体1(melanocortin receptor 1,MC1R)敲除的细胞和MC1R突变的细胞中,UV和α-MSH则不能导致纤毛的变化,证明UV和α-MSH诱导的纤毛生成与MC1R有关。通过转录组分析发现在MC1R敲除的细胞中,部分纤毛生长相关基因转录水平发生显著变化,初步表明MC1R能转录调控纤毛生长相关因子。另一方面,抑制纤毛生成会下调MITF、TYR、TRP2、TRP1等黑色素生成相关基因的表达,并能降低黑色素的生成,说明纤毛在黑色素生成中发挥了一定的作用。进一步的免疫荧光染色实验表明,在UV和α-MSH共处理的条件下MC1R可以进入纤毛,而纤毛定位的MC1R对酪氨酸酶活性的诱导能力更强,即纤毛定位的MC1R能更强地诱导黑色素的生成。另外,强制锚定低活性形式的MC1R突变体进入纤毛能恢复以上MC1R突变体诱导黑色素生成的能力。以上研究结果表明MC1R的纤毛定位对黑色素的生成至关重要。综上所述,黑色素的形成是机体的一种保护机制,而本论文研究发现了纤毛在黑色素生成中的调节功能,证明MC1R具有纤毛定位的能力,并揭示了纤毛和MC1R相关通路对黑色素生成的影响。以上研究补充和完善了黑色素生成调控的分子机制,为黑色素相关疾病的治疗提供了理论基础。

关键词：纤毛黑色素生成 G蛋白偶联受体 MC1R

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蜕皮甾酮对皮肤光老化和黑色素生成的影响

现代中西医结合杂志 2023年第16期32卷 2197-2202,2215页

作者：龙剑文张晨李杨玺宇湖北中医药大学第一临床学院湖北武汉430061 湖北中医药大学中医临床学院湖北武汉430061

目的观察蜕皮甾酮对皮肤光老化和黑色素生成的影响。方法①实验分为正常对照组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,各组分别处理角质形成细胞(HaCaT细胞)、黑素细胞(B16F10细胞)和人真皮成纤维细胞(HD... 详细信息

目的观察蜕皮甾酮对皮肤光老化和黑色素生成的影响。方法①实验分为正常对照组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,各组分别处理角质形成细胞(HaCaT细胞)、黑素细胞(B16F10细胞)和人真皮成纤维细胞(HDF细胞)后,MTT法检测细胞活力。②实验分为正常对照组、UVB组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,Annexin V-FITC/PI双标法检测HaCaT细胞凋亡情况,Hoechst 33258染色法检测凋亡细胞的形态,Western blot法检测HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、环氧化酶-2(COX-2)、沉默调节蛋白1(Sirt-1)表达情况。③实验分为正常对照组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,Western blot法检测HaCaT细胞中透明质酸合成酶2(HAS-2)、转谷氨酰胺酶1(TGM1)和HDF细胞中Ⅰ型胶原蛋白Iα1肽链(COL1A1)表达情况。④实验分为正常对照组、黑色细胞刺激素组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组、熊果苷组,采用分光光度仪检测B16F10细胞黑色素生成及分泌情况。⑤实验分为正常对照组、左旋多巴组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,采用分光光度仪检测各组蘑菇酪氨酸酶活性。结果不同浓度的蜕皮甾酮对HaCaT细胞、B16F10细胞、HDF细胞活力均无明显影响。蜕皮甾酮各组HaCaT细胞凋亡率及HaCaT细胞中MMP-1、MMP-9、COX-2蛋白相对表达量均明显低于UVB组(P均黑色素生成和分泌吸光度值均明显低于黑色细胞刺激素组(P均黑色素生成作用。

关键词：蜕皮甾酮皮肤衰老黑色素生成