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氧化应激促进MHCⅠ类分子膜转位在CD8+T细胞杀伤黑素细胞中的作用

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中国皮肤性病学杂志 2023年第11期37卷 1232-1236,1245页

作者：毛汉潇王婧莹曾紫原潘映浩刘汝兰熊霞何渊民西南医科大学附属医院皮肤科四川泸州646000

目的探索氧化应激诱导下主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子膜转位在CD8^(+)T细胞靶向杀伤黑素细胞中的作用。方法用1.0 mmol/L的H_(2)O_(2)处理正常人原代黑素细胞,采用流式细胞术检测黑素细胞内活性氧(ROS)水平、黑素细胞和CD8^(+)... 详细信息

目的探索氧化应激诱导下主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子膜转位在CD8^(+)T细胞靶向杀伤黑素细胞中的作用。方法用1.0 mmol/L的H_(2)O_(2)处理正常人原代黑素细胞,采用流式细胞术检测黑素细胞内活性氧(ROS)水平、黑素细胞和CD8^(+)T细胞共培养体系中颗粒酶、穿孔素表达水平,Western blot检测黑素细胞膜表面MHCⅠ类分子表达情况。用MHC class I siRNA干涉黑素细胞MHCⅠ类分子表达后,用流式细胞术检测黑素细胞和CD8+T细胞共培养体系中颗粒酶、穿孔素表达水平。免疫荧光检测黑素细胞膜、正常人皮肤及白癜风皮损周围MHCⅠ类分子表达情况。结果经1.0 mmol/L H2O2处理黑素细胞24 h后,黑素细胞膜表面MHCⅠ类分子表达显著升高;同时,黑素细胞和CD8^(+)T细胞共培养体系中黑素细胞坏死比例增高,颗粒酶B、穿孔素和TNF-α水平明显升高;经1.0 mmol/L H_(2)O_(2)处理干涉MHCⅠ类分子后的黑素细胞24 h,与CD8^(+)T细胞共培养,共培养体系中颗粒酶B、穿孔素和TNF-α释放水平明显降低,黑素细胞坏死比例下降。结论氧化应激可通过促进MHCⅠ类分子向胞膜转位,诱导CD8^(+)T细胞杀伤黑素细胞。

关键词：氧化应激黑素细胞 MHCⅠ类分子

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间充质干细胞与黑素细胞共培养的研究进展

中国皮肤性病学杂志 2022年第9期36卷 1086-1089页

作者：滕佳男王红娟康晓静新疆维吾尔自治区人民医院皮肤性病科新疆皮肤病临床医学研究中心新疆皮肤病研究重点实验室(XJYS1707)新疆乌鲁木齐830001

自体黑素细胞移植为稳定期白癜风的一线治疗手段。该治疗虽已被证实复色有效,但是如何维持移植细胞的未分化状态、提高移植细胞的活力、增加其在移植区的附着度,最大程度实现复色目的尚需进一步研究。既往研究多局限于单纯黑素细胞或黑... 详细信息

自体黑素细胞移植为稳定期白癜风的一线治疗手段。该治疗虽已被证实复色有效,但是如何维持移植细胞的未分化状态、提高移植细胞的活力、增加其在移植区的附着度,最大程度实现复色目的尚需进一步研究。既往研究多局限于单纯黑素细胞或黑素细胞与角质形成细胞共培养,但获得足够数目的自体角质形成细胞会遗留大面积瘢痕。间充质干细胞是目前临床研究的理想种子细胞,来源丰富、获取方便,与黑素细胞共培养有望促进移植区复色。本文对间充质干细胞与黑素细胞共培养的研究进展做一综述。

关键词：白癜风黑素细胞间充质干细胞共培养治疗研究进展

岭南火针通过调控Hippo-YAP信号通路抑制白癜风模型小鼠黑素细胞凋亡

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中山大学学报（医学科学版） 2023年第2期44卷 244-253页

作者：李晶晶曾婧纯梁雪松张瑜阎路达林诗雨林国华周鹏广州中医药大学附属宝安中医院//广州中医药大学第七临床医学院广东深圳518133 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 广州中医药大学第二附属医院广东广州510120

[目的]基于Hippo-YAP信号通路探讨岭南火针对氢醌诱导的氧化应激后白癜风模型的影响。[方法]将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(Control)、模型对照组(HQ)、HQ+卤米松组(Halometasone)、HQ+岭南火针组(FA),每组8只。采用氢醌(HQ)建立白... 详细信息

[目的]基于Hippo-YAP信号通路探讨岭南火针对氢醌诱导的氧化应激后白癜风模型的影响。[方法]将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(Control)、模型对照组(HQ)、HQ+卤米松组(Halometasone)、HQ+岭南火针组(FA),每组8只。采用氢醌(HQ)建立白癜风模型。通过脱色评分、HE染色、Masson-Fontana法观察皮肤病理学改变;ELISA法检测各组血浆酪氨酸酶(TYR)、丙二醛(MDA)含量及血清单胺氧化酶(MAO)活性;Western-blot检测皮肤组织YAP1、TP73蛋白表达量;PCR法检测Yap1、Tp73表达水平。[结果]与Control组相比,造模后,小鼠表皮层和真皮层明显增厚,含黑素细胞毛囊数、基底层黑素细胞数、含黑素颗粒表皮细胞数明显减少,脱色评分明显提高,TYR水平下降,MDA、MAO水平上升,Yap1、Tp73低表达(P黑素细胞毛囊数、基底层黑素细胞数、含黑素颗粒表皮细胞数增加(P黑素细胞免受氢醌诱导的氧化应激损伤,降低氧化应激产物含量及其活性,提升黑素细胞的合成及功能,从而起到促进白斑复色的作用。

关键词：岭南火针 Hippo-YAP信号通路氧化应激白癜风黑素细胞

干预抗氧化因子Nrf2对H;O;诱导的人黑素细胞氧化应激水平和抗氧化基因表达的影响

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中国皮肤性病学杂志 2022年

作者：王琪倪清蓉姜兆婷张甲周钰奇王博陈佳希易秀莉坚哲第四军医大学西京皮肤医院

目的干预人黑素细胞中激活转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）的表达，观察其对过氧化氢(H;O;)诱导的氧化损伤作用，以及对Nrf2下游相关抗氧化基因表达影响。方法将siRNA或pCMV6-XL5-Nrf2瞬时转染入PIG1细胞，从而上调或者下调Nrf2的表... 详细信息

目的干预人黑素细胞中激活转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）的表达，观察其对过氧化氢(H;O;)诱导的氧化损伤作用，以及对Nrf2下游相关抗氧化基因表达影响。方法将siRNA或pCMV6-XL5-Nrf2瞬时转染入PIG1细胞，从而上调或者下调Nrf2的表达，检测黑素细胞内活性氧簇（ROS）和丙二醛（MDA）浓度、细胞增殖情况，及下游抗氧化基因还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸[NAD（P）H]、醌氧化还原酶（NQO-1）、血红素氧化酶（HO-1）和谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的表达。结果 H;O;预处理可促进PIG1细胞中ROS和MDA的生成。上调Nrf2的表达可在人黑素细胞中抑制H;O;诱导的ROS和MDA产生，促进细胞增殖及Nrf2核转位，增强NQO-1、HO-1及γ-GCS的表达，而下调Nrf2表达可观察到相反的结果。结论在人黑素细胞中干预抗氧化因子Nrf2的表达可通过影响Nrf2相关抗氧化酶的活性来调控H;O;诱导的黑素氧化损伤及细胞增殖。

关键词：转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2) 氧化应激活性氧簇(ROS) 黑素细胞白癜风

白细胞介素-8对体外培养人皮肤移植物中黑素细胞增殖的影响

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临床皮肤科杂志 2022年第10期51卷 582-586页

作者：姚云竹江珊罗龙飞雷铁池武汉大学人民医院皮肤科湖北武汉430060

目的:探究白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-17A促炎因子对体外培养的皮肤移植物中黑素细胞(MC)增殖的影响。方法:建立气-液界面培养人皮肤移植物模型,采用常规苏木精-伊红(HE)染色观察培养后不同时间(第0、2、3、5天)人皮... 详细信息

目的:探究白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-17A促炎因子对体外培养的皮肤移植物中黑素细胞(MC)增殖的影响。方法:建立气-液界面培养人皮肤移植物模型,采用常规苏木精-伊红(HE)染色观察培养后不同时间(第0、2、3、5天)人皮肤移植物组织结构的完整性和细胞存活状态。将皮肤组织分为对照组、IL-8组、TNF-α+IL-17A组和TNF-α+IL-17A+IL-8组,培养48 h后,采用HE染色观察表皮的增殖与分化;采用抗HMB45抗体免疫荧光染色观察MC数目;采用CCK8细胞增殖检测试剂盒测定MC的增殖率。结果:皮肤移植物在气-液界面培养第5天,表皮与真皮界面仍保持其完整性,且未见表、真皮分离。与对照组相比,TNF-α+IL-17A组皮肤移植物的角质层明显增厚(P细胞数目均较对照组明显增加,差异均有统计学意义(P细胞验证IL-8对MC的促增殖作用,结果示与对照组比较,IL-8组中MC细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:银屑病相关促炎因子TNF-α及IL-17A对IL-8促MC增殖存在协同刺激作用。

关键词：白细胞介素-8 人皮肤移植物黑素细胞增殖促炎作用

抗氧化因子Nrf2对H_(2)O_(2)诱导的人黑素细胞氧化应激水平和抗氧化基因表达的影响

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中国皮肤性病学杂志 2022年第7期36卷 744-750页

作者：王琪倪清蓉姜兆婷张甲周钰奇王博陈佳希易秀莉坚哲第四军医大学西京皮肤医院陕西西安710032

干预人黑素细胞中激活转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)的表达,观察其对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的氧化损伤作用,以及对Nrf2下游相关抗氧化基因表达影响。方法将siRNA或pCMV6-XL5-Nrf2瞬时转染入PIG1细胞,从而上调或者下调Nrf2的表达,检... 详细信息

干预人黑素细胞中激活转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)的表达,观察其对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的氧化损伤作用,以及对Nrf2下游相关抗氧化基因表达影响。方法将siRNA或pCMV6-XL5-Nrf2瞬时转染入PIG1细胞,从而上调或者下调Nrf2的表达,检测黑素细胞内活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)浓度、细胞增殖情况,以及下游抗氧化基因还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸[NAD(P)H]、醌氧化还原酶(NQO-1)、血红素氧化酶(HO-1)和谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果H_(2)O_(2)预处理可促进PIG1细胞中ROS和MDA的生成。上调Nrf2的表达可在人黑素细胞中抑制H_(2)O_(2)诱导的ROS和MDA产生,促进细胞增殖及Nrf2核转位,增强NQO-1、HO-1及γ-GCS的表达,而下调Nrf2表达可观察到相反的结果。结论在人黑素细胞中干预抗氧化因子Nrf2的表达可通过影响Nrf2相关抗氧化酶的活性来调控H_(2)O_(2)诱导的黑素氧化损伤及细胞增殖。

关键词：转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2) 氧化应激活性氧簇(ROS) 黑素细胞白癜风

敲降TYRP1基因对香猪表皮黑素细胞黑色素生成的影响

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畜牧兽医学报 2023年第10期54卷 4143-4153页

作者：毕欢覃海袁巍张雨丹张依裕陈伟高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在探究酪氨酸相关蛋白酶1(tyrosinase related protein 1,TYRP1)对香猪原代表皮黑素细胞黑色素生成的影响。本研究选用具有“两头乌”毛色特征的3月龄健康香猪3头,每头猪采取头部黑色皮肤组织和背部白色皮肤组织。通过HE染色观察不同... 详细信息

旨在探究酪氨酸相关蛋白酶1(tyrosinase related protein 1,TYRP1)对香猪原代表皮黑素细胞黑色素生成的影响。本研究选用具有“两头乌”毛色特征的3月龄健康香猪3头,每头猪采取头部黑色皮肤组织和背部白色皮肤组织。通过HE染色观察不同颜色香猪皮肤的毛囊结构及黑素细胞的分布特征;体外培养香猪原代表皮黑素细胞并通过多巴(L-Dopa)染色、实时荧光定量PCR和Western Blot方法进行鉴定;根据TYRP1基因序列构建5条siRNA,采用实时荧光定量PCR筛选出干扰效率最高的siRNA进行转染。成功干扰黑素细胞内TYRP1的表达后,分别通过实时荧光定量PCR、Western Blot、黑色素含量检测方法对黑素细胞内TYR、TYRP1及TYRP2的mRNA与蛋白相对表达量、细胞内总黑色素含量进行检测。结果显示,在香猪黑色和白色皮肤中都观察到完整的毛囊结构,黑素细胞主要分布在香猪黑色被毛皮肤中的毛囊外根鞘部位以及表皮。在MelM培养基作用下,黑素细胞生长旺盛,细胞形态、生长曲线、多巴染色、实时荧光定量PCR及Western Blot结果均表明培养的黑素细胞维持正常的生物学特性。敲降TYRP1后下调香猪表皮黑素细胞中黑色素生成相关基因TYR、TYRP1和TYRP2的mRNA和蛋白的表达,同时对黑色素的形成具有抑制作用。TYRP1基因能够影响香猪表皮黑素细胞黑色素的生成,研究结果可为探索TYRP1基因对香猪黑色素沉积的分子机制提供试验参考和基础数据。

关键词： TYRP1 黑素细胞 siRNA HE染色多巴染色黑色素

氧化应激下细胞自噬对黑素细胞MHC Ⅰ类分子膜转位的作用

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中国皮肤性病学杂志 2023年第8期37卷 878-883页

作者：王婧莹毛汉潇曾紫原潘映浩刘汝兰何渊民西南医科大学附属医院皮肤科四川泸州646000

目的探索氧化应激状态下细胞自噬在黑素细胞主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子膜转位过程中的作用。方法分离并培养正常人原代黑素细胞,以H_(2)O_(2)处理后,采用免疫荧光检测黑素细胞膜MHC Ⅰ类分子分布及表达、黑素细胞内自噬小体数... 详细信息

目的探索氧化应激状态下细胞自噬在黑素细胞主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子膜转位过程中的作用。方法分离并培养正常人原代黑素细胞,以H_(2)O_(2)处理后,采用免疫荧光检测黑素细胞膜MHC Ⅰ类分子分布及表达、黑素细胞内自噬小体数量,Western blot检测黑素细胞膜表面MHC Ⅰ类分子、自噬相关蛋白表达水平。用ATG5-shRNA干涉黑素细胞自噬后,用免疫荧光检测黑素细胞膜MHC Ⅰ类分子膜转位情况,Western blot检测黑素细胞膜表面MHC Ⅰ类分子表达水平。结果 H_(2)O_(2)处理黑素细胞24 h后可促进黑素细胞内MHC Ⅰ类分子向胞膜转位,诱导黑素细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增高、p62蛋白表达显著下降、自噬小体数量增多。氧化应激状态下抑制细胞自噬可促进黑素细胞内MHC Ⅰ类分子向胞膜转位。结论氧化应激下细胞自噬水平升高可抑制黑素细胞内MHC Ⅰ类分子向胞膜转位。

关键词：细胞自噬黑素细胞氧化应激 MHCⅠ类分子

他克莫司对白癜风小鼠Th17/Treg细胞平衡及黑素细胞丢失的影响

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药物评价研究 2022年第2期45卷 294-300页

作者：王小媛王颖娟康乐宝鸡市中心医院皮肤科陕西宝鸡721000

目的探究他克莫司对白癜风小鼠辅助性T17(Th17)/调节性T(Treg)细胞平衡和黑素细胞丢失的影响。方法将小鼠随机分为对照组、模型组和他克莫司低、中、高剂量组(涂抹10、50、100 mg 0.03%他克莫司软膏),使用松香/蜡混合物对小鼠背部相同... 详细信息

目的探究他克莫司对白癜风小鼠辅助性T17(Th17)/调节性T(Treg)细胞平衡和黑素细胞丢失的影响。方法将小鼠随机分为对照组、模型组和他克莫司低、中、高剂量组(涂抹10、50、100 mg 0.03%他克莫司软膏),使用松香/蜡混合物对小鼠背部相同位置进行去毛,大小为2 cm×2 cm,将其分为两部分:用药区域与非用药区域,面积1∶1。除对照组外,于小鼠背部用药区均匀涂抹50 mg 40%莫诺苯宗软膏,每天1次,连续90 d,制备白癜风模型。莫诺苯宗涂抹30 d后开始于相同位置涂抹他克莫司软膏,2种药膏涂抹时间间隔7 h,他克莫司软膏每天早晚各涂抹1次,连续用药60 d。肉眼观察小鼠皮毛脱色情况并进行脱色评分,通过反射式共聚焦显微镜(RCM)观察小鼠皮肤黑素细胞和黑色素的分布,取小鼠皮损进行苏木精-伊红染色(HE)和马松染色(MF)对基底层黑素细胞和含黑色素的毛囊进行计数,通过流式细胞术测定小鼠外周血中Th17和Treg淋巴细胞的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血白细胞介素-17(IL-17)、IL-22和叉头型基因p3(Foxp3)的含量。结果与对照组比较,白癜风模型组小鼠用药区皮毛明显脱色,脱色评分显著升高(P黑素细胞显著减少(P细胞比例显著升高(P黑素细胞;含黑色素的毛囊和黑素细胞显著增多(P细胞比例显著降低(P细胞平衡,抑制其黑素细胞丢失。

关键词：他克莫司白癜风 Th17/Treg细胞皮损黑素细胞