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黑树莓多酚对糖尿病小鼠模型血糖代谢的调控作用及机制研究

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黑树莓多酚对糖尿病小鼠模型血糖代谢的调控作用及机制研究

作者：刘威辽宁大学

学位级别：硕士

黑树莓属蔷薇科勾悬子属浆果。已有研究证实黑树莓中含有大量的活性物质,如酚酸类、黄酮类、原花青素、鞣质、苯乙烯、木脂素、三萜和甾醇等。其中的原花青素和鞣花酸类化合物被认为对于癌症的预防有很好的活性,尤其对结直肠癌,食管癌... 详细信息

黑树莓属蔷薇科勾悬子属浆果。已有研究证实黑树莓中含有大量的活性物质,如酚酸类、黄酮类、原花青素、鞣质、苯乙烯、木脂素、三萜和甾醇等。其中的原花青素和鞣花酸类化合物被认为对于癌症的预防有很好的活性,尤其对结直肠癌,食管癌等已被证明有一定的预防及治疗作用。黑树莓中含有大量酚酸类物质,可能对于代谢类疾病有一定防治作用,但是相应的数据并未见报道。进而,本研究的目的在于利用化学方法诱导糖尿病小鼠模型,研究黑树莓多酚的降血糖作用及其可能作用机制,并探究黑树莓多酚作为天然活性成分对于糖尿病的预防及治疗作用。本研究的意义在于,黑树莓作为天然绿色食品和健康食品,以预防或辅助的方式对糖尿病等代谢类疾病潜在的防治可能性并探究对于黑树莓本身潜能发展及糖尿病防治的可行性价值。研究结果:(1)黑树莓多酚对糖尿病实验小鼠的降血糖作用:以化学试剂(四氧嘧啶或链脲佐菌素)诱导的方式诱导小鼠形成糖尿病。筛选血糖在10mmol/L以上的并具备多饮,多食,多尿症状的小鼠为模型进行下一步实验。给予链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的糖尿病小鼠模型5%及10%混合黑树莓多酚饲料进行8周处理后发现,给予黑树莓多酚饲料的糖尿病小鼠(5%S-BRB组和10%S-BRB组)与糖尿病小鼠(STZ组)比较均表现出良好的降血糖作用,并在实验周期结束后进行的腹腔注射糖耐量实验发现10%S-BRB组小鼠对大剂量糖的耐受情况更好,并与STZ组对比达到显著性。同样的降血糖作用也在对四氧嘧啶(Alloxan,ALX)诱导小鼠给予10%混合黑树莓多酚的饲料进行4周处理后发现。给予了黑树莓多酚饲料的糖尿病小鼠(A-10%BRB组)的血糖与未给予黑树莓多酚饲料的糖尿病小鼠(ALX组)相比明显下降并几乎达到了10mmol/L。腹腔注射糖耐量的结果也达到了显著改善。这说明黑树莓多酚可以降低糖尿病实验小鼠的血糖水平并对糖耐受能力有提高作用。(2)黑树莓多酚对糖尿病实验小鼠降血糖作用的机制分析:本实验根据前期文献支持,选择了对肌肉中胰岛素信号通路关键因子:胰岛素受体(Insulin Receptor),胰岛素受体底物-1(Insulin Receptor substrate-1),糖原合成酶激酶3β(GSK3β),蛋白激酶(AKT),腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),糖转运蛋白4(GLUT4)的表达状况进行分析来研究BRB降血糖的可能机制。结果显示,在四氧嘧啶和链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠中均发现,BRB的给予均可以刺激胰岛素信号通路中关键蛋白的表达。在STZ诱导组中,10%的BRB给予效果要优于5%的BRB给予效果。(3)黑树莓多酚对糖尿病实验小鼠糖尿病伴发症的缓解能力分析:针对伴发症的缓解能力为针对脏器指数,血脂含量及肝脏炎症发生的测试。1.给药周期结束后,将小鼠处死,取其肝脏,肾脏及脾脏做脏器指数比较。由于糖尿病的症状多表现为排尿量增加,因而肾脏易出现炎症及水肿。实验结果显示,与A-Ctrl组对比,ALX组小鼠的肾脏出现了增重的情况,而A-10%BRB的肾脏指数与A-Ctrl组相比没有差异,并与ALX组对比,其重量显著下降。STZ诱导小鼠中并未见显著变化。2.给药周期结束后,取小鼠眼后静脉丛总血液1.5ml,静置后取血清用于甘油三酯及胆固醇含量的分析。结果显示,与A-Ctrl对比,ALX组的TG及CHO含量均明显升高,而A-10%BRB的TG及CHO含量与A-Ctrl组相比没有差异且在ALX组基础上有明显下降。STZ诱导小鼠中有类似ALX组的趋势,但未见显著变化。3.同模型组相比,A-10%BRB组肝脏中的炎症因子表达量相当于ALX组明显下降。这些结果表明,BRB可以缓解由于排尿量增加等原因导致的肾脏水肿,并且降低实验性糖尿病小鼠血清中脂类(TG和CHO)的含量,同时降低肝脏中炎症因子(IL-1,IL-6,COX2和TNF-α)的基因水平表达。这些数据说明BRB对于糖尿病实验小鼠糖尿病伴发症有明显的缓解能力。STZ组实验小鼠在针对糖尿病伴发症实验中数据显示出类似ALX组的趋势,但在数据分析时的结果表现为没有显著性。本研究针对合理地开发利用黑树莓多酚作为可行性糖尿病类药物开发,探索了黑树莓多酚以饮食诱导的方式降低实验性小鼠血糖及提高小鼠机体糖耐受能力的作用。并针对糖尿病过程中出现的伴发症情况进行考量,为黑树莓多酚对糖尿病机体的全面调节作用做出了数据支持。实验结果显示,给予黑树莓多酚可以缓解两组化学诱导型实验性糖尿病小鼠的糖尿病症状并且这种作用是通过刺激胰岛素信号通路相关蛋白导致的。

关键词：黑树莓多酚实验性糖尿病胰岛素信号通路

黑树莓多酚对结直肠肿瘤小鼠肠道菌群异常的调控作用研究

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黑树莓多酚对结直肠肿瘤小鼠肠道菌群异常的调控作用研究

作者：陈丽莉辽宁大学

学位级别：硕士

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,每年大约有120万人被诊断出患有结直肠癌,其发病是多因素、多基因、多分子信号参与的渐进性累积过程。《2014年世界癌症报告》中指出,在所有癌症中结直肠癌的全球病发率位居第三。在我国,结直肠癌的发... 详细信息

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,每年大约有120万人被诊断出患有结直肠癌,其发病是多因素、多基因、多分子信号参与的渐进性累积过程。《2014年世界癌症报告》中指出,在所有癌症中结直肠癌的全球病发率位居第三。在我国,结直肠癌的发病率呈逐年上升趋势并且已和世界平均水平相当,而治愈率未见明显改善。人体肠道内的微生物种群最丰富、数量最多,它们的数量超过100万亿个,种类多达1000种,其中大部分属于厚壁菌门和拟杆菌门,它们参加许多人类生理活动和新陈代谢,包括食物的消化,结肠上皮细胞的快速能量源,调节免疫反应。肠道微生物群落结构的改变或数量的改变,都会影响肠渗透性,进而导致肠道炎症的发生,甚至结直肠癌的发生发展。黑树莓是蔷薇科勾悬子属浆果。已有研究证实黑树莓中含有大量的活性物质,如酚酸类、黄酮类、原花青素、鞣质、苯乙烯、木脂素、三萜和甾醇等。膳食多酚及其代谢物通过调节益生菌和致病菌的增长维持肠道微生物平衡,进而影响结直肠癌的发生和发展,但是相应的数据并未见报道。本研究的目的在于探究黑树莓多酚作为天然活性成分对于结直肠肿瘤小鼠肠道菌群的影响。利用化学方法诱导的结直肠肿瘤小鼠模型,研究黑树莓多酚调节肠道菌的作用及其可能作用机制。本研究的意义在于,通过检测黑树莓多酚以预防或辅助的方式对结直肠肿瘤小鼠肠道菌群异常的调节有积极意义,为肠道菌群变化作为新的肿瘤生物标记奠定基础。研究结果：(1)黑树莓多酚对结直肠肿瘤小鼠肠道菌群的调控：以化学试剂AOM(氧化偶氮甲烷)和DSS(葡聚糖硫酸钠)诱导形成结直肠肿瘤小鼠模型。给予结直肠肿瘤小鼠模型5%及10%混合黑树莓多酚饲料进行9周处理后发现,除个别结直肠肿瘤模型组小鼠(Model组)样本外,空白对照组(Control组)和多酚处理组(5% BRB组和10% BRB组)样本聚集成一簇,说明Control组与5%BRB和10%BRB组中肠道细菌群落组成相似性较高,与模型组样品相似性较低。各组肠道中细菌丰富度、多样性、均匀度指数差异无显著性,说明黑树莓多酚对各组小鼠肠道菌群的种类改变无显著性作用。而经过比对各组同种肠道菌群的数量发现,黑树莓多酚处理过的小鼠粪便中丁酸盐产生菌含量增多,与Control组相比提高了6%,而Model组含量为1%。奈瑟氏菌属含量增多,与Control组相比提高了5%,而Model组含量为0%。结果显示,黑树莓多酚对于肠道益生菌有着明显的正性调控作用。弯曲杆菌和拟杆菌为肠道内主要致病菌,经黑树莓多酚处理过的小鼠粪便中弯曲杆菌、幽门螺杆菌含量与Model组相比降低了15%。拟杆菌属和普氏菌属含量与模型组相比降低了72%,结果显示,黑树莓多酚对于肠道致病菌具有显著的抑制作用。说明黑树莓多酚可以通过改变肠道菌群的数量进而影响结直肠肿瘤的发生和发展。(2)黑树莓多酚对结直肠肿瘤小鼠肠道菌群调控作用的机制分析：结直肠癌的发生最初是由炎症引起的,二者有着紧密联系,AOM/DSS诱导的结直肠肿瘤模型模拟了由炎症性肠病发展为结直肠癌的过程。本研究选取炎症因子：IL-1,IL-6,IL-10,COX2和TNF-α,炎症与肿瘤相关的的关键因子：信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)、应激活化蛋白激酶(JNK)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、细胞凋亡蛋白(Bax)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(CyclinD1)、原癌基因(c-Myc)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况分析黑树莓多酚调控结直肠肿瘤小鼠肠道菌群的可能机制。结果显示,经5%BRB和10%BRB处理过的小鼠肠上皮细胞中各炎症因子的表达水平与Model组比均有所降低：IL-1的表达量与Model组相比分别降低了30%和55%,IL-6的表达量与Model组相比分别降低了58%和19%,IL-10的表达量与Model组相比分别降低了23%和58%,COX2的表达量与Model组相比分别降低了40%和55%,TNFa的表达量与Model组相比分别降低了67%和21%。另外黑树莓多酚的给予均可以下调STAT3信号通路中关键蛋白STAT3和细胞周期蛋白的表达,说明在肠道菌群紊乱时黑树莓多酚可能通过此条信号通路对结直肠肿瘤的发生发展进行调控。(3)黑树莓多酚对结直肠肿瘤小鼠肠道菌群的体外调控作用：用不同浓度的黑树莓多酚处理体外培养的肠道菌群,结果显示,随黑树莓多酚浓度的增加,抑菌率也逐步增强,说明黑树莓多酚在体外也仍然具有抑菌活性。综上所述,黑树莓多酚对结直肠小鼠肠道菌群异常具有调控作用,同时可以通过STAT3信号通路影响结直肠癌的发生发展。

关键词：黑树莓多酚肠道菌群结直肠肿瘤 STAT3信号通路

Wnt通路肿瘤抑制基因去甲基化在黑树莓多酚防治结直肠癌中的作用研究

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Wnt通路肿瘤抑制基因去甲基化在黑树莓多酚防治结直肠癌中的作用...

作者：姜博文辽宁大学

学位级别：硕士

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,在所有癌症中结直肠癌的全球病发率位居第三。肿瘤的发生已被普遍认为是由于遗传学和表观遗传学层面上的改变而引起的。DNA甲基化是最普遍研究的表观修饰现象,并且通过修饰CpG二核苷酸阻止转录复合物结合... 详细信息

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,在所有癌症中结直肠癌的全球病发率位居第三。肿瘤的发生已被普遍认为是由于遗传学和表观遗传学层面上的改变而引起的。DNA甲基化是最普遍研究的表观修饰现象,并且通过修饰CpG二核苷酸阻止转录复合物结合到DNA上,进而沉默功能基因。并且DNA甲基化是可逆过程,可以通过作用于DNA甲基化的可逆过程逆转结直肠癌肿瘤抑制基因启动子高甲基化状态。目前认为靶向蛋白分子药物的开发是对结直肠癌治疗的新研究方向。黑树莓(BRB)是富含鞣花酸、花青素等酚酸类成分的天然水果。前期研究发现,BRB冻干粉对于结直肠肿瘤具有良好的预防作用。本研究主要应用现代分离方法制备纯化获得BRB多酚,将其分别处理AOM+DSS诱导的结直肠癌肿瘤小鼠动物模型及人类结直肠癌细胞,考察Wnt相关肿瘤抑制基因的表观遗传异常逆转在其肿瘤预防中的重要作用及对人类结直肠细胞增殖、凋亡和转移的信号通路调节作用。结果表明：(1)在体内实验中,黑树莓多酚逆转Wnt通路肿瘤抑制基因WIF1、SFRP2的高甲基化状态,并上调其蛋白水平进而下调Wnt通路关键因子β-catenin的蛋白水平。与此同时,黑树莓多酚下调调控甲基化的DNA甲基化转移酶DNMT1、 DNMT3A、 DNMT3B的表达。因此,结果显示黑树莓多酚防治结直肠癌的表观遗传机制是通过降低DNMTs的蛋白表达抑制肿瘤抑制基因DNA甲基化过程,阻止功能基因SFRP2、 WIF1沉默。通过其高表达抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制细胞增殖达到结直肠癌防治作用。(2)在体外实验中,结果显示,黑树莓多酚抑制人类结直肠癌细胞LoVo、 HCT-116的增殖。逆转Wnt通路肿瘤抑制基因WIF1、SFRP2的高甲基化状态,并上调其蛋白水平进而下调Wnt通路关键因子β-catenin的蛋白水平进而抑制结直肠癌细胞的增殖。黑树莓多酚下调细胞周期蛋白、基质金属蛋白酶,上调抗凋亡蛋白、钙黏蛋白表达进而抑制结直肠癌细胞的增殖转移促进其凋亡。综上所述,黑树莓多酚抑制结肠癌作用机制之一是通过下调DNA甲基化转移酶的蛋白水平逆转肿瘤抑制基因SFRP2、WIF1启动子区域的高甲基化状态,使SFRP2、WIF1蛋白水平升高抑制降低β-catenin蛋白表达进而抑制Wnt/β-catenin信号通路最终达到降低结直肠癌细胞增殖的作用。此外,黑树莓多酚通过作用于凋亡、转移等其他信号通路关键蛋白发挥降低结肠癌的发生和转移的活性。基于上述的实验结果,黑树莓多酚的肿瘤预防作用及机制的研究具有重要的意义,黑树莓多酚作为一种新型制剂在防治结直肠癌的原发上具有很大的潜能,从长远来看,具有更好的临床应用前景。

关键词：结直肠癌黑树莓多酚甲基化 SFRP2 WIF1

黑树莓多酚对胃癌大鼠肿瘤的影响及其作用机制的研究

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中国现代普通外科进展 2022年第2期25卷 94-97页

作者：鲁峰刚吴忠坤张毅沈乃营陕西省核工业二一五医院普通外科陕西咸阳712000

目的:分析黑树莓多酚对胃癌大鼠肠道微生态的影响,探讨黑树莓多酚对胃癌的影响机制。方法:将30只雄性健康SD大鼠分为对照组、模型组和黑树莓多酚组。对照组大鼠不做任何处理,模型组及黑树莓组均进行胃癌造模。黑树莓多酚组大鼠使用黑树... 详细信息

目的:分析黑树莓多酚对胃癌大鼠肠道微生态的影响,探讨黑树莓多酚对胃癌的影响机制。方法:将30只雄性健康SD大鼠分为对照组、模型组和黑树莓多酚组。对照组大鼠不做任何处理,模型组及黑树莓组均进行胃癌造模。黑树莓多酚组大鼠使用黑树莓多酚进行干预治疗,对照组和模型组给予正常饲料饲养。干预结束后检测各组大鼠粪便中肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、产气荚膜梭菌水平,检测各组大鼠盲肠残留物pH水平,测量模型组及黑树莓多酚组肿瘤最大径;检测各组大鼠腋下和小肠组织中IL-1、IL-6、IL-10及TNF-α水平。结果:黑树莓多酚组肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌水平均明显高于模型组,产气荚膜梭菌水平低于模型组,差异有统计学意义(P黑树莓多酚组,差异有统计学意义(P黑树莓多酚组腋下和小肠组织IL-1、IL-6、IL-10及TNF-α水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P黑树莓多酚可有效改善胃癌大鼠肠道微生态,并通过影响体内pH、肠道微生物平衡及炎症因子水平干扰胃癌发生发展。

关键词：胃肿瘤黑树莓多酚肠道微生态大鼠 SD

黑树莓多酚经调节STAT3/Survivin信号途径对胃癌大鼠的作用机制分析

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现代生物医学进展 2024年第9期24卷 1623-1627页

作者：李雨张杨李小风唐仁哲刘松江黑龙江中医药大学附属第一医院肿瘤科黑龙江哈尔滨150040 黑龙江中医药大学附属第一医院消化科黑龙江哈尔滨150040 黑龙江中医药大学研究生院黑龙江哈尔滨150040

目的:分析黑树莓多酚经调节STAT3/Survivin信号途径对胃癌大鼠的作用机制。方法:选取40只雄性健康SD大鼠,取10只作为空白对照组,另30只制备胃癌大鼠模型,建模成功后分为模型组和黑树莓多酚(低、高剂量)组,各组10只;给予黑树莓多酚(低、... 详细信息

目的:分析黑树莓多酚经调节STAT3/Survivin信号途径对胃癌大鼠的作用机制。方法:选取40只雄性健康SD大鼠,取10只作为空白对照组,另30只制备胃癌大鼠模型,建模成功后分为模型组和黑树莓多酚(低、高剂量)组,各组10只;给予黑树莓多酚(低、高剂量)组大鼠5%、10%黑树莓多酚饲料喂养,给予空白对照组和模型组大鼠给予普通饲料喂养,持续干预8周后测量大鼠体质量和肿瘤体积;并采用Western blot检测STAT3、Survivin蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测组织病理学和炎症因子水平。结果:黑树莓多酚(低、高剂量)组体质量、肿瘤体积均低于模型组,高剂量组明显低于低剂量组(P黑树莓多酚(低、高剂量)组均低于模型组,高剂量组明显低于低剂量组(P黑树莓多酚(低、高剂量)组胃动素(MTL)、胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃泌素(GAS)水平明显高于模型组,高剂量组明显高于低剂量组(P黑树莓多酚(低、高剂量)组显著高于模型组,高剂量组显著高于低剂量组(P黑树莓多酚通过调节STAT3/Survivin信号途径的方式有利于抑制胃癌大鼠肿瘤生长,并有效调节胃肠激素,改善胃功能,同时还能通过影响炎症因子水平的方式干扰胃癌进展。

关键词：胃癌大鼠黑树莓多酚 STAT3/Survivin信号通路作用机制

树莓多酚对miR-24-1-5p的调控在结直肠癌中的作用研究

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树莓多酚对miR-24-1-5p的调控在结直肠癌中的作用研究

作者：张赫辽宁大学

学位级别：硕士

微小RNA(microRNA)的发现是一个极其重要且突破性的发现,成熟的miRNA通过作用于mRNA,引发靶mRNA的降解或翻译抑制进而发挥其作用。目前在肿瘤的发生发展及相关转移的研究中发现miRNA在多种癌症中的表达失调发挥着重要的作用,包括结肠直... 详细信息

微小RNA(microRNA)的发现是一个极其重要且突破性的发现,成熟的miRNA通过作用于mRNA,引发靶mRNA的降解或翻译抑制进而发挥其作用。目前在肿瘤的发生发展及相关转移的研究中发现miRNA在多种癌症中的表达失调发挥着重要的作用,包括结肠直肠癌(CRC)。在对miRNA众多探寻中不难发现,miRNA会调节Wnt信号通路,Wnt/β-catenin信号通路无论是在结直肠癌的增殖及转移中还是在其他恶性肿瘤中均扮演着极其重要的角色。研究发现miRNA能调节与其互补的靶基因从而调控Wnt/β-catenin通路进而参与像口腔鳞状细胞癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、食道癌等肿瘤的发生及转移。此外,在结直肠癌细胞中microRNA-145能靶向catenin delta-1调节Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。本课题研究意义在于,我们在初始探究工作中用基因芯片筛选分析方法发现miR-24-1-5p和正常组织相比,在结直肠癌组织中差异表达。基于此前这项发现,将进一步研究明确miR-24-1-5p在结直肠癌组织和细胞中的具体表达情况,是如何调控的,并探索其对结直肠癌细胞系HCT-116和Caco2细胞生物学特征的影响作用,同时深层次理解miR-24-1-5p是如何发挥生物学功能的分子机理,为今后探求结直肠癌治疗方面找寻新的靶点奠定理论性的基础。研究结果:(1)组织miRNA基因芯片微阵列结果分析:鉴定异常表达的miRNA是在结肠直肠癌中阐明miRNA介导的致癌途径的第一步。基于这一点,我们采用基因芯片技术分析小鼠结直肠癌组织,对比miRNA图谱得出miR-24-1-5p在AOM+DSS组小鼠中低表达,但在BRB治疗12周后,其表达水平显著上调,提示miR-24-1-5p可能发挥肿瘤抑制作用,且BRB可作为肿瘤形成的化学预防剂。(2)MiR-24-1-5p在CRC组织和CRC细胞系中表达下调,用BRB处理的组织和CRC细胞系中表达上调:为了进一步评估来自基因芯片微阵列分析的结肠组织中的结果,通过RT-qPCR验证三组小鼠的结肠组织中及不同剂量BRB处理的5种人结肠直肠癌细胞系中的miR-24-1-5p表达。数据表明miR-24-1-5p的表达模式与基因芯片结果一致。(3)MiR-24-1-5p对结直肠癌细胞生物学行为的影响:为了进一步评估miR-24-1-5p的生物学功能,我们用RT-qPCR方法检测CRC细胞系(HCT-116和Caco2)转染效率,miR-24-1-5p的表达均明显升高。证明我们的转染成功,达到可进行下步实验的标准。MTT细胞增殖实验结果显示,在HCT-116和Caco2细胞中转染miR-24-1-5p质粒24小时后,miR-24-1-5p处理的细胞的存活率在HCT-116和Caco2细胞中分别为56%和52%,而对照细胞存活力是100%,这表明与对照细胞相比miR-24-1-5p可以显著降低CRC细胞的增殖率。细胞划痕实验结果显示,在miR-24-1-5p转染的细胞中观察到划痕距离明显增加,说明miR-24-1-5p能够显著的抑制细胞迁移作用。Transwell实验结果显示,miR-24-1-5p转染的细胞组中在荧光显微镜下能观察到的细胞数明显减少,由此证明miR-24-1-5p显著的抑制CRC侵袭。平板克隆实验结果显示,HCT-116-vector克隆形成数为386.3个,HCT-116–mi R-24-1-5p克隆形成数为130个,Caco2–vector克隆形成数为607.3个,Caco2–miR-24-1-5p克隆形成数为31个,说明miR-24-1-5p能抑制CRC细胞克隆形成率。(4)MiR-24-1-5p与β-catenin的3’-UTR可特异性结合,抑制其蛋白的表达:通过生物信息学软件miRanda v3.3a(评分S≥140和能量E≤-7.0)预测miR-24-1-5p可能结合的靶基因。从所有的候选靶基因中,我们选择β-catenin作为潜在的靶点,主要考虑到β-catenin蛋白在结肠直肠癌发展中发挥的重要作用;此外,β-catenin 3'-UTR中的miR-24-1-5p结合序列在物种间高度保守。通过RT-qPCR和Western Blot实验,检测miR-24-1-5p过表达对β-catenin的mRNA和蛋白质水平的影响。结果显示:过表达miR-24-1-5p不影响β-catenin mRNA水平,而是引起β-catenin蛋白表达水平显著降低。接下来,对β-catenin蛋白稳定性进行进行检测,分别用10μm CHX处理不同时间点(0,10,12,14小时)得出转染的miR-24-1-5p质粒组中β-catenin的蛋白质合成率显著降低,表明miR-24-1-5p能够抑制β-c

关键词：结直肠癌 miR-24-1-5p 黑树莓多酚 Wnt/β-catenin信号通路