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黑果枸杞花青素介导低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞ceRNA调控网络构建

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农业生物技术学报 2023年第8期31卷 1671-1683页

作者：李金铭吴华舒美玲沈童武小庆王硕李汶蒲青海大学农牧学院

环状RNAs(circular RNAs, circRNAs)作为高效竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)，通过miRNA海绵效应调节细胞分化、增殖、凋亡和能量代谢等参与调控低氧诱导的细胞生物过程。黑果枸杞(Lycium ruthenicum)富含花青素(anthocyanins)。花青素具有较强的抗氧化能力，可以有效缓解心肌细胞缺氧损伤。本研究利用RNA-seq技术和生物信息学方法筛选差异表达的circRNA、miRNA和mRNA，构建circRNA-miRNA-mRNA调控网络，利用qRT-PCR筛选可能参与黑果枸杞花青素对低氧诱导的H9c2大鼠(Rattus norvegicus)心肌细胞调控的ceRNA关系对。结果显示，差异表达的1 570个mRNAs、5个miRNAs和4个circRNAs是低氧相关分子，可能参与黑果枸杞花青素对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞的调控。基于皮尔逊相关性分析和靶关系预测，成功构建ceRNA网络，并利用qRT-PCR筛选到2个候选的circRNA-miRNA-mRNA关系对。本研究为深入探讨circRNA及其靶基因参与调控黑果枸杞花青素对心肌细胞保护作用的机制提供基础资料。

关键词：黑果枸杞花青素 H9c2大鼠心肌细胞环状RNA(circRNA) 竞争性内源RNA(ceRNA)网络低氧保护效应

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黑果枸杞花青素对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞增殖的影响

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东北农业大学学报 2023年第7期54卷 41-48页

作者：李金铭王梦杰吴华沈童王硕武小庆青海大学农牧学院西宁810016

研究通过构建H9c2大鼠(Rattus norregicus)心肌细胞体外低氧模型,检测H9c2大鼠心肌细胞活性、细胞周期以及增殖相关因子CCNT2、CDK9和FOXP1的mRNA和蛋白表达,探究黑果枸杞花青素(Lycium ruthenicum Murry anthocyanins,AC)对H9c2大鼠心肌细胞增殖作用的影响。结果表明,25和50μg·mL^(-1)黑果枸杞花青素诱导24、36和48 h在常氧和低氧条件下均显著提高H9c2大鼠心肌细胞活性(P黑果枸杞花青素后G0/G1期细胞数量显著降低(P黑果枸杞花青素可显著上调CCNT2、CDK9和FOXF1的mRNA和蛋白表达(P黑果枸杞花青素促进CCNT2、CDK9和FOXP1相关因子表达,对低氧下H9c2大鼠心肌细胞增殖活性发挥保护作用,促进H9c2大鼠心肌细胞周期进程,为开发高原动物低氧生产模式下饲料添加剂,提高动物低氧适应性奠定基础。

关键词：黑果枸杞花青素低氧 H9c2大鼠心肌细胞增殖

黑果枸杞花青素通过调节Ca2+稳态对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞的保护作用

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中国兽医科学 2023年第11期53卷 1468-1474页

作者：李金铭吴华沈童王硕武小庆青海大学农牧学院青海西宁810016

本课题组前期研究发现,低氧下H9c2大鼠心肌细胞呈现凋亡和坏死的形态,黑果枸杞花青素(Lycium ruthenicum Murray anthocyanins,AC)能够有效保护低氧下H9c2大鼠心肌细胞的形态,缓解低氧诱导H9c2大鼠心肌细胞的凋亡。本研究通过构建H9c2... 详细信息

本课题组前期研究发现,低氧下H9c2大鼠心肌细胞呈现凋亡和坏死的形态,黑果枸杞花青素(Lycium ruthenicum Murray anthocyanins,AC)能够有效保护低氧下H9c2大鼠心肌细胞的形态,缓解低氧诱导H9c2大鼠心肌细胞的凋亡。本研究通过构建H9c2心肌细胞体外低氧模型,检测H9c2心肌细胞肌浆网钙ATP酶(SERCA)活性、Ca^(2+)浓度和Ca^(2+)信号通路相关因子钙敏感受体(CASR)、质膜Ca^(2+)ATP酶(PMCA)、钙调蛋白(CaM)和SERCA的mRNA和蛋白表达,探究黑果枸杞花青素通过调节Ca^(2+)稳态对H9c2心肌细胞低氧损伤的影响。结果显示,与常氧组相比,低氧可极显著下调SERCA活性(P黑果枸杞花青素处理后能够极显著上调SERCA活性(P0.05);显著下调SERCA的mRNA表达水平(P黑果枸杞花青素能够显著下调CaM和CASR的mRNA表达水平(P0.05);极显著上调PMCA和SERCA的蛋白表达水平(P黑果枸杞花青素能够通过上调Ca^(2+)信号通路因子PMCA和SERCA的mRNA和蛋白表达水平,下调CaM的mRNA和蛋白表达水平以及CASR的m RNA表达水平,以调控低氧造成H9c2心肌细胞内Ca^(2+)失衡,缓解心肌细胞氧化损伤。

关键词：黑果枸杞花青素 H9c2大鼠心肌细胞低氧 Ca2+稳态保护作用

青藏高原黑果枸杞花青素对人肝癌细胞增殖和自噬的影响

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天然产物研究与开发 2021年第1期33卷 79-88页

作者：王梦杰李玉林刘嘉华张龙飞阿孝蓉周佳俊吴华柴沙驼青海大学农牧学院中国科学院西北高原生物研究所青海大学畜牧兽医科学院西宁810000

探究黑果枸杞花青素在体外对人肝癌HepG2细胞增殖和自噬的影响。利用CCK-8法测定细胞活力,EdU和细胞划痕试验检测细胞增殖和迁移效果,RT-PCR和Western blot检测增殖和自噬相关基因的mRNA和蛋白表达。结果显示,黑果枸杞花青素可有效抑制... 详细信息

探究黑果枸杞花青素在体外对人肝癌HepG2细胞增殖和自噬的影响。利用CCK-8法测定细胞活力,EdU和细胞划痕试验检测细胞增殖和迁移效果,RT-PCR和Western blot检测增殖和自噬相关基因的mRNA和蛋白表达。结果显示,黑果枸杞花青素可有效抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和迁移;上调增殖因子(LATS1、LATS2和MOB1)和自噬因子(Beclin-1、LC3-Ⅱ和AMPK),并下调增殖因子YAP的mRNA水平;下调自噬因子p-mTOR和细胞周期因子CDK4,并上调自噬因子p-AMPK和LC3-Ⅱ的蛋白表达。由此推测黑果枸杞花青素可在体外抑制人肝癌HepG2细胞增殖和迁移,并促进人肝癌HepG2细胞发生自噬。

关键词：黑果枸杞花青素人肝癌HepG2细胞增殖自噬

苹果酸酰化对黑果枸杞花青素稳定性改善的研究

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食品工业科技 2017年第23期38卷 58-63,68页

作者：古明辉陈虎李希羽高庆超王树林青海大学农牧学院青海西宁810016 青海大学省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室青海西宁810016

由于黑枸杞花青素的稳定性较差,在食品及药品中的应用受到限制。为了提高其稳定性,对黑枸杞花青素进行苹果酸酰基化改性。酰化后在p H3.5体系下以90℃水浴下酰化花青素提高保留率为指标,通过单因素实验探讨苹果酸与花青素的质量比、搅... 详细信息

由于黑枸杞花青素的稳定性较差,在食品及药品中的应用受到限制。为了提高其稳定性,对黑枸杞花青素进行苹果酸酰基化改性。酰化后在p H3.5体系下以90℃水浴下酰化花青素提高保留率为指标,通过单因素实验探讨苹果酸与花青素的质量比、搅拌时间和反应温度对酰化效果的影响,采用正交实验优化酰化反应工艺条件,并用紫外可见和傅里叶红外吸收光谱法验证。研究了酰基化花青素的光、热稳定性,同时建立并验证酰基化花青素热降解动力学模型。结果表明,当黑枸杞花青素与苹果酸的质量比为1∶3.5,搅拌5 h,反应温度50℃时,花青素的酰化提高保留率可达26.39%,与非酰化花青素相比,光稳定性增加17%。未酰化花青素预测模型:t=(lnρ_0-lnρ_1)/(0.3765exp(-742.7/T));酰化花青素预测模型:t=(lnρ_0-lnρ_1)/(0.2640exp(-685.8/T))。在80℃条件下应用热降解模型分别预测未酰化和酰化黑果枸杞花青素的半衰期,其结果分别为15.09和18.32 h,测定其保留率分别为53.2%和48.7%,接近初始值的一半,热降解动力学模型有效。实验表明苹果酸酰化花青素方法切实可行,产物酰化花青素的稳定性得到提升。

关键词：酰基化黑果枸杞花青素苹果酸稳定性

黑果枸杞花青素对人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬相互作用的影响

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青海大学学报 2022年第3期40卷 54-59页

作者：刘嘉华王梦杰张龙飞薛才华武强武鸿莲王硕吴华青海大学农牧学院青海西宁810016

为了研究黑果枸杞花青素(Anthocyanins from Lycium ruthenicum Murr,ALR)对人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬相互作用的影响。将ALR与3-MA(自噬抑制剂)结合,采用Hoechst染色、流式细胞术、qRT-PCR和Western Blot法,测定人肝癌HepG2细胞核形... 详细信息

为了研究黑果枸杞花青素(Anthocyanins from Lycium ruthenicum Murr,ALR)对人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬相互作用的影响。将ALR与3-MA(自噬抑制剂)结合,采用Hoechst染色、流式细胞术、qRT-PCR和Western Blot法,测定人肝癌HepG2细胞核形态、凋亡率和凋亡因子(包括JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3)的mRNA表达及蛋白表达情况。将ALR与AG490(凋亡通路抑制剂)结合,使用qRT-PCR及Western Blot法检测人肝癌HepG2细胞自噬因子(LC3、LC3-Ⅱ)的mRNA表达及蛋白表达情况。结果表明:ALR结合3-MA后可诱导人肝癌HepG2细胞核出现明显的凋亡形态变化,提高人肝癌HepG2细胞凋亡率,显著抑制JAK2、STAT3的mRNA表达(P<0.05),显著抑制p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达(P<0.05);ALR结合AG490后可显著提高LC3的mRNA表达及LC3-Ⅱ的蛋白表达(P<0.05)。综上所述,抑制细胞自噬可促进ALR诱导的人肝癌HepG2细胞凋亡,促进人肝癌HepG2细胞凋亡可增强细胞自噬。

关键词：黑果枸杞花青素肝癌细胞凋亡自噬相互作用

柴达木黑果枸杞花青素对UVB辐射体外培养人皮肤成纤维细胞的衰老及p53、p21影响的研究

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柴达木黑果枸杞花青素对UVB辐射体外培养人皮肤成纤维细胞的衰老...

作者：魏丽青海大学

学位级别：硕士

目的:1.建立UVB辐射诱导HSFs细胞的早衰模型;2.研究柴达木黑果枸杞花青素对UVB辐射损伤体外人HSFs的早衰进程有无干预作用,同时探讨其发挥干预早衰进程的作用机制。方法:取处于对数生长期的第3代至第5代的人皮肤成纤维细胞,分为空白对... 详细信息

目的:1.建立UVB辐射诱导HSFs细胞的早衰模型;2.研究柴达木黑果枸杞花青素对UVB辐射损伤体外人HSFs的早衰进程有无干预作用,同时探讨其发挥干预早衰进程的作用机制。方法:取处于对数生长期的第3代至第5代的人皮肤成纤维细胞,分为空白对照组、UVB照射组、黑枸杞花青素100ug/ml+UVB照射组、黑枸杞花青素500ug/ml+UVB照射组、黑枸杞花青素1000ug/ml+UVB照射组。除对照外,其余各组按照以上进行照光和（或）药物处理,在花青素干预24小时后连续3天进行照光处理,照光完成后继续培养细胞72小时。（1）使用SA-β-Gal染色剂对老化细胞染色,借助光学显微镜确认染色情况并计算染色阳性的老化细胞数;（2）用实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）计算各组衰老关联基因p53、p21表达量。结果:1.成功建立UVB辐射诱导HSFs的早衰模型;2.柴达木黑果枸杞花青素可以减轻UVB辐射诱导HSFs的早衰。同空白组比较,UVB放射组HSFs衰老细胞数大幅度增加,SA-β-Gal染色阳性率显著升高（P＜0.01）。与UVB照射组比较,经柴达木黑果枸杞花青素干预的各实验组SA-β-Gal染色阳性率降低（P＜0.05）,且随着药物浓度的增加其阳性率降低越明显。3.柴达木黑果枸杞花青素可以下调UVB辐射HSFs后衰老相关基因p53、p21的表达,与UVB照射组比较,经不同浓度达木黑果枸杞花青素干预的各实验组衰老基因p53、p21表达随药物浓度的升高而降低（P＜0.05）。结论:柴达木黑果枸杞花青素可抑制UVB辐射诱导HSFs的早衰进程,具有光保护作用,其分子机制可能是通过下调p53、p21的表达水平减轻HSFs的紫外线损伤。

关键词：黑果枸杞花青素 UVB p53 p21