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黑三棱苯丙氨酸解氨酶基因克隆与序列分析

中草药 2014年第3期45卷 403-409页

作者：高杰谷巍周娟娟吴启南巢建国南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的对连接黑三棱初生代谢及次生代谢途径的关键酶苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)进行基因全长的克隆和生物学信息分析。方法以黑三棱总RNA为模板,采用同源克隆法和RACE技术克隆黑三棱PAL基因的cDNA全长,并通过DNAMA... 详细信息

目的对连接黑三棱初生代谢及次生代谢途径的关键酶苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)进行基因全长的克隆和生物学信息分析。方法以黑三棱总RNA为模板,采用同源克隆法和RACE技术克隆黑三棱PAL基因的cDNA全长,并通过DNAMAN软件和ExPASy在线分析等方法对其生物信息学进行分析。结果获得黑三棱PAL基因全长cDNA,GenBank注册号为KF633470,序列分析表明,所克隆的cDNA全长为2 413 bp,包含一个2 151 bp的开放阅读框架,编码716个氨基酸的蛋白。预测该蛋白的相对分子质量为1.98×105,等电点为4.84,无信号肽,含有PAL酶活性中心序列GTITASGDLVPLSYIAG。结论首次克隆并获得黑三棱PAL基因全长cDNA,为黑三棱药效成分生源合成途径的阐明和改善中药材品质提供科学依据。

关键词：黑三棱苯丙氨酸解氨酶基因克隆信号肽生物信息学分析

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黑三棱的化学成分研究

中草药 2011年第3期42卷 440-442页

作者：孔丽娟梁侨丽吴启南蒋继宏南京中医药大学药学院江苏南京210046 徐州师范大学江苏省药用植物与生物技术重点实验室江苏徐州221116

目的研究黑三棱Sparganium stoloniferum的化学成分。方法应用色谱技术分离纯化,通过理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构。结果从黑三棱85%乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇棕榈酸酯(β-sitosterol palmitate,1)... 详细信息

目的研究黑三棱Sparganium stoloniferum的化学成分。方法应用色谱技术分离纯化,通过理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构。结果从黑三棱85%乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇棕榈酸酯(β-sitosterol palmitate,1)、β-谷甾醇(β-sitosterol,2)、壬二酸(azelaic acid,3)、二十二烷酸(docosanoic acid,4)、6,7,10-三羟基-8-十八烯酸(6,7,10-trihydroxy-8-octadecenoic acid,5)、对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde,6)、三棱二苯乙炔(sanleng diphenylacetylene,7)、阿魏酸(ferulic acid,8)、3,5-二羟基-4-甲氧基苯甲酸(3,5-dihydroxy-4-methoxy-benzoic acid,9)、2,7-二羟基呫吨酮(2,7-dihydroxy xanthone,10)、阿魏酸单甘油酯(glycerol ferulate,11)、β-胡萝卜苷(daucosterol,12)。结论化合物3、4和9～11为首次从三棱属植物中分离得到。

关键词：黑三棱壬二酸 2 7-二羟基呫吨酮阿魏酸单甘油酯 3 5-二羟基-4-甲氧基苯甲酸

黑三棱的生物学、药理作用及化学成分研究进展

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吉林农业大学学报 2012年第6期34卷 639-644页

作者：张军武郭斌尉亚辉西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室西安710069 陕西中医学院药学院咸阳712046

黑三棱是中国常用中药材之一,文中综述了近年来黑三棱的生物学特性、药理作用、化学成分以及炮制方法与生药鉴别的研究进展,为黑三棱的进一步开发、利用奠定基础。

关键词：黑三棱生物学特性药理作用化学成分炮制与生药鉴别

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黑三棱花粉活力与柱头可授性研究

中药材 2013年第8期36卷 1221-1224页

作者：孙亚昕巢建国谷巍吴启南韩怡南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的：研究黑三棱花粉活力与柱头可授性，为杂交育种工作提供理论依据。方法：采用琼脂培养基萌发法测定花粉活力，研究不同培养基、采集时间、贮藏条件对花粉活力的影响；用联苯胺一过氧化氢法测定柱头可授性。结果：最佳的花粉培养基... 详细信息

目的：研究黑三棱花粉活力与柱头可授性，为杂交育种工作提供理论依据。方法：采用琼脂培养基萌发法测定花粉活力，研究不同培养基、采集时间、贮藏条件对花粉活力的影响；用联苯胺一过氧化氢法测定柱头可授性。结果：最佳的花粉培养基为：10％蔗糖＋1％琼脂＋0．01％MgSO4·7H2O＋0．01％Ca（NO3）2·3H2O；开花第3天柱头可授性最强；低温干燥能延长花粉的贮藏时间，-70℃干燥条件下花粉可贮藏50d。结论：黑三棱人工授粉的最佳时期为开花后2～3d。

关键词：黑三棱花粉活力柱头可授性

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黑三棱挥发油化学成分的研究

山东中医杂志 1989年第6期8卷 28-29,58页

作者：袁久荣姜店春山东中医学院

从黑三棱Sparganium stolonife-rum Buch-Ham根茎中提得挥发油,采用气相色谱——质谱——计算机联用的方法测试分析,由所得28个色谱峰中鉴定出13个化合物。它们在黑三棱中均属首次发现。

关键词：黑三棱挥发油成分

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干旱胁迫对不同产地黑三棱生理生化的影响

中药材 2014年第3期37卷 369-371页

作者：孙亚昕巢建国谷巍吴启南刘菊燕南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的:研究干旱胁迫下不同产地黑三棱生理生化指标的变化,为研究其耐旱机制与抗旱品种的选育提供理论依据和实践参考。方法:采用PEG模拟干旱的方法,研究不同质量浓度PEG-6000胁迫后黑三棱叶片相对含水量(RWC)、渗透调节物质含量以及抗氧... 详细信息

目的:研究干旱胁迫下不同产地黑三棱生理生化指标的变化,为研究其耐旱机制与抗旱品种的选育提供理论依据和实践参考。方法:采用PEG模拟干旱的方法,研究不同质量浓度PEG-6000胁迫后黑三棱叶片相对含水量(RWC)、渗透调节物质含量以及抗氧化特性等生理生化指标的变化规律。结果:随着PEG-6000处理浓度的增加,黑三棱叶片中相对含水量减少;丙二醛和脯氨酸含量总体呈上升趋势;可溶性蛋白含量在胁迫初期有所下降,而后又有所上升,之后再略下降;而超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性呈先上升后下降的趋势。结论:4个产地的黑三棱均表现出一定的抗旱耐旱能力,相比之下,江苏与浙江种质抗旱能力更强。

关键词：黑三棱干旱胁迫生理生化

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荆三棱与黑三棱的化学成分及活性研究

荆三棱与黑三棱的化学成分及活性研究

作者：孔丽娟南京中医药大学

学位级别：硕士

中药三棱味苦,性平,归肝、脾经,具有破血行气,消积止痛的功效,属活血化瘀中药。中药三棱有荆三棱和黑三棱两个品种。荆三棱Scirpus fluviatilis (Torr.) A. Gray [S. yagara Ohwi]是莎草科藨草属植物荆三棱的干燥块茎。黑三棱Sparganium... 详细信息

中药三棱味苦,性平,归肝、脾经,具有破血行气,消积止痛的功效,属活血化瘀中药。中药三棱有荆三棱和黑三棱两个品种。荆三棱Scirpus fluviatilis (Torr.) A. Gray [S. yagara Ohwi]是莎草科藨草属植物荆三棱的干燥块茎。黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Hma.是黑三棱科植物黑三棱的干燥块茎。其中黑三棱是中国药典收载品种。实验应用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、制备薄层色谱等技术从荆三棱块茎80%乙醇提取物中分离到14个化合物并鉴定了其中含量较高的2个化合物的结构。分别为：三棱内酯B (sparstolonin B, S1)和三棱双苯内酯(SanLeng diphenyllactone, S2),其中三棱内酯B为新化合物,三棱双苯内酯首次从莎草科植物中分离到。实验用相同的技术从黑三棱块茎95%乙醇提取物中分离到了16个化合物,通过理化性质和波谱学方法鉴定了其中12个化合物的结构。分别为：过氧化麦角甾醇(ergosterol peroxide,1)、(8E,10E)-7,12-二氧-8,10-十八碳二烯酸((8E,10E)-7,12-dioxo-8,10-octade-cadienoic acid (ostopanic acid),2)、α-二十一烷酸单甘油酯(heneicosanoic acid2,3-dihydroxypropyl ester,3)、正丁酸(betulinic acid,4)、大黄素甲醚(physcion,5)、香草醛(vanillin,6)、大黄素(emodin,7)、香草酸(vanillic acid,8)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzo-ic acid,9)、反丁烯二酸(trans-butene diacid,10)、1-O-β可魏酰基-3-O-p-香豆酰基甘油(1-O-feruloyl-3-O-p-coumaroylglycerol,11)、赤藓醇(erythritol,12)。其中,化合物1-5、7、9-10、12为首次从黑三棱属中分离得到。对三棱内酯B进行了初步的体外抗动脉粥样硬化活性研究。实验结果表明：三棱内酯B对ADP诱导的兔血小板聚集具有较好的抑制作用,在浓度为14和28μg/ml,对血小板聚集的抑制率分别为14.63%和33.63%;三棱内酯B能够抑制巨噬细胞介导的LDL氧化,在浓度为10、20、50μg/ml,抑制率分别为21.08%、28.03%和45.02%;三棱内酯B还能抑制动脉平滑肌细胞迁移,在浓度为10、20、50μg/ml,抑制率分别为17.68%、43.54%和64.63%。

关键词：荆三棱黑三棱化学成分活性研究三棱内酯B

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富营养化水体对黑三棱品质的影响研究

富营养化水体对黑三棱品质的影响研究

作者：陈广云南京中医药大学

学位级别：硕士

环境对中药品质的形成具有重要作用,而水体环境对水生药用植物品质的形成更是至关重要,因此研究水体富营养化条件下水生植物生长发育特性、生理生化特性的变化对揭示水生药材品质形成及变化规律以及形成机制具有重要意义。本课题通过研... 详细信息

环境对中药品质的形成具有重要作用,而水体环境对水生药用植物品质的形成更是至关重要,因此研究水体富营养化条件下水生植物生长发育特性、生理生化特性的变化对揭示水生药材品质形成及变化规律以及形成机制具有重要意义。本课题通过研究富营养化条件下水生药用植物三棱品质的形成与变化,运用植物生理学、植物代谢组学、环境蛋白质组学、分析化学以及药理学等手段探讨富营养化水体对黑三棱生长过程中生理生化特性及代谢产物的影响以及三棱药材中相关指标的影响,为全面揭示三棱品质的形成奠定了基础。主要研究结果如下：1.富营养化水体中氮磷浓度对水生植物生理状态和生化组成具有较大影响,故本课题组对不同浓度氮磷胁迫培养30 d后的三棱植株进行了相关生理生化指标的测定,结果表明富营养化水体中氮磷浓度对三棱相对生长速率、可溶性蛋白含量、叶绿素类物质含量、质膜透性以及抗氧化酶系统中过氧化氢酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO)活性具有显著促进作用,同时对三棱植株中可溶性多糖含量、脯氨酸含量、丙二醛含量及过氧化物酶活性(POD)具有抑制作用,而对三棱植株中含水量及超氧化物歧化酶(SOD)活性无显著性影响,故可以认为富营养胁迫对水生植物三棱生长发育具有重要影响,而且胁迫的程度不同,影响亦不同。2.本课题组运用紫外分光光度法和HPLC法等相关分析方法对不同浓度氮磷胁迫培养30d后的三棱植株进行了相关次生代谢产物含量及与次生代谢相关的关键酶(苯丙氨酸解氨酶PAL、肉桂酸4-羟基化酶C4H、4-香豆酸-辅酶A连接酶4CL)活性的测定,结果表明富营养化条件下氮磷胁迫浓度对三棱植株中总酚和总皂苷含量有促进作用,但对照组贫营养胁迫下总酚和总皂苷含量均为最高,表明贫营养胁迫在三棱生长初期的总酚和总皂苷的积累具有促进作用。而对三棱中七种酚类成分及相关酶活性的测定亦可发现,在对照组贫营养胁迫下多数酚类成分含量为最高,且PAL与4CL活性也均为最高,可以认为在贫营养胁迫条件下三棱生长初期的初生代谢受到抑制,从而激活相关次生代谢酶活性以启动次生代谢过程,合成与积累次生代谢产物以抵御贫营养胁迫的影响;而在富营养化条件下,在一定氮磷浓度范围内可促进三棱植株中相关酶的活性及次生代谢产物的合成与积累,而氮磷浓度过高则会产生抑制作用。3.本课题组对不同浓度氮磷胁迫长期培养下的三棱药用部位块茎进行了相关生理生化指标的测定,结果表明富营养化水体中氮磷浓度对三棱块茎形状、产量、可溶性多糖含量、可溶性蛋白含量、脯氨酸含量、丙二醛含量以及抗氧化酶CAT、POD和PPO活性具有促进作用,且大多数指标中高浓度氮磷胁迫组与其他组相比具有显著性差异,可以认为富营养化水体中氮磷胁迫浓度对三棱药材产量及相关生理生化特性具有重要影响,以及在培养末期三棱块茎对富营养化胁迫表现出了良好的适应性。4.本课题组运用紫外分光光度法和HPLC法等相关分析方法对不同浓度氮磷胁迫长期培养下的三棱块茎进行了相关次生代谢产物含量及关键酶活性的测定,结果表明氮磷胁迫浓度对三棱块茎中总酚物质的积累具有促进作用,而对总皂苷物质的积累则有抑制作用,对甘露醇的积累则呈现先促进后抑制的状态,且与培养初期相比,三种物质的含量显著升高(培养初期三棱植株中未检测到甘露醇),可以认为富营养化水体中氮磷胁迫浓度对三棱块茎中不同次生代谢产物的影响是不同的;氮磷胁迫浓度对三棱块茎中七种酚类成分含量及相关酶活性的影响较为复杂,而与培养初期相比,七种酚类成分中对羟基苯甲醛、对香豆酸、阿魏酸、芦丁含量显著降低,香草酸、山奈酚、芒柄花素含量,可以认为酚类成分生物合成途径比较复杂,氮磷胁迫对酚类物质的合成与积累的影响亦较为复杂。5.本课题组运用双向蛋白电泳技术分析了富营养化胁迫培养下三棱块茎中蛋白表达的差异,结果表明,不同氮磷浓度胁迫培养下的三棱块茎蛋白表达谱中所分离得到的蛋白为点数明显不同,且基本呈上升趋势,而且不同组相比,浓度差越大,谱图中具有表达差异的蛋白位点数越多,表明不同浓度氮磷胁迫对三棱块茎中蛋白的种类和表达量都具有较大影响;再结合MALDI-TOF/MS质谱技术,鉴定了18个与表达差异相关的蛋白,其中有有8个蛋白参与光合作用过程,4个蛋白参与蛋白质的合成过程,2个蛋白参与脂肪酸的合成与分解过程,1个蛋白参与金属离子转运过程,可以认为富营养化胁迫对三棱光合作用的影响较大。6.建立了基于抗凝效价和抗氧化效价的生物活性测定方法,测定了不同产地不同品种的三棱药材的生物效价值,结果表明不同产地不同品种的药效活性相差较大,且荆三棱的抗凝活性和抗氧化活性均优于黑三棱;运用建立的三棱抗氧化效价测定方法对富营养化胁迫培养下的三棱药材进行了抗氧化效价的测定,结果表明,贫营养胁迫下三棱药材的抗氧化效价值最高,实验组中中浓度胁迫培养条件下三棱效价最高,且各组之间有显著性差异,表明富营养化胁迫对三棱抗氧化活性具有显著影响。

关键词：黑三棱生理生化次生代谢产物双向疑胶电泳生物效价品质评价

中药三棱不同来源植物荆三棱和黑三棱的现代研究进展

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中国现代中药 2018年第1期20卷 110-116,121页

作者：汤雅敏何畅杨玉洁段金廒吴启南梁侨丽南京中医药大学药学院江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏省中药功效物质重点实验室江苏南京210023

对活血化瘀中药三棱不同基源荆三棱和黑三棱块茎的化学成分和药理作用研究进展进行整理,为合理开发利用两种药用资源提供参考。两种三棱主要含有机酸、异香豆素、茋、黄酮等类等成分,其中,异香豆素类和茋类是三棱的特征性成分;两种三棱... 详细信息

对活血化瘀中药三棱不同基源荆三棱和黑三棱块茎的化学成分和药理作用研究进展进行整理,为合理开发利用两种药用资源提供参考。两种三棱主要含有机酸、异香豆素、茋、黄酮等类等成分,其中,异香豆素类和茋类是三棱的特征性成分;两种三棱都具有抗炎、抗肿瘤、抑制血管生成和保护肝纤维化等作用。异香豆素类黑三棱素B是一个选择性TLR2和TLR4拮抗剂,具有多种活性。两种三棱有相似的物质基础和药理活性,为不同科属的两种植物块茎同为三棱药用近千年的历史提供依据。

关键词：荆三棱黑三棱化学成分药理活性