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犬弓首蛔虫黏蛋白2的原核表达及多克隆抗体的制备

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西南大学学报（自然科学版） 2023年第1期45卷 66-73页

作者：贾红菓谭纯王冰楠梅四鹏孙雪杨晓伟周荣琼西南大学动物医学院重庆荣昌402460

根据犬弓首蛔虫(Toxocara canis)黏蛋白2的基因组数据(GenBank:AF167707),以***成虫的基因组DNA为模板扩增Tc-muc-2基因并进行序列分析;同时构建Tc-muc-2/pCold TF原核表达载体,采用ITPG诱导表达,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体.... 详细信息

根据犬弓首蛔虫(Toxocara canis)黏蛋白2的基因组数据(GenBank:AF167707),以***成虫的基因组DNA为模板扩增Tc-muc-2基因并进行序列分析;同时构建Tc-muc-2/pCold TF原核表达载体,采用ITPG诱导表达,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体.结果显示Tc-muc-2基因全长序列为549 bp,共编码183个氨基酸;多重序列比对发现犬弓首蛔虫的黏蛋白均具有SKhT保守结构域,且含有不同串联重复序列组成的黏蛋白结构域;种系发育分析结果显示与猪蛔虫进化关系较近;SDS-PAGE结果表明重组蛋白Tc-MUC-2相对分子质量为7.5×10^(4),以可溶性形式表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,以250 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度目的蛋白;将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体,间接ELISA结果显示其多克隆抗体效价大于1∶512000,表明重组蛋白的免疫原性较好,SDS-PAGE结果显示纯化后的抗体纯度高于95%,Western Blot结果显示抗体能与Tc-MUC-2蛋白特异性结合,表明抗体特异性高.

关键词：犬弓首蛔虫黏蛋白2 克隆原核表达多克隆抗体

肿瘤坏死因子-α、c-Jun氨基末端激酶和黏蛋白2在肠屏障功能障碍中的研究进展

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华西医学 2023年第8期38卷 1257-1261页

作者：阿曼古丽·莫明张琪艾山江·肉孜姜梦娜宋云林复旦大学附属中山医院重症医学科上海200032 新疆医科大学第一附属医院重症医学中心乌鲁木齐830054

肠道黏液屏障和机械屏障均是最重要的天然屏障,前者为第一道防御屏障,可将肠腔内病原菌与上皮细胞隔开,防止一些致病物质透过肠屏障进到人体循环系统。研究表明,体内出现炎症会影响黏液层中关键蛋白黏蛋白2的含量进而改变黏液屏障的通透... 详细信息

肠道黏液屏障和机械屏障均是最重要的天然屏障,前者为第一道防御屏障,可将肠腔内病原菌与上皮细胞隔开,防止一些致病物质透过肠屏障进到人体循环系统。研究表明,体内出现炎症会影响黏液层中关键蛋白黏蛋白2的含量进而改变黏液屏障的通透性,促进病原微生物的移位;而肿瘤坏死因子-α和c-Jun氨基末端激酶信号通路均已报道与炎症的发生发展密切相关。因此该文综述了肿瘤坏死因子-α、c-Jun氨基末端激酶通路以及黏蛋白2与肠屏障功能障碍之间的联系,以期为探索肠屏障功能相关研究提供新思路与方向。

关键词：肠屏障黏蛋白2 肿瘤坏死因子-α c-Jun氨基末端激酶信号通路

肠道黏蛋白2的分泌、结构、合成调控及其在肠道疾病发生发展中的作用

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动物营养学报 2020年第6期32卷 2521-2532页

作者：聂烁闻正顺浙江海洋大学食品与医药学院舟山316022

哺乳动物肠道分泌大量黏液形成黏液层,其主要成分是黏蛋白2(MUC2)。黏液层对肠道的润滑、保护及强大的屏障功能依赖于MUC2自身的特殊网状结构、性质与功能。肠道MUC2的存在对维系肠腔微环境稳定和肠上皮细胞功能正常具有重要作用。本文... 详细信息

哺乳动物肠道分泌大量黏液形成黏液层,其主要成分是黏蛋白2(MUC2)。黏液层对肠道的润滑、保护及强大的屏障功能依赖于MUC2自身的特殊网状结构、性质与功能。肠道MUC2的存在对维系肠腔微环境稳定和肠上皮细胞功能正常具有重要作用。本文综述了肠道MUC2的分泌、结构、合成调控及其在肠道疾病发生发展中的作用,为经调控MUC2防治肠道疾病提供理论依据。

关键词：肠道黏液层黏蛋白2 肠道疾病

黏蛋白2与黏蛋白4在肝内胆管结石致石胆汁形成中的作用

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中华肝胆外科杂志 2018年第9期24卷 609-612页

作者：李金海朱明辉蔡宇张海峰潘升华蒲青凡温州医科大学附属第三医院肝胆外科温州325200

目的研究黏蛋白（MUC）2与MUC4表达与肝内胆管结石致石胆汁形成的关系。方法收集肝脏部分切除的56例肝内胆管结石患者和17例对照患者的术前静脉血、术中胆汁及肝内胆管壁黏膜上皮组织。对两组患者术前血清及术中抽取胆管内胆汁中脂类指... 详细信息

目的研究黏蛋白（MUC）2与MUC4表达与肝内胆管结石致石胆汁形成的关系。方法收集肝脏部分切除的56例肝内胆管结石患者和17例对照患者的术前静脉血、术中胆汁及肝内胆管壁黏膜上皮组织。对两组患者术前血清及术中抽取胆管内胆汁中脂类指标进行测定；免疫组化染色法检查胆管壁MUC2与MUC4的表达；实时荧光定量PCR（1iT—PCR）检验胆管黏膜MUC2与MUC4的基因表达水平；对胆汁内脂类指标与黏蛋白表达情况进行相关性分析。结果肝内胆管结石组血清脂类指标均较对照组明显升高（均P〈0．05）；而胆汁总胆汁酸浓度、胆汁酸摩尔百分比较对照组明显降低（均P〈0．05）；肝内胆管结石组MUC2和mRNA表达较对照组高，但差异无统计学意义（均P〉0．05）。肝内胆管结石组MUC4和mRNA的表达较对照组明显升高（均P〈0．05）。肝内胆管结石组患者胆管MUC4mRNA的表达与胆汁中的总胆汁酸水平负相关（r=-0．374，P〈0．05）。结论肝内胆管结石患者MUC4表达增强，促进了胆管黏膜上皮对胆汁酸的吸收，使黏蛋白大量分泌进入胆汁，可能与致石胆汁形成有关。

关键词：肝内胆管结石致石胆汁黏蛋白2 黏蛋白4 胆石症

双歧杆菌对雏鸡肠道杯状细胞数量及黏蛋白2含量的影响

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中国兽医杂志 2016年第12期52卷 24-27,I0002页

作者：张美曦隋欣刘超男吕晓萍郑世民高雪丽东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省鸡西市动物疫病预防与控制中心黑龙江鸡西158200

本试验应用过碘酸雪夫染色法、荧光定量PCR、间接酶联免疫吸附试验对饲喂双歧杆菌后雏鸡肠道杯状细胞数量、MUC2 mRNA表达量及肠液黏蛋白2（MUC2）含量变化进行研究,揭示双歧杆菌对雏鸡局部黏膜免疫的影响。结果发现,饲喂双歧杆菌后1~1... 详细信息

本试验应用过碘酸雪夫染色法、荧光定量PCR、间接酶联免疫吸附试验对饲喂双歧杆菌后雏鸡肠道杯状细胞数量、MUC2 mRNA表达量及肠液黏蛋白2（MUC2）含量变化进行研究,揭示双歧杆菌对雏鸡局部黏膜免疫的影响。结果发现,饲喂双歧杆菌后1~18 d雏鸡肠道杯状细胞数量、MUC2 mRNA表达量及肠液MUC2含量不同程度高于对照雏鸡。其中,回肠杯状细胞数量、MUC2 mRNA及肠液MUC2含量于饲喂后1~4 d明显高于对照雏鸡（P〈0.05或P〈0.01）;结直肠MUC2mRNA于饲喂后1~7 d极显著高于对照雏鸡（P〈0.01）。结果表明,双歧杆菌能增加雏鸡肠道杯状细胞数量,提高MUC2的分泌量,增强雏鸡肠道黏膜免疫功能。

关键词：双歧杆菌雏鸡肠道杯状细胞黏蛋白2

益生菌对雏鸡肠道杯状细胞数量及黏蛋白2含量的影响

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益生菌对雏鸡肠道杯状细胞数量及黏蛋白2含量的影响

作者：隋欣东北农业大学

学位级别：硕士

本研究以1日龄雏鸡为研究对象,采用组织石蜡切片及高碘酸希夫染色法(PAS)和阿利新兰-高碘酸希夫染色法(AB-PAS)、透射电镜法、ELISA法以及荧光定量PCR法对应用益生菌后雏鸡肠道—回肠、盲肠、结肠杯状细胞数量、肠液黏蛋白MUC2含量及肠... 详细信息

本研究以1日龄雏鸡为研究对象,采用组织石蜡切片及高碘酸希夫染色法(PAS)和阿利新兰-高碘酸希夫染色法(AB-PAS)、透射电镜法、ELISA法以及荧光定量PCR法对应用益生菌后雏鸡肠道—回肠、盲肠、结肠杯状细胞数量、肠液黏蛋白MUC2含量及肠道MUC2mRNA表达的动态变化进行研究,揭示不同益生菌对雏鸡肠道杯状细胞数量及黏蛋白MUC2含量的影响,为益生菌的研发提供实验依据,降低雏鸡肠道疾病的发病几率。实验结果发现：1.雏鸡应用益生菌后,其回肠、盲肠、结肠的杯状细胞总数和酸性、双染、中性杯状细胞数量均不同程度高于对照雏鸡,其中,益生菌应用雏鸡回肠、盲肠杯状细胞总数均于饲喂益生菌后1-4天明显高于对照雏鸡(P黏膜免疫功能。2.雏鸡应用益生菌后,其回肠、盲肠、结肠肠液MUC2含量及回肠、盲肠、结肠MUC2mRNA表达均不同程度高于对照雏鸡,其中,益生菌应用雏鸡回肠、结肠肠液MUC2含量分别于饲喂益生菌后1-7天和1天明显高于对照雏鸡(P2mRNA表达分别于饲喂益生菌后1-4天、1天和1-7天明显高于对照雏鸡(P2含量,上调MUC2基因的表达,提高肠道的润滑和保护作用,增强肠道的非特异性免疫功能。3.超微结构检查发现：雏鸡应用益生菌后,肠道杯状细胞的线粒体、高尔基体、核糖体、内质网以及分泌的黏蛋白均较对照雏鸡数量增多,表明益生菌能够促进杯状细胞细胞器的生长以及黏蛋白的分泌。4.试验中应用的两种益生菌,乳酸杆菌对杯状细胞数量和黏蛋白MUC2含量的影响作用优于双歧杆菌。

关键词：益生菌雏鸡肠道杯状细胞黏蛋白2

黏蛋白2在结肠癌中的表达及其相关临床意义的研究

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中国医学创新 2015年第29期12卷 12-14页

作者：左晓旭朱袭嘉李盛国罗喜顺甘泽林王海鹏桂林医学院第二附属医院广西桂林541000

目的:研究黏蛋白(MUC2)在结肠正常组织、结肠良性腺瘤组织和结肠癌组织中的表达状况,以及MUC2的表达情况与结肠癌患者临床资料的关联。方法:选择2011年3月-2015年3月本院手术切除的结肠正常组织15例,结肠良性腺瘤组织41例及结肠癌组织12... 详细信息

目的:研究黏蛋白(MUC2)在结肠正常组织、结肠良性腺瘤组织和结肠癌组织中的表达状况,以及MUC2的表达情况与结肠癌患者临床资料的关联。方法:选择2011年3月-2015年3月本院手术切除的结肠正常组织15例,结肠良性腺瘤组织41例及结肠癌组织121例,应用免疫组织化学技术检测MUC2在不同组织中的表达。结果:(1)MUC2在结肠正常组织、结肠良性腺瘤组织和结肠癌组织中的阳性表达率分别为100%(15/15)、73.17%(30/41)和46.28%(56/121),不同组织中MUC2阳性表达率比较,差异有统计学意义(P2)MUC2高表达的结肠癌患者组织分型、淋巴结转移及肿瘤分期均优于MUC2低表达患者,比较差异均有统计学意义(P2的表达状况与组织分型、淋巴结转移和肿瘤分期有关。MUC2的表达下调可能参与了结肠癌的发生、发展、浸润和转移等过程。

关键词：黏蛋白2 结肠腺瘤结肠癌

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黏蛋白2在肿瘤相关性疾病中的研究进展

华夏医学 2017年第2期30卷 148-151页

作者：王海鹏桂林医学院第二附属医院胃肠外科广西桂林541199

黏蛋白2的相关功能和机制是近年来科学研究的重要领域。黏蛋白2的异常表达与肿瘤相关性疾病的发生、发展及预后密切相关。笔者就黏蛋白2在肿瘤相关性疾病中的研究进展进行综述。

关键词：黏蛋白2 肿瘤相关性

β_2肾上腺能受体与黏蛋白2在大鼠结肠黏膜的共存

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首都医科大学学报 2012年第2期33卷 193-197页

作者：李晓峰张悦李蕴朱进霞首都医科大学基础医学院生理与病理生理学系北京100069 首都医科大学基础医学院免疫学系北京100069

目的探究去甲肾上腺素对大鼠结肠黏液分泌的影响以及肾上腺能β受体在大鼠结肠黏膜的分布。方法采用酶联免疫吸附测定法检测去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对结肠黏液分泌的影响;用免疫荧光组织化学方法观察黏蛋白2(mucin2,MUC2)及β... 详细信息

目的探究去甲肾上腺素对大鼠结肠黏液分泌的影响以及肾上腺能β受体在大鼠结肠黏膜的分布。方法采用酶联免疫吸附测定法检测去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对结肠黏液分泌的影响;用免疫荧光组织化学方法观察黏蛋白2(mucin2,MUC2)及β肾上腺能受体在结肠黏膜的分布;实时定量PCR方法检测β肾上腺能受体在大肠结肠黏膜的表达;同时采用阿利新蓝/过碘酸雪夫染色方法检测黏液细胞在结肠黏膜的分布;使用激光共聚焦显微镜观察β2肾上腺能受体与MUC2在结肠黏液细胞的共存。结果去甲肾上腺素可刺激大鼠远端结肠黏膜的黏液释放增加,比对照组增加约247%。免疫荧光组织化学结果显示β1和β3肾上腺能受体在结肠黏膜有弱表达,β2肾上腺能受体为高表达。β1和β2肾上腺能受体mRNA表达相对量与免疫荧光组织化学一致。黏蛋白MUC2主要表达在结肠隐窝的黏液细胞内,且与β2肾上腺能受体有共存。结论β2肾上腺能受体与MUC2在结肠黏液细胞共存;去甲肾上腺素可促进结肠黏液分泌。

关键词：去甲肾上腺素肾上腺能β受体黏蛋白2 结肠