检索结果-南通市图书馆

ETEC K99-SIgA复合物制备及其增强肠道黏膜免疫应答的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

ETEC K99-SIgA复合物制备及其增强肠道黏膜免疫应答的研究

作者：陈小燕黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起新生仔猪和断奶仔猪高发病率和高死亡率的重要病原之一,其中ETEC K99是已发现的新生仔猪病例最多的一种。黏膜免疫为机体免受病原菌ETEC攻击及保持肠道稳态发挥着重要作用。SIgA作为黏膜免疫的核心免疫... 详细信息

产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起新生仔猪和断奶仔猪高发病率和高死亡率的重要病原之一,其中ETEC K99是已发现的新生仔猪病例最多的一种。黏膜免疫为机体免受病原菌ETEC攻击及保持肠道稳态发挥着重要作用。SIgA作为黏膜免疫的核心免疫球蛋白,具有阻止病原微生物黏附及免疫清除等作用。据文献报道,免疫复合物能够有效增强免疫应答,因此,本研究通过体外制备ETEC K99-SIgA免疫复合物,探究免疫复合物是否增强肠道黏膜免疫,从而更全面地认识SIgA在黏膜免疫应答中的复杂作用,为口服免疫复合物疫苗的设计奠定理论基础。本实验构建了pET-32a-K99/BL21原核表达载体,经1.2 m M的IPTG诱导6 h后,以Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化制备了重组蛋白K99;K99蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,制备鼠源K99多克隆抗体;以ETEC K99菌液口服感染BALB/c小鼠,获得含有特异性SIgA抗体的粪便上清,采用His pull-down方法制备ETEC K99-SIgA复合物,利用还原剂β巯基乙醇和SDS还原复合物后,Western blot鉴定制备的ETEC K99-SIgA复合物。结果表明重组蛋白K99在E.coli BL21中高效表达,纯化蛋白浓度约4.5 mg/m L;腹腔免疫后的小鼠血清能有效地与ETEC K99进行反应;ETEC K99菌液口服感染小鼠后,特异性SIgA抗体水平在感染后42 d达到高峰;鉴定正确的ETEC K99-SIgA复合物浓度约为2 mg/m L,为后续免疫学相关实验奠定物质基础。为了揭示ETEC K99-SIgA免疫复合物对激发黏膜免疫应答的影响,首先利用小肠袢试验检测K99-SIgA免疫复合物被肠道上皮细胞的什么细胞所摄取。然后建立M细胞体外培养模型,进一步揭示M细胞对K99-SIgA免疫复合物的摄取方式。最后以K99-SIgA复合物刺激DC细胞,探究其对DC成熟的影响;用ETEC K99-SIgA复合物刺激ETEC K99口服感染的小鼠脾淋巴细胞,采用ELISPOT检测细胞因子,CCK-8法检测脾T淋巴细胞增殖以及效应T细胞CTLL-2活性。小肠袢试验表明K99-SIgA免疫复合物主要由PP结M细胞摄取。采用抑制剂封闭相应的摄取通路,检测体外培养模型的M细胞摄取ETEC K99-SIgA复合物能力,结果表明K99-SIgA复合物主要以网格蛋白介导的方式被M细胞所摄取。K99-SIgA复合物能有效促进DC细胞成熟,从而增强其抗原呈递能力。ETEC K99-SIgA复合物刺激感染后的脾淋巴细胞,相比K99单独抗原组,能更有效地上调TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-5细胞因子分泌水平,促进小鼠脾T淋巴细胞及小鼠效应T细胞CTLL-2的增殖活化,揭示了ETEC K99-SIgA免疫复合物能有效地增强小鼠的黏膜免疫应答。本研究为免疫复合物口服疫苗的研制及应用提供了参考依据。

关键词：产肠毒素大肠杆菌 SIgA 免疫复合物黏膜免疫应答

黏膜上皮细胞:病毒侵染与机体免疫的初始交汇处

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生命科学 2016年第2期28卷 248-257页

作者：鄢慧民中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室黏膜免疫学科组武汉430071

黏膜上皮细胞构成了包括呼吸道、消化道、泌尿生殖道在内的一个广阔的黏膜界面。黏膜上皮细胞、免疫细胞、免疫分子共同组成黏膜相关淋巴组织,构成了一个完整的黏膜免疫防御系统。黏膜上皮细胞通常是病毒感染的初始靶细胞。大多数DNA和... 详细信息

黏膜上皮细胞构成了包括呼吸道、消化道、泌尿生殖道在内的一个广阔的黏膜界面。黏膜上皮细胞、免疫细胞、免疫分子共同组成黏膜相关淋巴组织,构成了一个完整的黏膜免疫防御系统。黏膜上皮细胞通常是病毒感染的初始靶细胞。大多数DNA和RNA病毒都能直接感染黏膜上皮细胞。黏膜上皮细胞在病毒复制过程中可通过各种模式识别受体感应病毒的病原相关分子模式,从而识别病毒,并启动抗病毒固有免疫应答。近10年来,巨噬细胞炎症小体和caspase-1信号通路激活及其相应的抗感染效应成为固有免疫研究一个热点。病原相关分子模式被巨噬细胞识别,启动形成不同类型的炎症小体,激活caspase-1信号通路,诱导炎性细胞因子IL-1β和IL-18产生,造成细胞焦亡。对巨噬细胞炎症小体的研究,加深了人们对固有免疫的理解,促进了免疫识别、免疫信号转导、免疫应答、免疫调节、免疫病理等各个方面的研究。与固有免疫细胞一样,黏膜上皮细胞具有自身特征性的模式识别受体表达和分布。黏膜上皮细胞通过模式识别受体识别病毒病原相关分子模式,并激活NF-κB信号通路,产生炎性细胞因子、I型和III型干扰素,实现快速的炎性应答和发挥抗病毒作用。黏膜上皮细胞的这种快速应答释放出的各类细胞因子共同招募、激活和协调固有免疫细胞发挥固有免疫应答,并进一步调节、诱导特异性免疫细胞产生特异性抗体和T细胞应答。可见,黏膜上皮细胞是病毒侵染与机体免疫的一个最初的重要交汇处。在这个初始交汇处,黏膜上皮细胞不仅对局部黏膜免疫应答起作用,而且对系统免疫应答起着决定性调节作用。然而,黏膜上皮细胞对病原相关分子模式的识别以及相关炎症通路的激活尚处于启蒙时期。黏膜上皮细胞与炎症小体的关系值得进一步研究。新发现的III型干扰素及其在黏膜上皮细胞的独特表达分布,以及其在固有免疫应答中的抗病毒功能近年逐渐得到关注,详细机制需深入研究。此外,黏膜上皮细胞还是黏膜免疫应答特异效应因子Ig A抗体分泌和发挥功能的平台。Ig A特异性抗病毒功能,尤其是Ig A独特的上皮细胞内中和病毒复制的功能机制值得进一步探讨。现将概述病毒入侵黏膜上皮细胞并起始病毒复制过程,以及黏膜上皮细胞识别病毒感染启动固有免疫应答,调节特异免疫应答的研究进展,并探讨部分研究的交叉前沿。

关键词：黏膜上皮细胞病毒感染模式识别受体病原相关分子模式固有免疫应答干扰素黏膜免疫应答 Ig A抗体抗病毒机制

鼠伤寒沙门氏菌多种全局调控基因突变株的构建及其免疫原性的比较

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

鼠伤寒沙门氏菌多种全局调控基因突变株的构建及其免疫原性的比较

作者：周吉春四川农业大学

学位级别：硕士

约90%的传染性疾病是病原体通过入侵机体局部黏膜引起的,黏膜成为机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线。黏膜疫苗不仅能在接种部位诱导分泌特异性抗体,还能同时引起系统性免疫应答,因此接种黏膜疫苗是预防和控制这类疾病的有效手段之一... 详细信息

约90%的传染性疾病是病原体通过入侵机体局部黏膜引起的,黏膜成为机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线。黏膜疫苗不仅能在接种部位诱导分泌特异性抗体,还能同时引起系统性免疫应答,因此接种黏膜疫苗是预防和控制这类疾病的有效手段之一。沙门菌是常见的黏膜病原体,主要经污染的食物或水感染人和动物。为预防和控制沙门菌引起的人兽共患病,对沙门菌疫苗的研究已持续了几十年。其中,基于鼠伤寒沙门菌的疫苗研究得最多,目前已鉴定的200多种鼠伤寒沙门菌血清亚型中,又以鼠伤寒沙门菌UK-1的减毒衍生物的免疫原性为佳。常用的用于致弱细菌毒力的方法是利用基因工程方法调控其重要基因的表达或将这些基因直接缺失。全局调控基因就属于沙门菌的一类非常重要的基因。以前的研究表明,将UK-1的某一全局调控基因缺失后,能使其毒力大大减弱,且保留着较强的免疫原性,能抵抗对UK-1的致死性感染。但UK-1各全局调控调控基因减毒株诱导系统性体液免疫应答和黏膜免疫应答的能力尚未见研究进行综合性的比较。基于此,本研究构建了△crp UK-1、 △envZ UK-1、△fis UK-1、△fur UK-1、△hilA UK-1、△mlc UK-1和△phoP UK-1等7株鼠伤寒沙门菌UK-1全局调控基因突变株,然后检测经口免疫小鼠后各突变株激发的血清IgG抗体水平以及唾液、阴道洗脱液和粪便中的分泌型IgA抗体水平,并分析比较了各突变株在小鼠体内诱导系统性体液免疫应答和局部黏膜免疫应答的能力。结果表明,不同的全局调控基因突变株诱导系统性体液免疫应答的能力及在不同黏膜部位诱导局部免疫应答的能力是不同的。在血液中,△fur、△envZ、 △mlc突变株能诱导较高水平的OMP特异性IgG抗体;△crp、△fur、△envZ、△phoP则能诱导产生较高水平的LPS特异性IgG抗体。在口腔内,以△envZ、△fur、△phoP诱导分泌的OMP特异性sIgA抗体水平为高;LPS特异性sIgA抗体水平则以△crp、 △fur、△phoP刺激分泌的较高。在阴道内,△crp、△fur诱导产生OMP特异性sIgA的能力较强;△crp、△fur、△phoP诱导产生LPS特异性sIgA抗体的能力较强。在直肠内,△crp、△envZ、△mlc突变株诱导分泌OMP特异性sIgA的能力较强;△crp、△envZ、 △mlc、△phoP刺激分泌LPS特异性sIgA的能力较强。尽管在不同部位诱导免疫应答的能力不同,但所有的突变株对野生型UK-1的致死性感染都提供了完全的保护作用且存活小鼠未表现出不健康的表观症状。总的来说,本研究为哪些基因突变应用到减毒沙门菌疫苗的构建以提高其在小鼠各部位尤其是局部黏膜部位诱导的免疫反应提供了基本的参考数据。

关键词：全局调控基因减毒鼠伤寒沙门菌黏膜免疫应答

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基因疫苗预防牙周炎的实验研究

中华口腔医学杂志 2005年第4期40卷 310-313页

作者：张凤秋杨连甲吴织芬第四军医大学口腔医学院牙周科第四军医大学口腔医学院口腔病理学教研室西安710032

目的将已构建的P.gingivaliskgpcd基因的真核重组表达质粒pcDNA3.1+/kgpcd作为基因疫苗,免疫SD大鼠并观察其在预防牙周炎中的作用。方法pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,采用间接ELISA法检测唾液中特异性抗体的水平,并经组... 详细信息

目的将已构建的P.gingivaliskgpcd基因的真核重组表达质粒pcDNA3.1+/kgpcd作为基因疫苗,免疫SD大鼠并观察其在预防牙周炎中的作用。方法pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,采用间接ELISA法检测唾液中特异性抗体的水平,并经组织化学染色观察免疫对SD大鼠牙周炎的保护情况。结果重组质粒pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,可诱导机体产生高水平的唾液中抗KGPcdsIgA抗体,显著高于对照组,并且实验组牙槽骨的破坏程度显著低于对照组。结论颌下腺靶向注射免疫可引起有效的黏膜免疫应答,KGPcd作为有效的免疫原产生的抗体对P.gingivali引起的牙周炎可起到保护作用。

关键词：牙周炎实验研究疫苗预防 pcDNA3 ELISA法检测 SD大鼠重组表达质粒注射免疫 sIgA抗体黏膜免疫应答特异性抗体颌下腺基因疫苗 cd基因染色观察组织化学重组质粒保护作用对照组靶向高水平牙槽骨实验组免疫原

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

维生素A缺乏影响肠道屏障功能的研究进展

生命科学 2012年第1期24卷 32-36页

作者：刘霞李廷玉陈洁 f重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室儿科学重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014

维生素A(vitamin A,VA)在维持肠道黏膜上皮屏障功能的完整性、调节黏膜免疫反应以及抗感染中起到重要的作用。肠道相关树突状细胞(dendritic cells,DCs)可表达合成视黄酸(retinoic acid,RA)所必需的酶(retinal dehydrogenase,RALDH),合... 详细信息

维生素A(vitamin A,VA)在维持肠道黏膜上皮屏障功能的完整性、调节黏膜免疫反应以及抗感染中起到重要的作用。肠道相关树突状细胞(dendritic cells,DCs)可表达合成视黄酸(retinoic acid,RA)所必需的酶(retinal dehydrogenase,RALDH),合成RA。RA通过诱导T、B细胞产生整合素α4β7、CCR9,使其归巢到肠道,并提高肠道黏膜sIgA的水平。RA可增强天然CD4+T细胞分化为Foxp3+Treg细胞,抑制Th17细胞的生成。当机体VA缺乏时可降低肠道屏障功能,下调肠道黏膜免疫反应,增加肠道感染性疾病的易感性,容易导致腹泻。针对维生素A在肠道屏障功能的调节作用作一简要概述。

关键词：维生素A 肠道屏障功能黏膜免疫应答

粪便中脊髓灰质炎病毒IgA的ELISA检测方法比较

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2010年第8期30卷 779-780页

作者：杨卉娟马绍辉陈俊英施海晶孙强明李琦涵中国医学科学院医学生物学研究所 650118

脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型引起的传播广泛且危害极大的急性传染病。黏膜免疫在抗脊髓灰质炎免疫应答过程中颇为重要。局部黏膜分泌物（如唾液、肠液）中特异性IgA是机体接种口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV）或者自然暴... 详细信息

脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型引起的传播广泛且危害极大的急性传染病。黏膜免疫在抗脊髓灰质炎免疫应答过程中颇为重要。局部黏膜分泌物（如唾液、肠液）中特异性IgA是机体接种口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV）或者自然暴露于脊灰病毒的一种重要免疫标志，同时也可作为评价黏膜免疫应答的主要指标。

关键词：脊髓灰质炎病毒特异性IgA ELISA检测口服脊髓灰质炎减毒活疫苗黏膜免疫应答粪便急性传染病炎免疫应答

实验性SARS-CoV灭活疫苗对恒河猴的免疫原性与安全性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第4期25卷 302-306页

作者：钟琼杨占秋周俊王薇侯炜朱润庆唐志娇王勇鲜巧阳武汉大学医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室 430071 武汉大学医学院病理学教研室武汉大学实验动物中心

目的　利用恒河猴评价实验性SARS冠状病毒灭活疫苗免疫原性与安全性。方法　动物免疫分3组,分别为肌肉注射0.5μg、5μg、50μg疫苗组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,同时设超大剂量(5000μg)观察疫苗安全性,并于初次免疫后7 d再次免疫,监... 详细信息

目的　利用恒河猴评价实验性SARS冠状病毒灭活疫苗免疫原性与安全性。方法　动物免疫分3组,分别为肌肉注射0.5μg、5μg、50μg疫苗组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,同时设超大剂量(5000μg)观察疫苗安全性,并于初次免疫后7 d再次免疫,监测免疫前后动物体液免疫、黏膜免疫及血清细胞因子变化,观察临床症状及生化指标。结果　0.5μg和5μg剂量组可诱导部分免疫应答,50μg剂量组则能诱导针对SARS CoV的特异性免疫应答,且各免疫组动物均未出现不良反应。结论SARS CoV灭活疫苗在恒河猴体内能有效诱导针对SARS CoV感染的体液和黏膜免疫应答并且安全性较好。

关键词：灭活疫苗恒河猴实验性安全性研究 SARS-CoV感染特异性免疫应答疫苗免疫原性磷酸盐缓冲液细胞因子变化黏膜免疫应答疫苗安全性 5μg 病毒灭活动物免疫肌肉注射超大剂量体液免疫免疫前后生化指标临床症状

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细菌菌蜕疫苗的研究进展

中国人兽共患病学报 2007年第5期23卷 504-506,511页

作者：密金玲聂奎西南大学动物科技学院重庆400716

疫苗的诞生为人类和动物疾病的防治带来了革命性的变化,据其研制方法和生产技术可分为常规疫苗和新型疫苗。常规疫苗包括灭活苗和弱毒苗。传统的灭活苗是通过理化方法将病原菌灭活而获得,但在灭活病原的同时也可能使其抗原结构发生改变... 详细信息

疫苗的诞生为人类和动物疾病的防治带来了革命性的变化,据其研制方法和生产技术可分为常规疫苗和新型疫苗。常规疫苗包括灭活苗和弱毒苗。传统的灭活苗是通过理化方法将病原菌灭活而获得,但在灭活病原的同时也可能使其抗原结构发生改变,从而导致免疫原性弱;灭活苗另一重要缺陷是仅能诱发体液免疫应答,不产生或仅产生轻微的细胞免疫应答和局部黏膜免疫应答。而弱毒苗虽能同时诱导细胞和体液免疫,却存在返毒和与野毒株发生重组导致新毒株出现的可能,[第一段]

关键词：新型疫苗体液免疫应答细胞免疫应答细菌黏膜免疫应答动物疾病生产技术理化方法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

OPV诱导恒河猴黏膜免疫应答研究

医学研究杂志 2011年第2期40卷 33-37页

作者：杨卉娟陈俊英和占龙孙强明施海晶李华马绍辉中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

目的评价OPV诱导恒河猴黏膜免疫应答效果。方法将20只恒河猴随机分成3个实验组(第1组:OPV+OPV+OPV,第2组:IPV+IPV+OPV+OPV,第3组:IPV+IPV+OPV)和1个对照组,采集不同时间恒河猴粪便和唾液,检测粪便和唾液中脊髓灰质炎病毒特异性IgA;通过... 详细信息

目的评价OPV诱导恒河猴黏膜免疫应答效果。方法将20只恒河猴随机分成3个实验组(第1组:OPV+OPV+OPV,第2组:IPV+IPV+OPV+OPV,第3组:IPV+IPV+OPV)和1个对照组,采集不同时间恒河猴粪便和唾液,检测粪便和唾液中脊髓灰质炎病毒特异性IgA;通过细胞培养和中和试验对口服OPV后恒河猴粪便排毒状况进行分析。结果粪便和唾液中IgA效价随着接种剂数增加而增高,3个组全程免疫后30天粪便样品中IgA效价第1组最高,第2组次之,第3组最低,3组间两两比较有统计学差异(方差分析,P黏膜免疫应答,口服OPV后3个型疫苗病毒均能在肠道增殖。

关键词： OPV 黏膜免疫应答脊髓灰质炎病毒IgA 疫苗病毒排泄