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基于Sirt1/Foxo1通路探讨黄芪复方颗粒抗高糖诱导肾系膜细胞衰老的作用和机制研究

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基于Sirt1/Foxo1通路探讨黄芪复方颗粒抗高糖诱导肾系膜细胞衰老...

作者：孙嘉泽辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过体外实验,观察黄芪复方颗粒(Huang Qi compound granules,HQCGs)对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞(Rat mesangial cells,RMCs)衰老的作用,探讨HQCGs抗高糖诱导RMCs衰老的作用机制。材料与方法:依据血清药理学制备HQCGs含药血清... 详细信息

目的:通过体外实验,观察黄芪复方颗粒(Huang Qi compound granules,HQCGs)对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞(Rat mesangial cells,RMCs)衰老的作用,探讨HQCGs抗高糖诱导RMCs衰老的作用机制。材料与方法:依据血清药理学制备HQCGs含药血清。采用CCK-8法检测RMCs增殖活性。根据细胞形态学变化、SA-β-gal染色阳性率、细胞周期分布评估RMCs衰老。采用荧光探针DCFH-DA检测RMCs内ROS水平。采用Western blot检测Sirt1/Foxo1信号转导通路相关蛋白表达。加入Sirt1特异性抑制剂EX527抑制Sirt1蛋白表达后,检测相关蛋白表达、SA-β-gal染色阳性率、ROS水平。结果***-8法检测细胞增殖活性正常组细胞增殖活性随时间延长而升高(P0.05)。随时间延长,在48h-72h,与高糖组比较,HQCGs组细胞活性明显升高(P0.05)。2.细胞形态学变化正常的RMCs呈梭形或星形,立体,单核,边界清晰。衰老的RMCs体积增大,失去原有形状,扁平,细胞内颗粒增多,双核、多型核细胞增多,边界不清。在24h,各组间细胞形态未见明显差异。在48h-72h,与正常组比较,高糖组细胞体积增大,失去原有形状,扁平,细胞内颗粒增多,双核、多型核细胞增多,边界不清,上述衰老特征随时间延长而加重。使用HQCGs含药血清干预后,细胞体积缩小,恢复梭形或星形,形态立体,细胞内颗粒减少,单核细胞增多,双核、多型核细胞减少,边界清晰。选取细胞状态更为稳定、可控的48h时间点,观察不同浓度HQCGs对细胞形态学改变的影响。发现,对比高糖组,低、中剂量组细胞形态趋于正常,高剂量组细胞形态则与高糖组无明显差异。***-β-gal染色阳性率正常组细胞β-gal表达较少,但仍可观察到其染色阳性细胞数随时间延长而缓升高(P0.05)。在48h-72h,对比正常组,高糖组细胞衰老染色阳性率随时间延长而明显升高(P0.05)。4.细胞周期分布在48h,与正常组比较,高糖组停滞于G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M细胞明显减少(P0.05)。***-DA检测细胞内ROS水平实验发现,正常组细胞内ROS水平随时间延长而缓慢升高(P<0.01)。高糖作用于RMCs 24h、48h、72h,细胞内ROS水平随时间延长而显著升高(P<0.01)。对比高糖组,HQCGs作用于RMCs 24h和72h,细胞内ROS水平均有下降(P<0.05);在48h,HQCGs组细胞内ROS水平明显下降。在48h,与高糖组比较,HQCGs低、中剂量组细胞内ROS水平随浓度升高而下降(P<0.05);高剂量组细胞内ROS水平高于高糖组(P<0.01)。*** blot检测Sirt1/Foxo1信号转导通路相关蛋白表达变化选取48h、中剂量HQCGs作为最佳作用时间、最佳作用浓度,检测Sirt1/Foxo1信号转导通路相关蛋白表达。在48h,与正常组比较,高糖组细胞内Sirt1、Foxo1蛋白表达降低(P<0.01)。与高糖组比较,HQCGs中剂量组细胞Sirt1、Foxo1蛋白表达升高(P<0.05)。7.加入Sirt1特异性抑制剂EX527为进一步验证HQCGs对RMCs作用与Sirt1/Foxo1信号转导通路的关系,加入Sirt1特异性抑制剂EX527抑制Sirt1蛋白表达。与HQCGs中剂量组比较,HQCGs中剂量组+1

关键词：黄芪复方颗粒 Sirt1/Foxo1 抗衰老肾小球系膜细胞糖尿病肾病

基于氧化应激探讨黄芪复方颗粒抗高糖诱导肾系膜细胞衰老的作用及机制研究

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基于氧化应激探讨黄芪复方颗粒抗高糖诱导肾系膜细胞衰老的作用及...

作者：张晓彤辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:1通过体外实验,探究黄芪复方颗粒抗高糖诱导肾系膜细胞衰老是否与发挥其延缓线粒体损伤,抗氧化应激作用有关。2通过观察黄芪复方颗粒治疗早期糖尿病肾病(脾肾两虚兼血瘀型)的临床效果,分析黄芪复方颗粒治疗早期糖尿病肾病(脾肾两... 详细信息

目的:1通过体外实验,探究黄芪复方颗粒抗高糖诱导肾系膜细胞衰老是否与发挥其延缓线粒体损伤,抗氧化应激作用有关。2通过观察黄芪复方颗粒治疗早期糖尿病肾病(脾肾两虚兼血瘀型)的临床效果,分析黄芪复方颗粒治疗早期糖尿病肾病(脾肾两虚兼血瘀型)的疗效以及减少蛋白尿的临床机制,以期为早期糖尿病肾病的治疗及减少蛋白尿提供治疗方法及思路。材料与方法:1利用SPF级8周龄Wistar雄性大鼠制备药物血清;将大鼠肾小球系膜细胞(RMC)分为5组,即对照组(5.5mmol/L葡萄糖+20%正常血清组)、模型组(25mmol/L葡萄糖+20%正常血清组)、低浓度组(25mmol/L葡萄糖+5%药物血清+15%正常血清组)、中浓度组(25mmol/L葡萄糖+10%药物血清+10%正常血清组)及高浓度组(25mmol/L葡萄糖+20%药物血清)通过细胞增殖与毒性检测试剂(Cell Counting Kit-8,CCK8)检测高糖对RMC活性的影响;通过JC-1染色检测高糖及含药血清对RMC线粒体膜电位及线粒体损伤的影响;利用多功能酶标仪检测活性氧(ROS)的平均荧光强度,观察高糖及含药血清对RMC氧化应激的影响;通过检测β-gal染色阳性细胞数观察高糖及含药血清对RMC衰老的影响。2选取来自辽宁中医嘉禾医院综合内科的门诊病例,收集的病例均需要符合纳入标准,共收集50例门诊病例,按1:1的比例随机分为对照组和治疗组。对照组予西药常规糖尿病肾病治疗,而治疗组则以常规西药治疗为基础予黄芪复方颗粒口服,经过8周观察、将两组治疗前后的中症状积分及血糖、UACR等相关实验室指标进行比较,收集数据并应用SPSS25.0进行分析,以评价黄芪复方颗粒对早期糖尿病肾病(脾肾两虚兼血瘀型)的临床疗效以及对尿蛋白及血糖的影响。结果:1高糖环境下可诱导大鼠肾小球系膜细胞形态发生改变,于24h及72h时细胞活力下降,48h时细胞呈异常增殖现象。2高糖刺激可使RMC线粒体产过量ROS,且于48h时达最大值,细胞产生ROS水平可进一步反应其发生氧化应激的程度,因此本实验可说明高糖环境下可诱导RMC发生氧化应激反应,且于48h时氧化应激程度最为明显。3高糖刺激可通过下调线粒体膜电位水平,破坏线粒体的结构及功能,使RMC在高糖环境下产生更多的ROS,从而诱导RMC发生衰老。因此,本实验结果表明,高糖可通过使细胞线粒体的膜电位水平下降,结构及功能遭到破坏,且于48h时,线粒体损伤程度最为显著,从而进一步加强高糖诱导RMC发生氧化应激反应的水平,诱导RMC发生衰老,且于48h时衰老程度最为明显。4黄芪复方颗粒药物血清可抑制高糖环境下RMC线粒体ROS的产生,从而发挥其抗氧化应激作用,且中浓度组于48h时抗氧化应激作用最为明显。5黄芪复方颗粒药物血清可通过使线粒体的膜电位上调,改善线粒体的损伤,延缓高糖环境下RMC的氧化应激水平,从而延缓高糖诱导RMC的衰老进程,且中浓度的药物血清于48h时延缓RMC的氧化应激反应及衰老进程可发挥最大的效应。6黄芪复方颗粒可显著改善患者的中医症状;对患者血糖水平的影响:虽可明显起到降低血糖作用,但与对照组相比,对FPG及2h PG的降低无显著性优势;对患者蛋白尿的影响:可明显降低患者UACR,且与对照组相比,有绝对性的优势。因此,黄芪复方颗粒对于改善患者的中医症状,降低UACR具有一定的优势。结论:1高糖环境下可诱导大鼠肾小球系膜细胞形态发生改变,于24h及72h时细胞活力下降,48h时细胞呈异常增殖现象。2高糖可诱导RMC发生氧化应激反应,产生大量的ROS,且于48h时氧化应激反应最为明显。3黄芪复方颗粒中浓度组干预48h时其发挥抗氧化应激作用最为显著。4黄芪复方颗粒中浓度组干预48h时其发挥延缓衰老的作用最为显著。5高糖可诱导线粒体膜电位下降,而黄芪复方颗粒中浓度组干预48h可使线粒体膜电位显著上调。6黄芪复方颗粒治疗早期糖尿病肾病(脾肾两虚兼血瘀型)可显著改善患者的中医症状,降低患者UACR,减少蛋白尿,有效延缓病情向终末期肾病进展的速度。

关键词：黄芪复方颗粒糖尿病肾病氧化应激衰老

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黄芪复方颗粒治疗重症肌无力的临床观察

实用中医内科杂志 2011年第5期25卷 53-55页

作者：焦健乔文军辽宁中医药大学辽宁沈阳110032

[目的]观察黄芪复方颗粒治疗重症肌无力的临床疗效及其安全性,并探讨其作用机理。[方法]将52例符合OssermanlIa、Ⅱb型重症肌无力患者,随机分为观察组27例,对照组25例,观察组采用黄芪复方颗粒联合溴吡斯的明片治疗;对照组采用强的松联... 详细信息

[目的]观察黄芪复方颗粒治疗重症肌无力的临床疗效及其安全性,并探讨其作用机理。[方法]将52例符合OssermanlIa、Ⅱb型重症肌无力患者,随机分为观察组27例,对照组25例,观察组采用黄芪复方颗粒联合溴吡斯的明片治疗;对照组采用强的松联合溴吡斯的明片治疗,疗程3个月,观察两组的临床绝对和相对评分及对体液免疫指标的影响。[结果]观察组总有效率为85.2%,对照组总有效率为80%,两组相比差异无显著性(P>0.05)。经黄芪复方颗粒联合溴吡斯的明片治疗后,观察组临床绝对评分增高,血清AChRAb滴度水平明显降低,相对于治疗前有显著差异(P黄芪复方颗粒联合溴吡斯的明片可明显改善重症肌无力患者的临床症状,降低血清AchR抗体滴度,发生肌无力加重的机率较对照组明显减少,且无明显副作用,是一种较好的治疗方法。

关键词：重症肌无力黄芪复方颗粒溴吡斯的明

日粮中添加黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官组织结构及肠道结构的影响

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山西中医药大学学报 2020年第5期21卷 335-337,341页

作者：梁锐王佳敏崔小珍王延东王颖莉山西中医药大学山西晋中030619 山西省农业科学院饲料兽药研究所山西太原030032 华南农业大学农学院广东广州510642

目的:探究黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官组织结构和肠道结构的影响。方法:选用100只1 d龄罗斯308肉仔鸡随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,实验组于第21天开始在基础日粮中分别添加0.87%、1.74%、3.48%黄芪复方颗粒,实验周期42 d,测定黄芪... 详细信息

目的:探究黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官组织结构和肠道结构的影响。方法:选用100只1 d龄罗斯308肉仔鸡随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,实验组于第21天开始在基础日粮中分别添加0.87%、1.74%、3.48%黄芪复方颗粒,实验周期42 d,测定黄芪复方颗粒对肉鸡法氏囊、脾脏和十二指肠组织结构的影响。结果:与对照组比较,各实验组法氏囊淋巴滤泡的面积增加,脾脏的脾小结面积、动脉周围淋巴鞘直径增加,十二指肠的肠壁厚度及绒毛高度增加,差异具有统计学意义(P黄芪复方颗粒可有效促进畜禽生长发育,促进消化功能,促进免疫器官发育。

关键词：黄芪复方颗粒肉鸡法氏囊脾脏十二指肠

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加用黄芪复方颗粒治疗重症肌无力临床观察

广西中医药大学学报 2016年第1期19卷 13-15页

作者：鲍波张静生乔文军辽宁中医药大学第一临床学院辽宁中医药大学附属医院辽宁沈阳110032

[目的]观察加用黄芪复方颗粒治疗重症肌无力的临床疗效。[方法]将241例重症肌无力患者随机分为2组,其中治疗组121例给予口服黄芪复方颗粒合溴吡斯的明,对照组120例给予口服安慰剂合溴吡斯的明。治疗12周,观察比较两组疗效。[结果]两组... 详细信息

[目的]观察加用黄芪复方颗粒治疗重症肌无力的临床疗效。[方法]将241例重症肌无力患者随机分为2组,其中治疗组121例给予口服黄芪复方颗粒合溴吡斯的明,对照组120例给予口服安慰剂合溴吡斯的明。治疗12周,观察比较两组疗效。[结果]两组治疗后临床绝对评分、中医症状总评分均较治疗前降低(P黄芪复方颗粒治疗重症肌无力具有良好疗效。

关键词：重症肌无力脾肾亏虚证黄芪复方颗粒补脾益肾

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中医药治疗重症肌无力简况

实用中医内科杂志 2018年第7期32卷 75-77页

作者：李美娟陈少玫福建中医药大学第一临床医学院福州350000 福建省厦门市医药研究所办公室厦门361000

重症肌无力归属为"痿证""睑废""大气下陷"等范畴,"五脏使人痿",分为"痿蹙""脉痿""筋痿""肉痿""骨痿"等,以脾胃虚损为主,兼有肝肾气血亏虚或湿热、风邪等外邪侵犯;病位在筋脉肌肉,根本在于五脏虚损,以脾胃、肝、肾等脏腑最为常见;病性以... 详细信息

重症肌无力归属为"痿证""睑废""大气下陷"等范畴,"五脏使人痿",分为"痿蹙""脉痿""筋痿""肉痿""骨痿"等,以脾胃虚损为主,兼有肝肾气血亏虚或湿热、风邪等外邪侵犯;病位在筋脉肌肉,根本在于五脏虚损,以脾胃、肝、肾等脏腑最为常见;病性以热证、虚证为多,以虚为本。扶正补虚,兼以祛邪,"治痿独取阳明",古方补中益气汤、二妙汤等;自拟方有复肌宁汤、滋肾调肝汤;中成药强肌健力饮、黄芪复方颗粒;其它疗法如针灸、温针、电针、隔物灸等,都有良好的效果。经典名方运用、辨证分型、疗效标准无统一规范,自拟方缺乏严格对照和统计分析,中成药方药固定、治疗证型单一,中医外治法接受度高,疗效与操作手法、临床经验有关,有待系统性规范和拓展。

关键词：重症肌无力痿证睑废大气下陷病因病机脾胃虚损气血亏虚五脏虚损热证虚证中医治疗扶正补虚补中益气汤二妙汤复肌宁汤滋肾调肝汤强肌健力饮黄芪复方颗粒针灸温针电针隔物灸