检索结果-南通市图书馆

黄瓜细菌性角斑病菌和多主棒孢菌PCR检测技术的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黄瓜细菌性角斑病菌和多主棒孢菌PCR检测技术的建立

作者：陈璐中国农业科学院

学位级别：硕士

丁香假单胞流泪致病变种（Pseudomonas syringae pv. lachrymans）、多主棒孢菌（Corynesporacassiicola）是两类重要的蔬菜种传病原菌，分别引起黄瓜细菌性角斑病和棒孢叶斑病，造成严重的经济损失。目前两种病原菌分子检测技术较少，... 详细信息

丁香假单胞流泪致病变种（Pseudomonas syringae pv. lachrymans）、多主棒孢菌（Corynesporacassiicola）是两类重要的蔬菜种传病原菌，分别引起黄瓜细菌性角斑病和棒孢叶斑病，造成严重的经济损失。目前两种病原菌分子检测技术较少，且尚未见到两种病原菌荧光定量PCR检测技术的报道。本论文针对以上两种重要种传病原菌检测技术缺乏的问题，开展相关PCR检测技术的研究。主要研究成果如下：1、建立了黄瓜细菌性角斑病菌（P. syringae pv. lachrymans）荧光定量PCR检测体系。通过系统分析丁香假单胞菌种（P. syringae）下不同致病变种的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，gap1）基因序列差异，设计黄瓜细菌性角斑病菌特异性引物Pslgap1-F/Pslgap1-R，构建荧光定量PCR检测技术。该技术复现性良好，检测灵敏度为2.6×10-2fg·μL-1质粒DNA。该技术可定量检测出田间发病植株叶片中病原菌带菌量，人工模拟病种带菌量检测下限的对应接种浓度为100CFU/mL。2、建立了活性染料单叠氮丙啶（Propidium monoazide，PMA）结合荧光定量PCR检测黄瓜细菌性角斑病菌活细胞的技术。通过PMA光照时间以及PMA浓度的筛选，筛选出可以完全抑制待测样本中死细胞扩增的PMA浓度为20μM，以及可以保证混合体系中未发生反应的剩余PMA失去光化学活性的光照时间为10min。利用该技术检测不同比例的黄瓜细菌性角斑病菌活细胞，检测结果与混合比例一致。3、建立了黄瓜寄主上多主棒孢菌（C. cassiicola）PCR检测体系。根据黄瓜多主棒孢菌与其他主要真菌病原菌actin基因序列差异，设计特异性引物Caa5F/Caa5R，建立黄瓜多主棒孢菌的PCR检测技术。该技术检测灵敏性为4pg· μL-1DNA，并可从接种后发病的黄瓜叶片总DNA中检测到160bp的特异条带。该引物的PCR检测技术灵敏性较高，可直接检测植株总DNA，无需病原菌的分离培养，适用于对黄瓜棒孢叶斑病特异、快速的检测。4、建立了多主棒孢菌（C. cassiicola）荧光定量PCR检测体系。根据33种不同寄主上多主棒孢菌与其他主要真菌病原菌ga4基因序列差异，设计多主棒孢菌的特异性引物ga4F1/ga4R1，建立多主棒孢菌的荧光定量PCR检测技术。该技术检测灵敏性为0.5fg· μL-1DNA，可从自然发病的黄瓜叶片总DNA中对多主棒孢菌定量检测，人工模拟病种带菌量检测下限的对应接种浓度为10CFU/mL。本论文在国内外首次建立了黄瓜细菌性角斑病菌（P. syringae pv. lachrymans）和多主棒孢菌（C. cassiicola）的荧光定量PCR检测技术，为研究上述病害的侵染来源及病害的早期田间病情预警提供新的技术支持。

关键词：黄瓜细菌性角斑病菌多主棒孢菌 PCR检测

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

应用PCR方法快速检测黄瓜细菌性角斑病菌

植物检疫 2011年第6期25卷 29-32页

作者：王哲陈青田茜李志红朱水芳赵文军中国农业大学农学与生物技术学院北京100193 中国检验检疫科学研究院厦门出入境检验检疫局

黄瓜细菌性角斑病是黄瓜上的一种重要细菌病害,其病原为丁香假单胞菌黄瓜致病变种(Pseudomonas syringae ***),目前未见到该病害特异性PCR检测方法的报道。通过分析丁香假单胞菌(***)不同致病变种glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogen... 详细信息

黄瓜细菌性角斑病是黄瓜上的一种重要细菌病害,其病原为丁香假单胞菌黄瓜致病变种(Pseudomonas syringae ***),目前未见到该病害特异性PCR检测方法的报道。通过分析丁香假单胞菌(***)不同致病变种glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 1(gap1)基因序列设计得到一对Psl特异性PCR引物。利用该引物对丁香假单胞菌不同致病变种、假单胞菌属其他种及其他属的共46株菌株进行了PCR扩增,结果表明,所有不同来源的12株黄瓜细菌性角斑病菌均得到179bp的目标片段,而所有其他参试菌株均无扩增条带,PCR检测的灵敏度为7.5×103cfu/mL。利用该方法可从接种后发病的黄瓜叶片总DNA中检测到特异条带,而健康叶片无条带。该引物的PCR检测方法可直接用于植株总DNA的检测,无需进行病原菌的分离培养,快速简便,适用于进出境检验检疫及种苗健康检测等。

关键词：黄瓜细菌性角斑病菌 PCR 检测

快速检测黄瓜细菌性角斑病菌的间接ELISA法优化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

沈阳农业大学学报 2014年第2期45卷 213-216页

作者：孙艳秋赵奎华刘长远曹远银沈阳农业大学植物保护学院沈阳110161 辽宁省农业科学院植物保护研究所沈阳110161

采用黄瓜细菌性角斑病菌作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立较优黄瓜细菌性角斑病菌间接酶联免疫吸附分析(ELISA)检测方法。通过对抗原包被浓度和抗体稀释浓度、封闭液和封闭时间、抗体温育时间等的优化,确定ELISA法最低检测限。结... 详细信息

采用黄瓜细菌性角斑病菌作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立较优黄瓜细菌性角斑病菌间接酶联免疫吸附分析(ELISA)检测方法。通过对抗原包被浓度和抗体稀释浓度、封闭液和封闭时间、抗体温育时间等的优化,确定ELISA法最低检测限。结果表明:抗原的较优包被浓度为106cfu·mL-1,抗体的较优工作浓度为1∶4000,以5%胎牛血清作为封闭液,在37℃下封闭1.5h,加入抗体温育1.5h是间接ELISA法的较优反应条件,方法的检测限为105cfu·mL-1。对田间采集的病叶进行检测表明,该方法可准确检测出黄瓜细菌性角斑病菌,可用于田间黄瓜细菌性角斑病的快速诊断。

关键词：黄瓜细菌性角斑病菌酶联免疫吸附分析抗体抗原浓度封闭液

春雷霉素与叶枯唑对黄瓜细菌性角斑病菌的联合毒力

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

山东农业科学 2016年第9期48卷 103-106页

作者：姜珊珊辛志梅吴斌张眉王升吉辛相启山东省农业科学院植物保护研究所山东济南250100

为明确春雷霉素(Kasugamycin)与叶枯唑(Bismerthiazol)混配对黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringe ***)的增效作用及最佳配比,采用浑浊度法测定了春雷霉素与叶枯唑混配对黄瓜细菌性角斑病菌的毒力。结果表明:春雷霉素、叶枯唑对黄... 详细信息

为明确春雷霉素(Kasugamycin)与叶枯唑(Bismerthiazol)混配对黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringe ***)的增效作用及最佳配比,采用浑浊度法测定了春雷霉素与叶枯唑混配对黄瓜细菌性角斑病菌的毒力。结果表明:春雷霉素、叶枯唑对黄瓜细菌性角斑病菌的EC50分别为8.739、39.227mg·L-1,春雷霉素对黄瓜细菌性角斑病菌的室内生物活性明显高于叶枯唑;春雷霉素与叶枯唑混配对黄瓜细菌性角斑病菌表现为增效作用,5个配比中,1∶5配比的SR为1.71,增效作用最明显。

关键词：春雷霉素叶枯唑黄瓜细菌性角斑病菌联合毒力增效作用

三重PCR检测黄瓜靶斑病菌、炭疽病菌和细菌性角斑病菌

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科学 2016年第16期49卷 3119-3129页

作者：高士刚曾蓉徐丽慧罗金燕陈磊戴富明上海市农业科学院生态环境保护研究所上海市设施园艺重点实验室上海市农业技术推广服务中心

【目的】开发一种可同时检测黄瓜靶斑病菌(Corynespora cassiicola)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)和黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringae ***)的三重PCR快速检测方法。【方法】根据ITS或16S r DNA序列分别设计黄瓜靶... 详细信息

【目的】开发一种可同时检测黄瓜靶斑病菌(Corynespora cassiicola)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)和黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringae ***)的三重PCR快速检测方法。【方法】根据ITS或16S r DNA序列分别设计黄瓜靶斑病原菌、黄瓜炭疽病菌和黄瓜细菌性角斑病菌特异性检测引物;通过鉴定引物的特异性,筛选可在目标菌株中扩增出特异片段的特异引物;选择可以组合的3种病原菌特异性引物进行三重PCR,对引物浓度、退火温度、延伸时间和循环数分别进行优化,优化三重PCR体系。【结果】针对黄瓜靶斑病菌、黄瓜炭疽病菌和黄瓜细菌性角斑病菌分别设计出5对、7对和6对特异性引物,其中引物CC4F/CC4R和CC5F/CC5R可特异扩增黄瓜靶斑病菌ITS,引物CL1F/CL1R、CL2F/CL2R、CL3F/CL3R、CL3F/CL4R、CL3F/CL5R、CL3F/CL6R和CL3F/CL7R可特异扩增黄瓜炭疽病菌ITS,引物PS3F/PS4R和PS4F/PS4R可特异扩增黄瓜细菌性角斑病菌16S rDNA。引物CC5F/CC5R、CL3F/5R和PS3F/4R扩增片段长度分别为370、275和698 bp,其混合扩增产物可在3%琼脂糖凝胶上得到充分分离,这3对引物选择作为三重PCR引物。在三重PCR反应体系中,当引物CC5F/CC5R、CL3F/5R和PS3F/4R的终浓度分别为0.16、0.4和0.16μmol·L-1时,3个目的片段能同时得到有效扩增;当退火温度大于65℃时,部分目的片段不能有效扩增。最终建立并验证了适合上述3种黄瓜主要病原菌的三重PCR检测体系,即25μL PCR反应体系中含有12.5μL 2×HiffTMPCR Master Mix(With Dye)、0.16μmol·L-1CC5F/CC5R、0.4μmol·L-1CL3F/CL5R、0.16μmol·L-1PS3F/PS4R。反应程序:95℃预变性3 min;95℃变性30 s,65℃退火30s,72℃延伸2 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。【结论】建立的三重PCR方法能够快速检测田间采集的黄瓜发病叶片中的黄瓜靶斑病菌、黄瓜炭疽病菌和黄瓜细菌性角斑病菌,灵敏度均可达到0.4 pg·μL-1。

关键词：黄瓜靶斑病菌黄瓜炭疽病菌黄瓜细菌性角斑病菌分子检测三重PCR

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

黄瓜细菌性角斑病的分子检测

中国农学通报 2012年第25期28卷 150-153页

作者：王平樊金娟刘长远赵奎华梁春浩沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161 辽宁省农业科学院植物保护研究所沈阳110161

探索黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringaepv.)的分子检测技术,为快速、准确鉴定和检测提供技术和方法。根据丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病型病菌与其他黄瓜病原菌核糖体基因转录间隔区(16S-23S Ribosomal DNA Intergenic Spacer,I... 详细信息

探索黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringaepv.)的分子检测技术,为快速、准确鉴定和检测提供技术和方法。根据丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病型病菌与其他黄瓜病原菌核糖体基因转录间隔区(16S-23S Ribosomal DNA Intergenic Spacer,ITS)序列间的差异,设计特异性引物PLf1/PLr2(PLf1:5'-ATA AGG GTG AGG TCG GCA GTT-3',PLr2:5'-CTC GTC TTT CAT CGC CTT TG-3')。引物PLf1/PLr2可从丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病型病菌中增出1条473bp的条带,将黄瓜细菌性角斑病菌和其他菌种分开。建立的黄瓜细菌性角斑病分子检测的方法可用于该病害的快速分子检测,可直接对黄瓜叶片汁液进行病原菌检测,并且可在接种后病症发生前72h内检测到病原菌。

关键词：黄瓜细菌性角斑病菌核糖体基因间隔序列分子检测

17种噻唑烷酮类化合物对几种植物病原菌的抑制作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

17种噻唑烷酮类化合物对几种植物病原菌的抑制作用