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黄热病毒保护性抗体研究进展

军事医学 2024年

作者：索星星迟航邓永强韩晓东内蒙古农业大学生命科学学院军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室

黄热病毒（YFV）是世界上最重要的蚊媒黄病毒之一，每年造成约20万例感染和3万例死亡，严重威胁人民健康和经济发展。目前，临床上尚无批准的YFV特异性治疗药物。抗体药物安全性高、靶向性强、治疗显著，是病毒性传染病预防和治疗的有... 详细信息

黄热病毒（YFV）是世界上最重要的蚊媒黄病毒之一，每年造成约20万例感染和3万例死亡，严重威胁人民健康和经济发展。目前，临床上尚无批准的YFV特异性治疗药物。抗体药物安全性高、靶向性强、治疗显著，是病毒性传染病预防和治疗的有效手段之一。该文阐述了近年国内外研发的YFV保护性抗体及发展方向，以期为研制高效安全的YFV特异性治疗药物提供科学指导。

关键词：黄热病毒包膜蛋白中和抗体

登革病毒、黄热病毒和基孔肯雅病毒三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及评价

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第6期36卷 707-711页

作者：阚乃鹏翁育伟俞婷婷王金章福建省疾病预防控制中心福州350012 福建师范大学生命科学学院福州350108

目的建立登革病毒(dengue virus,DENV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)核酸的三重实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法。方法通过全球共享数据库下载DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV全基因组序列进行比对分析,针对这3种病毒的相对保守区域分别设计特异性引物和探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,以其他病毒核酸评价方法的特异性,用病毒体外转录RNA评价方法的灵敏度,以病毒高、中、低浓度核酸进行独立重复实验评价方法的重复性。DENV采用登革热患者血清进行验证,YFV、CHIKV采用模拟阳性标本进行验证,采用健康人血清进行阴性验证。结果本方法与其他病毒核酸无交叉反应;对DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV的最低检出限分别为21.55拷贝/反应、21.25拷贝/反应、21.85拷贝/反应、22.75拷贝/反应、22拷贝/反应、45.65拷贝/反应;各浓度检测Ct值的标准差在0.5以内、变异系数在3%以下;临床阳性标本及模拟阳性标本的检出率为100%,健康人血清的阴性率为100%。结论本研究建立的DENV、YFV和CHIKV的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性。

关键词：逆转录-聚合酶链反应登革病毒黄热病毒基孔肯雅病毒

黄热病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

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微生物学通报 2014年第1期41卷 184-190页

作者：吕沁风陈寅吴忠华郑伟张严峻李禾浙江国际旅行卫生保健中心浙江杭州310003 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310051

【目的】建立一种简便快速的黄热病毒分子检测方法。【方法】运用RT-LAMP(Reserve transcription loop-mediated isothermal amplification)技术设计一套引物特异性识别黄热病毒E基因中的6个区域,建立高效简便的黄热病毒等温扩增检测方... 详细信息

【目的】建立一种简便快速的黄热病毒分子检测方法。【方法】运用RT-LAMP(Reserve transcription loop-mediated isothermal amplification)技术设计一套引物特异性识别黄热病毒E基因中的6个区域,建立高效简便的黄热病毒等温扩增检测方法。【结果】该检测方法具有良好的特异性,与其他虫媒病毒无交叉反应。同时检测灵敏度可达到0.066 pg,与RT-PCR相比,灵敏度高100倍左右。模拟样本检测与预期相符,临床样本未检测到阳性标本。【结论】该方法为黄热病毒检疫提供了一种可在简便环境中特异、灵敏的快速检测手段。

关键词：黄热病毒 RT-LAMP 检测

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黄热病毒NS1蛋白的制备及免疫原性鉴定

中国人兽共患病学报 2018年第5期34卷 424-428,433页

作者：刘朵朵任瑞文张培李春缘余楠刘乐斌陈荣华陈月南方医科大学珠江医院检验医学部广州510282 广州军区疾病预防控制中心广东省虫媒病毒性传染疾病应急技术研究中心广州510507

目的原核系统克隆表达黄热病毒(yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),鉴定其免疫原性。方法以YFV-17D疫苗株为模板,常规分子生物学方法构建pQE30-YFV NS1表达载体,原核表达纯化YFVNS1重组蛋白;免疫印记、... 详细信息

目的原核系统克隆表达黄热病毒(yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),鉴定其免疫原性。方法以YFV-17D疫苗株为模板,常规分子生物学方法构建pQE30-YFV NS1表达载体,原核表达纯化YFVNS1重组蛋白;免疫印记、免疫荧光和酶联免疫吸附实验验证其免疫原性。结果成功构建重组质粒pQE30-YFV NS1,制备纯化可溶性YFV NS1蛋白;该重组YFV NS1蛋白与登革病毒、黄热病毒、乙脑病毒、西尼罗河病毒免疫小鼠腹水及寨卡病毒NS1、YFV NS1蛋白免疫小鼠血清均发生反应,重组YFV NS1蛋白免疫小鼠血清与YFV感染细胞超声上清也发生反应。结论获得高纯度YFV NS1重组蛋白,且具有较好的免疫原性,含天然NS1蛋白表位,为基于NS1黄热病毒早期抗原诊断方法和蛋白功能研究奠定基础。

关键词：黄热病毒非结构蛋白1 免疫原性

达塞布韦抗黄热病毒感染和涉及初步机制的研究

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广州医科大学学报 2022年第2期50卷 18-23页

作者：钱汐晶刘燕吴兵安戚中田赵平海军军医大学海军医学系生物医学防护教研室上海200433

目的:检测达塞布韦抗黄热病毒(YFV)感染的效果并对其涉及的机制进行初步探索。方法:用不同浓度的达塞布韦处理人肝癌Huh7细胞,检测达塞布韦对细胞的毒性并计算细胞半数毒性浓度(CC50)。在安全浓度范围下,检测不同浓度的达塞布韦对YFV感... 详细信息

目的:检测达塞布韦抗黄热病毒(YFV)感染的效果并对其涉及的机制进行初步探索。方法:用不同浓度的达塞布韦处理人肝癌Huh7细胞,检测达塞布韦对细胞的毒性并计算细胞半数毒性浓度(CC50)。在安全浓度范围下,检测不同浓度的达塞布韦对YFV感染的作用并计算半数有效抑制浓度(IC50)。在YFV感染的不同时间段加入达塞布韦,检测其抗YFV的起效阶段。利用带有报告基因的YFV复制子,评价达塞布韦对YFV复制的影响。通过表达YFV NS5蛋白,利用BIAcore亲和力分析检测小分子达塞布韦与病毒NS5蛋白之间的相互作用。结果:达塞布韦细胞毒性低(CC50:346.1μM),能有效抑制YFV感染(IC50:7.253μM,P病毒的复制。结论:达塞布韦可阻断YFV感染靶细胞,作用机制为通过与YFV NS5相互作用,干扰复制关键酶的活性,抑制病毒复制。

关键词：黄热病毒聚合酶抑制剂抗病毒药物达塞布韦

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利福平抗黄热病毒感染的效果及初步机制

第二军医大学学报 2021年第1期42卷 8-13页

作者：吴兵安钱汐晶吴兴安徐铮昊罗正汉唐海琳赵平戚中田海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 空军军医大学基础医学院微生物学教研室西安710032

目的检测利福平抗黄热病毒(YFV)感染的效果并初步探索其机制。方法用不同浓度(0.04、0.2、1、5、25、125、625μmol/L)的利福平处理人肝癌细胞Huh-724 h,通过CCK-8检测利福平的细胞毒性并计算其细胞半数毒性浓度(CC50)。YFV感染Huh-7细... 详细信息

目的检测利福平抗黄热病毒(YFV)感染的效果并初步探索其机制。方法用不同浓度(0.04、0.2、1、5、25、125、625μmol/L)的利福平处理人肝癌细胞Huh-724 h,通过CCK-8检测利福平的细胞毒性并计算其细胞半数毒性浓度(CC50)。YFV感染Huh-7细胞的同时加入不同浓度(0.04、0.2、1、5、25μmol/L)的利福平,检测其抗YFV感染的剂量效应,并计算IC50。YFV感染Huh-7细胞的同时加入5μmol/L利福平,孵育不同时长(2、4、8、12、24 h),检测其抗YFV感染的时间效应。YFV感染Huh-7细胞后,在感染的不同时间段(2、4、6、8、12 h)加入25μmol/L利福平(药物作用时间2 h,病毒感染2 h),检测其抗YFV感染最显著的起效阶段。利用病毒结合实验、内吞荧光标记实验评价利福平对YFV入侵靶细胞的影响。结果利福平细胞毒性较弱(CC50为176.9μmol/L),抑制YFV作用显著(IC50为1.868μmol/L,P病毒感染早期的入侵阶段阻断病毒结合靶细胞。

关键词：利福平黄热病毒抗病毒药感染

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黄热病毒的一步RT-PCR法检测

微生物学杂志 2003年第4期23卷 8-10页

作者：彭文明邓永强于曼范保昌祝庆余秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

自不同稀释度的乳鼠脑病毒悬液中制备总RNA,在自制缓冲液条件下,进行一步RT-PCR法检测.对一步RT-PCR法与常规RT-PCR的敏感性进行比较,并且以基孔肯亚病毒和登革1-4型病毒RNA为模板进行特异性观察.结果表明,本研究建立的一步RT-PCR法可检... 详细信息

自不同稀释度的乳鼠脑病毒悬液中制备总RNA,在自制缓冲液条件下,进行一步RT-PCR法检测.对一步RT-PCR法与常规RT-PCR的敏感性进行比较,并且以基孔肯亚病毒和登革1-4型病毒RNA为模板进行特异性观察.结果表明,本研究建立的一步RT-PCR法可检出2.8×103PFU的病毒,敏感性比常规RT-PCR法高10倍,且与基孔肯亚病毒、登革病毒1-4型无交叉反应,具有良好的特异性和敏感性,适用于黄热病毒的病原学检测.

关键词：黄热病毒检测 RT-PCR 病原学敏感性

福建省首株黄热病毒株的分离鉴定和全基因组序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2021年第4期35卷 429-432页

作者：王金章林琦俞婷婷阚乃鹏游丽斌翁育伟福建省疾病预防控制中心福建省人兽共患病研究重点实验室福州350001

目的从福建省2016年输入性黄热病病例标本中分离黄热病毒(YFV)并分析其生物学特征。方法将16份黄热病毒核酸阳性血清、尿液、唾液样品分别接种C6/36细胞,YFV实时荧光RT-PCR法鉴定检测培养物中特异性病毒核酸,通过高通量测序获得病毒全... 详细信息

目的从福建省2016年输入性黄热病病例标本中分离黄热病毒(YFV)并分析其生物学特征。方法将16份黄热病毒核酸阳性血清、尿液、唾液样品分别接种C6/36细胞,YFV实时荧光RT-PCR法鉴定检测培养物中特异性病毒核酸,通过高通量测序获得病毒全基因序列并绘制系统进化树。结果从1例患者发病后3天的血清样品分离到一株病毒,通过YFV实时荧光RT-PCR鉴定为YFV病毒;BLAST分析显示该毒株全基因序列与2016年我国首例输入性黄热病病例中分离得到的毒株CNYF01R/2016(KX268355)序列完全一致;系统进化树显示该毒株与1971年安哥拉流行株Angola71分属同一进化树分支,与疫苗株17D vaccine strain(X03700)存在明显的差异,表明本研究分离到的YFV毒株是属于安哥拉型YFV野毒株。结论福建省成功从2016年输入性黄热病病例样品分离到一株安哥拉型YFV毒株。

关键词：黄热病黄热病毒病毒分离高通量测序系统进化分析

寨卡病毒、登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒微流控荧光定量RT-PCR检测方法的建立及评价

维普期刊数据库评论

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中华实验和临床病毒学杂志 2020年第2期34卷 186-190页

作者：余东阳李阿茜刘洋李乃哲朱禹李川李建东王世文李德新梁米芳柳燕安徽医科大学基础医学院微生物学教研室合肥230032 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的结合微流控与荧光定量RT-PCR技术建立寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、登革病毒(dengue virus,DENV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)的快速核酸检测方法,以实现这4种病毒感染的快速诊断。... 详细信息

目的结合微流控与荧光定量RT-PCR技术建立寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、登革病毒(dengue virus,DENV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)的快速核酸检测方法,以实现这4种病毒感染的快速诊断。方法以ZIKV的NS1基因、DENV和YFV的NS5基因以及CHIKV的E1基因作为靶序列设计4组特异性引物探针;用体外转录RNA评价方法的灵敏性;用其他病毒核酸评价方法的特异性;ZIKV、YFV、CHIKV检测方法采用模拟阳性样本,DENV检测方法采用临床患者标本进行验证,并与传统荧光定量RT-PCR检测方法进行比较。结果ZIKV、DENV、YFV、CHIKV4种方法的最低检出限分别是14.57拷贝/μl、94.27拷贝/μl、8.25拷贝/μl、223.19拷贝/μl;4种检测方法与其他病毒核酸无交叉反应;ZIKV、YFV、CHIKV模拟阳性样本检出率为100%,各浓度检测Ct值的变异系数均在2%左右;20份DENV临床患者标本检出率为100%,与传统荧光定量RT-PCR检测方法结果一致。结论本研究建立的ZIKV、DENV、YFV、CHIKV微流控荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性、稳定性,25 min内即可完成1次检测,可适用于现场实验室检测与早期诊断。

关键词：微流控荧光定量RT-PCR 寨卡病毒登革病毒黄热病毒基孔肯雅病毒