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黄枝油杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化

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种子 2016年第6期35卷 17-21页

作者：谢伟玲柴胜丰蒋运生唐健民邹蓉韦霄广西喀斯特植物保育与恢复生态学重点实验室广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所桂林541006 广西师范大学生命科学院桂林541004

先运用正交设计进行初步筛选,再用单因素设计逐一优化对ISSR-PCR扩增效果有影响的Mg2＋、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板DNA、循环次数及退火温度。建立了黄枝油杉的最佳反应体系和程序,即25μL体系中含2.0mmol/L的Mg2＋、1.5UTaq DN... 详细信息

先运用正交设计进行初步筛选,再用单因素设计逐一优化对ISSR-PCR扩增效果有影响的Mg2＋、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板DNA、循环次数及退火温度。建立了黄枝油杉的最佳反应体系和程序,即25μL体系中含2.0mmol/L的Mg2＋、1.5UTaq DNA聚合酶、0.10mmol/L的dNTP、1.0μmol/L的引物、30ng的模板DNA以及2.5μL10×PCR buffer,其余的用灭菌的ddH2O补够25μL。扩增程序：94℃预变性5min;94℃变性30s,48～56℃（不同的引物,其退火温度不同,根据具体引物而定）退火45s,72℃延伸90s,以上3个步骤循环50次;最后72℃延伸7min;扩增产物放在4℃冰箱中保存。该体系和程序稳定性良好,结果可靠,可用于黄枝油杉遗传多样性分析。

关键词：黄枝油杉 ISSR-PCR 正交设计单因素试验

黄枝油杉遗传多样性、种子萌发和光合特性研究

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黄枝油杉遗传多样性、种子萌发和光合特性研究

作者：谢伟玲广西师范大学

学位级别：硕士

黄枝油杉为我国特有的珍稀濒危树种,主要分布于我国贵州、湖南、广西一带的石灰岩山地,具有较高的观赏价值、生态价值、经济价值和科研价值。上世纪70年代以来,黄枝油杉天然种群遭受严重破坏,野外种群数量锐减,分布区域狭窄,且母树开花... 详细信息

黄枝油杉为我国特有的珍稀濒危树种,主要分布于我国贵州、湖南、广西一带的石灰岩山地,具有较高的观赏价值、生态价值、经济价值和科研价值。上世纪70年代以来,黄枝油杉天然种群遭受严重破坏,野外种群数量锐减,分布区域狭窄,且母树开花结实少,种子发育不良,天然更新能力较弱,己处于濒危状态。本研究对黄枝油杉的遗传多样性、种子萌发及其光合特性进行了研究,揭示其濒危机制,并提出相应的保护策略。主要结果如下：(1)采用ISSR分子标记对黄枝油杉7个自然种群的遗传多样性进行了分析。用12条ISSR引物对218个黄枝油杉个体进行扩增,共扩增出125个位点。在物种水平上,多态性位点百分数(PPL)为100.00%,Shannon信息多样性指数(I)为0.4177,Nei's基因多样性指数(H)为0.2666。在种群水平上,多态性位点百分数(PPL)在71.20%～92.00%之间,平均值为80.69%,Shannon信息多样性指数(I)在0.3273～0.3886之间,平均值为0.3548,Nei's基因多样性指数(H)在0.2139～0.2478之间,平均值为0.2291：黄枝油杉在物种水平和种群水平均显示出较高的遗传多样性。Nei's遗传多样性分析(Gsr=0.1433)和AMOVA分析(Φst,=17.91%)表明黄枝油杉的遗传变异主要存在于种群内,种群间的遗传分化程度较低：种群间存在一定的基因交流(Nm=2.9890>1)。Mantel test分析显示黄枝油杉种群间的遗传距离和地理距离不存在显著的相关关系(r=0.4567,P=0.0610>0.05)。(2)黄枝油杉球果为圆柱形,其平均长度为14.50cm,平均直径为3.71cm,平均重量为82.45g,球果平均出种率为14.89%;种子为浅褐色,表面光滑,具较大的种翅,其平均长度为1.54cm,平均宽度为0.61cm,平均厚度为0.47cm,平均重量为0.21g;种子千粒重为214.81g。黄枝油杉种子重量较大,出种率低,采取了产生少量重量大的种子的生殖策略。光照、温度、基质类型、储藏时间及储藏温度对黄枝油杉的种子萌发率有显著性影响,而土壤含水量对黄枝油杉的种子萌发率无显著性影响。黄枝油杉种子在25℃,周期性光照(3000lx,12h/d)培养条件下,以珍珠岩或泥炭土作为萌发基质,种子萌发率较高,分别为75.00%、72.00%：采集回来的黄枝油杉种子应低温储藏,且不宜储藏过久,应及时播种。(3)黄枝油杉的光饱和点(Isat)为850.45μmol·m-2·s-1,光补偿点(Ic)为7.86μmol·m-2·s-1,最大净光合速率(Pnmax)为5.06μmol·m-2·s-1;CO2补偿点(CCP)为97.29μmol·mol-1,CO2饱和点大于1200μmol·mol-1,羧化效率(CE)为0.0267μmol·mol-1,最大羧化速率(Vcmax)为26.24μmol·m-2·S-1,最大电子传递速率(Jmax)为81.58μmol·m-2·s-1。黄枝油杉的光合能力较弱,这与黄枝油杉在群落中一般处于上层优势种的实际情况并不相符,具体原因还有待深入研究。

关键词：黄枝油杉 ISSR分子标记遗传多样性种子萌发光合生理

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黄枝油杉和矩鳞油杉的核型研究

植物分类学报 1989年第1期27卷 49-52页

作者：陈维新叶志云广西林业科学所广西南宁

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不同处理对濒危植物黄枝油杉扦插育苗的影响

广西植物 2008年第4期28卷 549-552,436页

作者：蒋柏生文桂喜唐芸蒋巧媛桂林市林业科学研究所广西桂林541004 广西生态工程职业技术学院广西柳州545003 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所广西桂林541006

黄枝油杉属珍稀濒危植物,树形高大,采种困难,母树开花结实少,种子发芽率低,繁殖速度慢。采用扦插育苗,方法简便易行,繁殖速度快。为此,针对与黄枝油杉扦插育苗成活、生长密切相关的插穗粗度、ABT生根粉浓度和施肥种类三大因素,分别进行... 详细信息

黄枝油杉属珍稀濒危植物,树形高大,采种困难,母树开花结实少,种子发芽率低,繁殖速度慢。采用扦插育苗,方法简便易行,繁殖速度快。为此,针对与黄枝油杉扦插育苗成活、生长密切相关的插穗粗度、ABT生根粉浓度和施肥种类三大因素,分别进行对比试验。结果表明:插穗茎粗0.70cm用150mg/LABT生根粉溶液处理的平均成活率达95.6%;扦插成活后施用粪肥+尿素(配比为100∶0.4)的混合肥苗木生长健壮,平均抽梢长达30.8cm。方差分析和多重比较分析结果表明,插穗粗度、ABT生根粉浓度和肥料种类对黄枝油杉扦插苗木的生长影响极大。

关键词：黄枝油杉扦插育苗成活率生长量

基于转录组测序的黄枝油杉EST-SSR引物开发

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分子植物育种 2024年第7期22卷 2257-2264页

作者：石远婷赖柏玟王晓洁秦惠珍柴胜丰广西师范大学珍稀濒危动植物生态与环境保护教育部重点实验室桂林541006 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所桂林541006

黄枝油杉是中国特有的珍稀濒危树种,具有较高的生态、经济和科研价值。本研究基于转录组测序结果对黄枝油杉进行EST-SSR标记开发,使用MISA软件对黄枝油杉132 191条unigenes进行SSR搜索,共获得6 903个SSR位点,出现频率为5.22%,平均12.015... 详细信息

黄枝油杉是中国特有的珍稀濒危树种,具有较高的生态、经济和科研价值。本研究基于转录组测序结果对黄枝油杉进行EST-SSR标记开发,使用MISA软件对黄枝油杉132 191条unigenes进行SSR搜索,共获得6 903个SSR位点,出现频率为5.22%,平均12.015 kb出现一个SSR位点。SSR重复类型以单核苷酸重复为主,二核苷酸重复和三核苷酸重复次之,所占比例分别55.15%、17.14%、17.07%。采用SSR分子标记筛选出225对扩增清晰且符合预期片段大小的引物,有效扩增率为69.23%,经复筛最终获得9对具有多态性SSR引物。对1个野生黄枝油杉种群25个样品进行多样性检测,所有位点均具有多态性。在9对多态性SSR位点中,等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Shannon's指数(I)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)分别为5.111、2.668、0.963、0.456、0.461、0.428。结果表明,9对SSR引物遗传多样性处于中等水平,基于黄枝油杉转录组序列的SSR标记开发是可行有效的,为开展黄枝油杉遗传多样性分析及辅助育种等研究提供参考。

关键词：黄枝油杉转录组遗传多样性 SSR 引物开发

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喀斯特地区珍贵树种黄枝油杉的种子萌发特性

广西植物 2022年第6期42卷 951-960页

作者：江海都谢伟玲柴胜丰唐健民蒋运生秦惠珍韦霄桂林理工大学旅游与风景园林学院广西桂林541006 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所广西桂林541006

黄枝油杉为中亚热带喀斯特地区珍贵树种,该物种分布范围狭窄,野生种群幼苗数量少,严重限制了其自然更新。为探求该物种濒危的原因,同时为其保护和利用提供参考,该文对黄枝油杉的种实性状进行了测定,并研究了温度、光照、土壤含水量、基... 详细信息

黄枝油杉为中亚热带喀斯特地区珍贵树种,该物种分布范围狭窄,野生种群幼苗数量少,严重限制了其自然更新。为探求该物种濒危的原因,同时为其保护和利用提供参考,该文对黄枝油杉的种实性状进行了测定,并研究了温度、光照、土壤含水量、基质、贮藏温度和时间、不同地理种源等因素对种子萌发的影响。结果表明:(1)黄枝油杉球果平均结种率为7.45%±6.54%,种子有较长种翅[(2.27±0.32)cm],种子平均长度为(1.55±0.15)cm(不含种翅),平均宽度为(0.62±0.05)cm,平均厚度为(0.46±0.04)cm,平均千粒重为(214.81±14.76)g,风干种子平均含水量为15.28%±1.66%。(2)黄枝油杉种子萌发的适宜温度为25℃,在20℃和30℃下萌发率显著降低(P黄枝油杉球果结种率较低,种子萌发对温度要求严格,且种子易失去活力,这可能与其濒危有很大关系。

关键词：黄枝油杉种子形态萌发贮藏

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桂林黄枝油杉种群生态学研究

桂林黄枝油杉种群生态学研究

作者：符支宏广西师范大学

学位级别：硕士

黄枝油杉(Keteleeria calcarea Cheng et L. K. Fu)为高大针叶乔木,主要分布在桂林一带的岩溶石山上,是珍贵的第三纪残留植物,目前种群数量稀少,处于濒危边缘。针对黄枝油杉种群生态学研究方面的空白,本文采用野外调查和统计分析结合的... 详细信息

黄枝油杉(Keteleeria calcarea Cheng et L. K. Fu)为高大针叶乔木,主要分布在桂林一带的岩溶石山上,是珍贵的第三纪残留植物,目前种群数量稀少,处于濒危边缘。针对黄枝油杉种群生态学研究方面的空白,本文采用野外调查和统计分析结合的研究方法,对分布在桂林地区的黄枝油杉群落组成、种群结构、种群空间分布格局、种群生态位和种群竞争强度进行系统研究,进一步探讨黄枝油杉的濒危机制与保护对策,为黄枝油杉的保护与开发利用提供科学的理论参考。结果如下：(1)黄枝油杉群落共有高等植物66科130属157种组成,其中蕨类植物13种,裸子植物2种,双子叶植物125种,单子叶植物17种。乔木层有27科48属51种,常绿乔木21种,落叶乔木30种。针叶树2种,其余全部为阔叶树。乔木层中,黄枝油杉种群占绝对的优势,重要值高达67.28%。灌木层有植物31科52属58种,草本层有49科77属92种。种子植物119属,分为13个分布区类型及3个变型,主要为热带成分,具有热带性质的属共84属,占总属数的64.6%。温带成分有30属,占总属数的23.1%,世界成分有5属,占3.8%。黄枝油杉群落垂直结构明显,种类组成丰富,各层盖度偏高。生活型的分析表明,群落中以高位芽植物为主,常绿种类占多数,兼具一定的落叶成分,反应出典型的亚热带常绿落叶混交林特点。(2)黄枝油杉的种群分布格局主要表现为聚集分布,聚集的程度普遍偏低。除了少数样地表现出较为显著的聚集分布外,大部分样地表现为轻度的聚集分布或呈随机分布状态,仅有样地Q5在小尺度下表现出均匀分布的特征。以上各样地表现出来的特征均说明黄枝油杉有聚集分布的趋势,但由于石山环境生境破碎化的特点,石山植物通常呈片段化分布,集中分布在零散的斑块空间里,因而基本上呈现聚集分布的空间格局。另一方面,黄枝油杉种群空间分布的聚集程度普遍不高,这是因为石山内部的斑块资源有限,加之黄枝油杉作为高大乔木树种,生态资源的需求量大,强烈的竞争压力促使其难以形成高度聚集的格局。黄枝油杉与伴生树种的空间关联主要为正相关关系,少数为不相关关系。在发育完善的群落中,不同种群在空间资源的分配利用上已经趋于合理和明确,是经过长期群落发育和种群竞争而形成的稳定结构,因而空间竞争以互利的共存关系为主,排斥关系少见,进一步表现为以明显正相关为主的种间分布格局的关联。以上研究结果表明,黄枝油杉与伴生树种存在稳定的共存关系,群落发育比较完善,空间格局相对稳定。(3)黄枝油杉的高度、冠幅和胸径三者的增长近似服从幂函数关系Y=aXb。在小径级时(黄枝油杉各地种群的组成均较为古老,主要由成树组成,缺乏幼龄个体,并且各年龄层次的个体不同程度的存在缺失或断层的现象。胸径结构的研究表明,除样地Q8呈现出增长型的结构外,其余样地均呈现出衰退型结构,甚至是严重衰退的倒金字塔结构或残留型结构。分异指数的计算结构表明,黄枝油杉各样地的高度、冠幅与胸径的分异指数均在0-0.2的范围内,分异程度偏低,这是因为其种群不同年龄段特别是位于种群结构底端的幼龄个体和顶端的老龄个体存在不同程度的缺失,导致了种群的构成比较单一。样地Q8中,个体的胸径分异指数集中分布在0.2～0.4水平上,明显高于其他样地,证明该地黄枝油杉种群结构保存较为完好。(4)黄枝油杉在半径6m的圆形区域内平均有竞争木5.25种,11.27株。其中黄枝油杉所占比例最大,说明它是群落中的优势种。黄枝油杉的种内竞争强度随着胸径的增大表现为先增大后减小,胸径15-35cm阶段的个体所面临的种间竞争压力最大。黄枝油杉的种间竞争主要集中在青冈、黄梨木、圆果化香等具有类似生态需求的高大乔木上。黄枝油杉的种内与种间竞争强度依次为：青冈>黄梨木>黄枝油杉>小叶月桂>圆果化香>黄连木>阴香>构树>全缘火棘。(?)木等小乔木与黄枝油杉中低龄个体具有类似的环境需求而表现出一定的种间竞争影响,但影响有限。黄枝油杉对象木的胸径与竞争强度的关系近似地服从倒数关系y=0.016+3.41/x,竞争指数随着对象木胸径的增长而减弱。在小径级时,黄枝油杉受到的竞争压力较大,当胸径达到20cm以上时竞争指数则降低到较低水平且基本上不再变化。(5)群落中,黄枝油杉具有最大的生态位宽度。其次是黄连木、山合欢、(?)木、厚叶厚皮香、广西海桐、老虎刺、紫弹树等树种,再次是青冈、圆果化香、铁榄、粗糠柴、阴香、豆梨和铜钱树等。证明黄枝油杉为其所在群落的建群种,在群落中占据着绝对优势地位,对群落发展起决定性作用。黄连木等树种能够良好适应石山环境,分布比较广泛。青冈、圆果化香、铁榄等则是因为对资源的利用能力较弱,或是分布范围狭窄,而表现

关键词：黄枝油杉种群生态桂林岩溶石山

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黄枝油杉种苗质量分级标准研究

林业调查规划 2024年第1期49卷 16-21页

作者：顾春姣陈泰国杨一山孙菲菲邹蓉唐健民柴胜丰广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所广西桂林541006 上海中医药大学附属龙华医院上海200032 鹿儿岛大学大学院联合农学研究科日本鹿儿岛〒890-0065

黄枝油杉由于其分布区狭窄,繁殖速度慢,资源少,是国家二级保护植物。为了更好地保护其种质资源,通过实验研究种苗质量分级标准。分别对2年生和4年生的黄枝油杉种苗性状特征描述,以地径和株高作为主要分级标准代表,运用Excel 2003和SPSS ... 详细信息

黄枝油杉由于其分布区狭窄,繁殖速度慢,资源少,是国家二级保护植物。为了更好地保护其种质资源,通过实验研究种苗质量分级标准。分别对2年生和4年生的黄枝油杉种苗性状特征描述,以地径和株高作为主要分级标准代表,运用Excel 2003和SPSS 26.0对种苗特征数据进行统计学相关分析、主成分分析、K均值聚类分析,将其种苗分别2年生和4年生分别分成了三级。2年生一级株高>20 cm,冠幅>11 cm,地径≥0.10 cm;4年生一级株高>127 cm,冠幅>56 cm,地径≥0.80 cm。2年生二级株高14~20 cm,冠幅8~11 cm,地径≥0.10 cm;4年生二级株高96~127 cm,冠幅38~56 cm,地径≥0.80 cm;2年生三级株高<14 cm,冠幅<8 cm,地径≥0.10 cm;4年生三级株高<96 cm,冠幅<38 cm,地径≥0.80 cm。

关键词：黄枝油杉种苗质量分级相关性分析 K均值聚类分析

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黄枝油杉种子活力测试及发芽试验

农业与技术 2023年第11期43卷 68-70页

作者：秦丽萍贲柳玲莫小锋张敏白秀英陈江平桂林市林业科学研究所广西桂林541001

为了测试黄枝油杉种子活力以及不同温度对种子发芽的影响,得出黄枝油杉种子生活力及适宜种子发芽的温度。本试验采用TTC(氯化三苯基四氮唑)染色法检验黄枝油杉种子的生活力;使用恒温箱设置3种不同温度,对黄枝油杉种子在不同温度下的发... 详细信息

为了测试黄枝油杉种子活力以及不同温度对种子发芽的影响,得出黄枝油杉种子生活力及适宜种子发芽的温度。本试验采用TTC(氯化三苯基四氮唑)染色法检验黄枝油杉种子的生活力;使用恒温箱设置3种不同温度,对黄枝油杉种子在不同温度下的发芽率、发芽势、发芽指数进行比较分析。试验表明,经TTC染色法测定的黄枝油杉的种子平均生活力为52.00%;以在25℃条件下黄枝油杉种子的发芽率、发芽势、发芽指数最高,均显著高于20℃和30℃的。枝油杉种子生活力较低;以25℃的处理条件下最适宜黄枝油杉种子发芽。

关键词：黄枝油杉种子活力不同温度发芽力

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