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降解AFb的枯草芽孢杆菌S分离与鉴定

中国畜牧兽医 2022年 4654-4664页

作者：孙向丽刘宇翾时子瑶温长印田亚东康相涛王彦彬河南金尔康生物科技有限公司河南农业大学动物科技学院河南农业大学动物医学院

【目的】筛选出能够高效降解黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)的菌株,并对其降解活性及残留毒性进行检测,以期为黄曲霉毒素b(alflatoxin b,AFb)污染防治提供参考。【方法】采集耗牛、绵羊等草食性动物粪便和养殖场霉变饲料,以AFb的结构类似物... 详细信息

【目的】筛选出能够高效降解黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)的菌株,并对其降解活性及残留毒性进行检测,以期为黄曲霉毒素b(alflatoxin b,AFb)污染防治提供参考。【方法】采集耗牛、绵羊等草食性动物粪便和养殖场霉变饲料,以AFb的结构类似物香豆素为唯一碳源筛选降解AFb效率最高的菌株,并对其进行形态学、生理生化和16S rDNA鉴定。取AFb与适量筛选菌株的发酵液混合,使AFb的浓度为1μg/mL,37℃、150 r/min培养,测定培养不同时间AFb降解率;应用差速离心法分别制取上清液、菌悬液和菌体,将菌体超声裂解后制得胞内液,测定不同组分对AFb的降解率;对上清液分别进行蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理,检测处理后上清液AFb降解率;分别用不同浓度的饱和硫酸铵沉淀处理上清液,检测AFb降解率;应用7 ku透析袋对上清液进行浓缩,检测AFb降解率,从而判断菌株活性成分的性质和分布。将鸡肝细胞分为AFb组、AFb-菌株组、菌株组和空白对照组,用实时荧光定量PCR检测各组鸡肝细胞中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosisi factor alpha,TNF-α)和bcl-2-associated X蛋白(bax)基因的相对表达量。【结果】经初筛和复筛,从编号为S的绵羊粪便样品中分离出1株菌株,其降解AFb的活性最高,降解率可达60.36%。菌株S在Lb固体培养基上培养12 h,可观察到淡黄色不透明菌落,表面光滑,有隆起,镜检革兰氏染色呈阳性,杆状。16S rDNA基因进行PCR扩增并进一步测序分析,其序列与LC55966.1的同源性为100%。综合16 S rDNA序列分析和生理生化结果鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)。该菌发酵液与AFb(1μg/mL)反应4、12、24、48和72 h,降解率分别达到10.98%、25.36%、46.24%和52.65%和80.84%。上清液AFb降解率显著高于菌悬液和胞内液(Pb降解活性降低,而经蛋白酶K和SDS处理后降解活性基本丧失。用不同浓度饱和硫酸铵处理的上清液AFb降解率差异不显著(P>0.05),而经透析浓缩后的上清液AFb降解率显著高于硫酸铵处理的上清液沉淀蛋白(Pb组相比,AFb经枯草芽孢杆菌S降解后诱导IL-6、TNF-α以及bax的表达量均显著降低(Pb的活性,其降解活性主要来自于培养液上清中的蛋白质;AFb经降解后其毒素显著降低。

关键词：黄曲霉毒素b 枯草芽孢杆菌毒素降解

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畜禽饲料中黄曲霉毒素的检测与防控措施

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2015年第9期 155-156页

作者：李丹梁丽娟柳州市动物疫病预防控制中心广西柳州545006 鹿寨县动物疫病预防控制中心广西柳州545600

近年来,饲料中黄曲霉毒素污染率很高,给饲料生产企业和养殖业带来了很大损失。为了调查柳州市范围内的饲料是否存在黄曲霉毒素污染,保障柳州市饲料安全,柳州市动物产品质量安全检测中心在2014年随机抽查了240批次畜禽饲料,用AFb1酶联免... 详细信息

近年来,饲料中黄曲霉毒素污染率很高,给饲料生产企业和养殖业带来了很大损失。为了调查柳州市范围内的饲料是否存在黄曲霉毒素污染,保障柳州市饲料安全,柳州市动物产品质量安全检测中心在2014年随机抽查了240批次畜禽饲料,用AFb1酶联免疫吸附检测方法检测饲料中黄曲霉毒素b1的污染情况。结果表明:在抽查的240批次畜禽饲料中,合格238批次,不合格2批次,不合格率为0.8%。将检测结果报行政主管单位后,对不合格饲料进行了无害化处理,依法对生产企业进行了处罚,保护了养殖业的健康发展。

关键词：畜禽饲料黄曲霉黄曲霉毒素b 酶联免疫防控措施

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臭氧熏蒸对玉米胚中真菌毒素的降解消除

食品科学 2021年

作者：刘玉兰郑婷婷马宇翔王戬东王月华河南工业大学粮油食品学院河北玉星食品有限公司山东三星玉米产业科技有限公司

固定臭氧浓度为150 mg/L，探究玉米胚水分含量和臭氧熏蒸时间对玉米胚中真菌毒素消除效果的影响。结果表明：玉米胚水分含量为20%、熏蒸时间为80 min时，对黄曲霉毒素b;(AFb;)有最优消除效果，消除率为72.27%；玉米胚水分含量为10%、熏... 详细信息

固定臭氧浓度为150 mg/L，探究玉米胚水分含量和臭氧熏蒸时间对玉米胚中真菌毒素消除效果的影响。结果表明：玉米胚水分含量为20%、熏蒸时间为80 min时，对黄曲霉毒素b;(AFb;)有最优消除效果，消除率为72.27%；玉米胚水分含量为10%、熏蒸时间50 min时，玉米赤霉烯酮（ZEN）消除率达68.88%；玉米胚水分含量为15%、熏蒸60 min时，呕吐毒素（DON）消除率可达82.86%。适当提高玉米胚水分含量（20%范围内）对提升3种真菌毒素的消除效果有利。3种真菌毒素的消除率与处理时间呈正相关，熏蒸时间达60 min时，3种真菌毒素均可获得较好的消除效果。综合3种真菌毒素的消除效果，采用玉米胚水分含量15%、熏蒸时间60 min的优化条件，AFb;、ZEN、DON的消除率分别达到66.61%、69.44%、90.96%。随玉米胚水分含量增加和臭氧熏蒸时间延长，玉米胚毛油的色泽变浅，酸价和过氧化值升高，但总体升幅不大。

关键词：玉米胚真菌毒素黄曲霉毒素b 玉米赤霉烯酮呕吐毒素臭氧熏蒸降解消除综合品质

木薯粉及制品中高灵敏度AFb;快速检测方法研究

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南方农业学报 2021年第10期52卷 2824-2833页

作者：余厚美王琴飞林立铭徐缓李其铸范武波张振文中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/国家薯类加工技术研发分中心海口571101 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

【目的】基于酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测原理,建立高灵敏度的直接竞争法检测木薯粉及其制品中的黄曲霉毒素b_(1)(AFb_(1)),为木薯食品安全提供技术支持。【方法】通过对AFb1抗原结构改造、免疫和细胞融合等过程获得抗原抗体,建立高... 详细信息

【目的】基于酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测原理,建立高灵敏度的直接竞争法检测木薯粉及其制品中的黄曲霉毒素b_(1)(AFb_(1)),为木薯食品安全提供技术支持。【方法】通过对AFb1抗原结构改造、免疫和细胞融合等过程获得抗原抗体,建立高灵敏度检测方法,并进行木薯粉及其制品样本的实例验证。【结果】制备的AFb1抗原和抗体,其抗体亚型均为IgG_(1),灵敏度最高的3F2细胞株产生的抗体对黄曲霉毒素G_(1)、G_(2)和b2交叉反应率分别为21.4%、1.9%和8.8%,且对其他毒素类无交叉反应,建立的ELISA线性区间为0.02~0.48μg/kg,半数抑制浓度(IC_(50))为0.047μg/kg,标准方程为y=-3.074x-4.3066(R2=0.9978)。以35%甲醇水溶液作为标准品稀释液,木薯食品原料用70%甲醇水溶液加0.2 g NaCl作为提取液,含油脂的木薯糕点用70%甲醇水溶液作为提取液,所有样本均为10倍稀释,检测限0.2~4.8μg/kg,样品添加回收率81.5%~120.0%,变异系数均小于8.5%。应用验证试验表明,自建ELISA试剂盒对96份样本检出19份阳性样本,购买试剂盒检出7份阳性,大于2.0μg/kg的样本检测结果完全符合,自建ELISA试剂盒方法灵敏度优于购买的ELISA试剂盒。【结论】本研究建立的直接竞争ELISA方法灵敏度高,操作简单,可广泛应用于木薯粉及其制品样本中AFb1的快速测定。

关键词：黄曲霉毒素b 快速检测酶联免疫分析木薯粉

基于氧化石墨烯的荧光适配体传感器用于食品中真菌毒素检测

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食品科学 2021年

作者：王琦杨庆利吴薇青岛农业大学食品科学与工程学院

目的：本文利用核酸适配体和氧化石墨烯（graphene oxide， GO）组装了一种基于荧光共振能量转移原理的荧光适体传感器用于两种真菌毒素的同时检测。方法：GO通过π-π堆积作用将荧光标记的黄曲霉毒素b;(AFb;) 适配体（aptamer1， A... 详细信息

目的：本文利用核酸适配体和氧化石墨烯（graphene oxide， GO）组装了一种基于荧光共振能量转移原理的荧光适体传感器用于两种真菌毒素的同时检测。方法：GO通过π-π堆积作用将荧光标记的黄曲霉毒素b;(AFb;) 适配体（aptamer1， APT1）和伏马菌素b;(Fb;) 适配体（aptamer2， APT2）吸附在其表面。由于荧光共振能量转移效应，适配体上荧光基团的荧光被GO猝灭；当向溶液中加入靶标AFb;和Fb;时，APT1和APT2分别与AFb;和Fb;结合，从GO中游离出来，恢复荧光。结果：该传感器为AFb;和Fb;的荧光检测提供了快速、灵敏的方法，AFb;的检测限为0.15 ng/mL，Fb;的检测线为0.12 ng/mL。同时对白酒样品进行加标回收实验，回收率分别在92%～100.81% (AFb;) 和89%～99.5% ( Fb;) 之间。结论：本研究构建的荧光适配体传感器用于两种真菌毒素的同时检测具有高的灵敏度和特异性，同时该适配体传感器同样适用于其他真菌毒素的多重检测。

关键词：适配体传感器氧化石墨烯荧光检测黄曲霉毒素b 伏马菌素b

HbV与AFb1诱发树鼩肝癌前病变过程中癌基因的表达

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中华肝脏病杂志 1998年第3期6卷 155-157页

作者：覃柳亮苏建家李瑗杨春班克臣严瑞琪广西肿瘤防治研究所 530021 中山医科大学肿瘤防治中心

目的动态观察黄曲霉毒素 bl(AFb1)与乙型肝炎病毒(HbV)诱发树鼩肝细胞癌(HCC)病变过程,肝癌前病变γ-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞灶(GGT 阳性灶)和胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、p21和 p53表达,探讨 HCC 发生的可能机制。方法实验动物分4组:A... 详细信息

目的动态观察黄曲霉毒素 bl(AFb1)与乙型肝炎病毒(HbV)诱发树鼩肝细胞癌(HCC)病变过程,肝癌前病变γ-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞灶(GGT 阳性灶)和胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、p21和 p53表达,探讨 HCC 发生的可能机制。方法实验动物分4组:A 组 HbV 感染阳性和摄入 AFb1;b 组 HbV 阳性;C 组摄入 AFb1;D 组空白对照。采用 LSAb、组织化学和原位杂交检测。结果 (1)各实验组肝癌前病变 GGT 阳性灶数量、大小均明显高于空白组(Pb、C 组(Pb 两组动物肝组织中 HbsAg 阳性率高达92.1%;在树鼩肝组织中检出 HbxAg,阳性率达86.5%。结论HbV 与 AFb1协同致树鼩 HCC;HCC 发生早期就有癌基因 IGF-Ⅱ异常表达。

关键词：肝癌 HbV 黄曲霉毒素b 肿瘤发生

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肝癌癌变的实验病理研究

北京大学学报(医学版) 1989年第1期21卷 39-41+99页

作者：王洛权雷道年朱昌仁杜敏捷北京医科大学病理学教研室北京天坛医院北京天坛医院人民医院病理科

本文短期饲喂大鼠黄曲霉毒素b;诱发肝癌,并应用病理组织学、组织化学、形态定量及电子显微镜术观察肝癌前病变的发展及其与肝癌的关系。发现诱癌早期肝小叶周边首先出现嗜硷性小肝细胞增生,进一步形成增生灶,嗜硷性增生灶和嗜酸性增生... 详细信息

本文短期饲喂大鼠黄曲霉毒素b;诱发肝癌,并应用病理组织学、组织化学、形态定量及电子显微镜术观察肝癌前病变的发展及其与肝癌的关系。发现诱癌早期肝小叶周边首先出现嗜硷性小肝细胞增生,进一步形成增生灶,嗜硷性增生灶和嗜酸性增生灶都可癌变。本文还探讨了与癌变有关的酶组织化学改变。

关键词：肝细胞瘤实验性增生灶酶改变灶黄曲霉毒素b

复方黄芪益气口服液对AFb1所致大鼠急性肝损伤的保护作用

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山西医科大学学报 2019年第10期50卷 1435-1439页

作者：严文瑞王玲芝候玲玲张立伟化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学分子科学研究所太原030006 山西大学化学化工学院

目的研究复方黄芪益气口服液对AFb 1引起的大鼠急性肝损伤的保护作用。方法40只大鼠随机分为空白组、DMSO组、模型组、阳性药对照组(阳性对照组)和复方黄芪益气口服液组(口服液组),每组8只。采用单次灌胃黄曲霉毒素b 1(AFb 1,2 mg/kg)... 详细信息

目的研究复方黄芪益气口服液对AFb 1引起的大鼠急性肝损伤的保护作用。方法40只大鼠随机分为空白组、DMSO组、模型组、阳性药对照组(阳性对照组)和复方黄芪益气口服液组(口服液组),每组8只。采用单次灌胃黄曲霉毒素b 1(AFb 1,2 mg/kg)建立大鼠急性肝损伤模型,分析肝指数,观察肝组织病理切片,检测血清生化指标,肝组织脂质过氧化指标和抗氧化指标。结果DMSO组与空白组各指标差异不存在统计学意义;与模型组相比,阳性对照组和口服液组肝指数显著提高(PbIL的含量降低(Pb 1造成的大鼠肝损伤有很好的保护作用。

关键词：复方黄芪益气口服液黄曲霉毒素b 1 肝损伤抗氧化作用

MicroRNA-429表达与肝细胞癌预后的关系研究

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右江民族医学院学报 2013年第6期35卷 758-761页

作者：刘懿霄马韵黄小英姚金光王超龙喜带广西医科大学第一附属医院广西南宁530021 右江民族医学院附属医院病理科广西百色533000 上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科上海200127

摘要：目的探讨MicroRNA--429（miR--429）在肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC）中的表达情况及其与HCC临床病理特征和预后的关系。方法收集来自黄曲霉毒素bI高暴露区TNM分期为l～Ⅱ期的HCC患者（138例）手术切除标本，通过TaqMa... 详细信息

摘要：目的探讨MicroRNA--429（miR--429）在肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC）中的表达情况及其与HCC临床病理特征和预后的关系。方法收集来自黄曲霉毒素bI高暴露区TNM分期为l～Ⅱ期的HCC患者（138例）手术切除标本，通过TaqMan--PCR技术检测miR--429在癌组织、癌旁组织、肝癌细胞株SMMC--7721以及非肝癌细胞．株QsG-7701中的表达情况，通过风险比例回归模型及逻辑回归模型分析miR--429表达与HCC临床病理学特征以及预后的关系。结果与癌旁组织相比，miR--429在HCC癌组织中的表达水平上调，升高约4倍（P〈O．01），细胞学实验有类似发现；miR-429表达水平与HCC肿瘤大小及AFbl-DNA加合物水平相关-风险值分别为3．13（1．47～6．67）和2．70（1．28～5．56）；高miR--429表达影响HCC5年期总体生存率及肿瘤无复发生存率（P〈O．01），增加总体死亡风险及肿瘤复发风险分别为3．64倍和5．94倍。结论miR--429表达参与HCC肿瘤化过程，并影响HCC预后。

关键词：关键词癌肝细胞黄曲霉毒素b MicroRNA--429