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鹿骨类药材DNA提取方法研究

中国中药杂志 2011年第3期36卷 370-374页

作者：赵静雪陈敏崔光红唐仕欢黄璐琦何利群夏瑞雪首都医科大学中医药学院北京100069 中国中医科学院中药研究所北京100700 哈尔滨誉衡药业股份有限公司黑龙江哈尔滨150025

目的:建立一种简便、实用、高效的鹿骨DNA提取方法,为动物骨类药材真伪鉴别奠定基础。方法:取净制后的梅花鹿骨、马鹿骨、牛骨、狗骨、猪骨样品,经干燥、研磨粉碎后,对脱钙时间(24,48,72 h),脱钙温度(4,25,37,56,70℃)及不同提取方法(改... 详细信息

目的:建立一种简便、实用、高效的鹿骨DNA提取方法,为动物骨类药材真伪鉴别奠定基础。方法:取净制后的梅花鹿骨、马鹿骨、牛骨、狗骨、猪骨样品,经干燥、研磨粉碎后,对脱钙时间(24,48,72 h),脱钙温度(4,25,37,56,70℃)及不同提取方法(改良SDS提取法、试剂盒提取法)进行考察,分析比较不同提取方法获得的DNA质量。结果:实验证明,脱钙过程有助于骨细胞的裂解,在较宽泛的脱钙时间及脱钙温度下,均可从骨细胞中获得DNA,但提取量稍有差异。结论:骨粉经0.5 mol.L-1EDTA脱钙液4℃脱钙24 h,加入裂解液后56℃水浴1 h,即可从鹿骨(约0.1 g)中提取到高质量DNA,用于PCR扩增。

关键词：鹿骨脱钙 DNA提取方法优化

基于灰色关联度的鹿骨提取物免疫调节作用的谱效关系研究

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中国医院药学杂志 2024年第7期44卷 757-763页

作者：王跃龙杨小倩兰梦张楠茜申嘉明李冬冰刘璐王硕张辉孙佳明长春中医药大学/吉林省人参科学研究院吉林长春130117

目的:研究鹿骨的指纹图谱与免疫调节作用的关联性,明确鹿骨能够发挥免疫作用的活性成分。方法:以不同提取温度制备10组鹿骨样品,建立指纹图谱;对指纹图谱中的共有峰进行多元统计分析,采用液质联用技术和标准品对照对其进行指认;通过测... 详细信息

目的:研究鹿骨的指纹图谱与免疫调节作用的关联性,明确鹿骨能够发挥免疫作用的活性成分。方法:以不同提取温度制备10组鹿骨样品,建立指纹图谱;对指纹图谱中的共有峰进行多元统计分析,采用液质联用技术和标准品对照对其进行指认;通过测定10组鹿骨提取物作用于RAW264.7损伤模型的细胞活力和一氧化氮(NO)浓度,以此为指标评价鹿骨的免疫调节作用,并通过灰色关联度建立鹿骨的谱效关系。结果:鹿骨指纹图谱有10个共有峰,利用液质联用技术对这10个峰进行结构鉴定,并通过标准品比对确定了6个化合物。鹿骨指纹图谱相似度大于0.9。聚类分析和主成分分析结果相同,将鹿骨聚为6类,OPLS-DA筛选出5个变量投影重要性(VIP)大于1的色谱峰,分别是4号、7号(尿苷)、10号(鸟苷)、5号、9号(肌苷)。而灰色关联度结果显示10个色谱峰关联度均大于0.6,表明鹿骨可能通过多成分起到免疫调节作用;有9个色谱峰关联度大于0.7表明有较大的关联性;前6个色谱峰是7号(尿苷)、10号(鸟苷)、9号(肌苷)、2号(胞苷)、3号(尿嘧啶)、6号(次黄嘌呤)。综上所述,表明7号(尿苷)、10号(鸟苷)、9号(肌苷)这3个核苷类成分可能是鹿骨中的主要的免疫调节成分。结论:鹿骨免疫调节作用可能是多种核苷类成分协同作用的结果,尿苷、鸟苷和肌苷可能是鹿骨发挥免疫作用的主要活性成分。

关键词：鹿骨谱效关系免疫调节灰色关联度核苷

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鹿骨双酶法酶解工艺的研究

食品研究与开发 2016年第9期37卷 82-86页

作者：于浩张海悦李震杨雪长春工业大学化学与生命科学学院吉林长春130012

以新鲜鹿骨为原料,探讨鹿骨酶解的最佳工艺条件;以水解度为指标,确定以碱性蛋白酶和胰蛋白酶为试验用酶,通过正交试验确定鹿骨双酶法酶解的最佳工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶在p H 9.0、温度50℃的条件下水解时间为3 h,再在p H 8.0、温... 详细信息

以新鲜鹿骨为原料,探讨鹿骨酶解的最佳工艺条件;以水解度为指标,确定以碱性蛋白酶和胰蛋白酶为试验用酶,通过正交试验确定鹿骨双酶法酶解的最佳工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶在p H 9.0、温度50℃的条件下水解时间为3 h,再在p H 8.0、温度37℃条件下,加入胰蛋白酶水解2 h,此时的水解度为12.72%,分别是碱性蛋白酶和胰蛋白酶最大水解度的1.84倍和1.39倍。

关键词：鹿骨双酶水解度工艺

基于Label-free技术的鹿角与鹿骨蛋白组分比较

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畜牧兽医学报 2017年第12期48卷 2286-2292页

作者：张然然刘华淼王磊周永娜唐福全夏述忠邢秀梅中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室长春130112 四川农业大学雅安625000 深圳野生动物园有限公司深圳518000

旨在利用Label-free技术对天山马鹿的鹿角与鹿骨蛋白组分进行比较分析。以脱盘后130d的马鹿鹿角和鹿骨为研究对象,利用Label-free蛋白质组学技术和生物信息学方法解析比较鹿角与鹿骨的蛋白质组分。结果共成功鉴定1 138种蛋白质,其中鹿... 详细信息

旨在利用Label-free技术对天山马鹿的鹿角与鹿骨蛋白组分进行比较分析。以脱盘后130d的马鹿鹿角和鹿骨为研究对象,利用Label-free蛋白质组学技术和生物信息学方法解析比较鹿角与鹿骨的蛋白质组分。结果共成功鉴定1 138种蛋白质,其中鹿骨蛋白934种、鹿角蛋白835种。通过对成功鉴定到的蛋白质进行功能注释发现,鹿骨蛋白特异富集到了低密度脂蛋白受体代谢、黑质体发育、血管再生、细胞凋亡信号通路调节等过程;而鹿角特有蛋白富集到了肽类激素加工过程、活化T细胞增殖调节等生物学过程,其中肽类激素加工过程主要蛋白有CPE、CPN1、ECE1,活化T细胞增殖调节蛋白主要有IGF2、PRKAR1A、PYCARD。利用SPSS软件筛选鹿角与鹿骨显著差异表达蛋白(差异倍数>2,P鹿骨中表达上调,260种蛋白在鹿角中表达上调,其中cathelicidin 1与cathelicidin 5在鹿角中为高表达,而cathelicidin 6在鹿骨中高表达。该试验结果弥补了鹿角与鹿骨蛋白质组分研究的空白,为进一步研究鹿角与鹿骨的有效成分奠定基础。

关键词：马鹿鹿角鹿骨 Label—free 蛋白质组分

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鹿骨、鹿角、鹿髓中无机元素分析

中华中医药学刊 2018年第9期36卷 2220-2222页

作者：李倩李峰王婉王斐娴马珊珊辽宁中医药大学

目的：通过测定鹿骨、鹿角、鹿髓中无机元素的种类与含量,比较分析鹿骨、鹿角和鹿髓在无机元素上的异同点。方法：采用微波消解法、ICP-MS法,测定鹿骨、鹿角、鹿髓中无机元素的种类及含量。结果：鹿骨、鹿角、鹿髓中均含有Ca、Na、Mg、K... 详细信息

目的：通过测定鹿骨、鹿角、鹿髓中无机元素的种类与含量,比较分析鹿骨、鹿角和鹿髓在无机元素上的异同点。方法：采用微波消解法、ICP-MS法,测定鹿骨、鹿角、鹿髓中无机元素的种类及含量。结果：鹿骨、鹿角、鹿髓中均含有Ca、Na、Mg、K、Fe、Al、Ag、Ba、Be、Co、Mn、Mo、Ni、Sb、Th、V、Cr、Zn、Se等19种无机元素,及Cu、Hg、Pb、As、Cd等5种有害元素;所有样品中常量元素均以Ca含量最高;微量元素中以Cr含量最高;鹿骨、鹿髓中的Hg、As、Cd及鹿角中的Cu、Hg、As、Cd含量＂超标＂。结论：鹿骨、鹿角、鹿髓虽然在无机元素含量上存在差异,但在元素种类上具有一致性;鹿骨中含有丰富的Ca,可作为钙补充剂开发利用;有害元素超标提示鹿骨、鹿角、鹿髓在使用过程中的安全性。

关键词：鹿骨鹿角鹿髓无机元素

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鹿骨水提液中无机元素4种形态分析

时珍国医国药 2018年第10期29卷 2329-2331页

作者：李倩李峰王婉马姗姗辽宁中医药大学辽宁大连116600

目的通过对鹿骨水提液中元素形态的分析,了解各元素在鹿骨水提液中的存在形态。方法运用回流提取、电炉加热消解及ICP-MS法,测定,鹿骨水提液中各种无机元素分别在4种形态中的含量。结果鹿骨水提液中共检出16种无机元素,均以可溶态、悬... 详细信息

目的通过对鹿骨水提液中元素形态的分析,了解各元素在鹿骨水提液中的存在形态。方法运用回流提取、电炉加热消解及ICP-MS法,测定,鹿骨水提液中各种无机元素分别在4种形态中的含量。结果鹿骨水提液中共检出16种无机元素,均以可溶态、悬浮态、无机态、有机态这4种形态存在;所有元素的可溶态含量高于悬浮态;除Mg,Th,V等3种元素外,大多数元素的无机态含量高于有机态。结论鹿骨水提液中的各无机元素含量,均低于原药材中的含量;有害元素含量均符合《中国药典》限量标准。从元素存在形态上来看,鹿骨水提液中含较多利于人体吸收的有机钠和有机钾等。

关键词：鹿骨电感耦合等离子体质谱无机元素形态分析

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牛骨和鹿骨中氨基酸分析与比较

食品科技 2015年第3期40卷 170-175页

作者：肖厚荣杨红黄书铭彭成银合肥学院生物与环境工程系合肥230601

利用氨基酸自动分析仪分别对经过不同加工工艺获得的鹿骨粉和牛骨粉进行氨基酸的种类和含量分析。结果表明:鹿骨粉中氨基酸总量为24.69%,必需氨基酸占氨基酸总量的16.65%;牛骨粉中氨基酸总量为27.10%,必需氨基酸占氨基酸总量的20.63%,其... 详细信息

利用氨基酸自动分析仪分别对经过不同加工工艺获得的鹿骨粉和牛骨粉进行氨基酸的种类和含量分析。结果表明:鹿骨粉中氨基酸总量为24.69%,必需氨基酸占氨基酸总量的16.65%;牛骨粉中氨基酸总量为27.10%,必需氨基酸占氨基酸总量的20.63%,其中,甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丙氨酸的含量较高;冷冻法工艺加工的骨粉,氨基酸含量普遍高于蒸煮法;粗骨粉与超微骨粉的实验结果比较,发现超微骨粉的氨基酸含量有所增加。试验结果表明,鹿骨和牛骨具有丰富的营养成分和很高的经济价值。

关键词：鹿骨牛骨超微骨粉氨基酸分析

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鹿角及鹿骨中总多糖含量比较分析

中华中医药学刊 2018年第12期36卷 2971-2974页

作者：王斐娴李峰李倩辽宁中医药大学

目的:通过比较鹿角、鹿角脱盘、鹿骨中总多糖含量,为鹿角与鹿角脱盘同用,以及鹿骨的药用提供依据。方法:分别采用苯酚一硫酸法和蒽酮一硫酸法,测定鹿角、鹿角脱盘、鹿骨中总多糖含量。结果:两种测定方法中,三者总多糖含量由高到低依次为... 详细信息

目的:通过比较鹿角、鹿角脱盘、鹿骨中总多糖含量,为鹿角与鹿角脱盘同用,以及鹿骨的药用提供依据。方法:分别采用苯酚一硫酸法和蒽酮一硫酸法,测定鹿角、鹿角脱盘、鹿骨中总多糖含量。结果:两种测定方法中,三者总多糖含量由高到低依次为:鹿角脱盘,鹿角,鹿骨;两种测定方法中,蒽酮一硫酸法测定结果,各样品总多糖含量均高于苯酚一硫酸法测定结果。结论:从总多糖角度,鹿角及鹿角脱盘含量具有显著差异,不宜作同一药材使用;同为鹿的骨化部分的鹿骨,与鹿角总多糖含量差异较大,应分别药用。

关键词：鹿角鹿角脱盘鹿骨总多糖含量苯酚硫酸法蒽酮硫酸法

基于组效学对鹿骨抗骨质疏松和抗炎的活性成分的研究

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基于组效学对鹿骨抗骨质疏松和抗炎的活性成分的研究

作者：王跃龙长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究基于组效关系探究鹿骨抗骨质疏松和抗炎活性的物质基础,并初步阐明相关机制。方法:采用不同温度下的水浸提法制备鹿骨样品,建立鹿骨HPLC指纹图谱,应用液质联用技术对共有色谱峰进行鉴定。基于多元统计分析,分析鹿骨HPLC指纹... 详细信息

目的:本研究基于组效关系探究鹿骨抗骨质疏松和抗炎活性的物质基础,并初步阐明相关机制。方法:采用不同温度下的水浸提法制备鹿骨样品,建立鹿骨HPLC指纹图谱,应用液质联用技术对共有色谱峰进行鉴定。基于多元统计分析,分析鹿骨HPLC指纹图谱中的特征差异成分。采用地塞米松诱导MC3T3-E1细胞损伤模型,以细胞活力和碱性磷酸酶（ALP）分泌量作为骨质疏松的评价指标评估鹿骨抗骨质疏松活性。采用脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症损伤模型,以细胞活力、NO、TNF-α和IL-6的含量作为抗炎的评价指标评价鹿骨抗炎活性。并以熵权法拟合多指标结合灰色关联度分析鹿骨抗骨质疏松和抗炎活性成分的相关性。通过网络药理学、分子对接和分子动力学模拟分析鹿骨抗骨质疏松和抗炎的作用机制。应用核磁代谢组学技术,阐述鹿骨抗骨质疏松的整体代谢机制。结果:在鹿骨HPLC指纹图谱中发现有18个共有峰,鉴定为核苷类、肽类及氨基酸类成分。多元统计分析发现了11个差异化合物,通过对照品比对,确认了9个核苷类成分,包括腺苷、肌苷、次黄嘌呤、胞苷、鸟苷、尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶和腺嘌呤。通过熵权灰色关联度分析,以细胞活力、ALP、IL6、TNF-α和NO为活性指标,对鹿骨抗骨质疏松和抗炎的核心成分进行排序,结合单体成分的活性实验,发现鹿骨中的腺苷、NH2-Iie-Leu-Leu-Leu-Leu-COOH和肌苷具有良好的抗骨质疏松活性,尿苷、鸟苷和肌苷具有良好的抗炎活性。NH2-Iie-Leu-Leu-Leu-Leu-COOH、腺苷和肌苷组成的鹿骨活性组分相比较于鹿骨提取物拥有更好的抗骨质疏松效果。通过网络药理学、分子对接和分子动力学模拟技术分析鹿骨抗骨质疏松和抗炎的机制表明,鹿骨中的腺苷、NH2-Iie-Leu-Leu-Leu-Leu-COOH和肌苷主要通过影响PTGS2和AR来发挥抗骨质疏松效果,尿苷、鸟苷和肌苷则主要通过作用于SIRT1和MMP9来发挥抗炎作用。KEGG富集通路分析发现,鹿骨活性成分可能通过神经活性配体-受体相互作用、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路等通路发挥抗骨质疏松作用。此外鹿骨活性成分有可能通过脂质与动脉粥样硬化,TNF信号通路,类风湿性关节炎通路等通路发挥抗炎作用。通过核磁细胞代谢组学技术对模型组和空白组,模型组和鹿骨活性组分组差异代谢物进行分析,筛选出甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、柠檬酸循环（TCA循环）、甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、丙酮酸代谢五条核心代谢通路,通过下调MC3T3-E1细胞损伤模型中的氧化三甲胺、亮氨酸、乳酸、胆碱、琥珀酸和肌酐等6种代谢差异物,证明鹿骨活性组分对MC3T3-E1细胞的保护作用。结论:本研究基于指纹图谱及液质联用技术确定了18个化学成分,并以谱效关系确定了鹿骨中腺苷、NH2-Iie-Leu-Leu-Leu-Leu-COOH和肌苷为抗骨质疏松的主要成分,尿苷、鸟苷和肌苷为抗炎的主要活性成分。通过网络药理学、分子对接和分子动力学模拟技术确定了鹿骨有效成分的主要作用靶点为PTGS2、AR、SIRT1和MMP9,并分析出鹿骨活性成分有可能通过神经活性配体-受体相互作用、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路等通路发挥抗骨质疏松作用,通过脂质与动脉粥样硬化,TNF信号通路,类风湿性关节炎通路等通路发挥抗炎作用。核磁细胞代谢组学阐明了鹿骨活性成分发挥抗骨质疏松活性主要与甘油磷脂代谢通路,柠檬酸循环（TCA循环）代谢通路,甘油磷脂代谢通路,精氨酸和脯氨酸代谢通路和丙酮酸代谢通路等代谢等途径有关。以上研究为鹿骨的开发提供了实验基础,同时为进一步探究其治疗骨质疏松和炎症的机制提供了依据。

关键词：鹿骨骨质疏松抗炎核苷肽