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鹿血晶通过降低肾小管上皮细胞的5-羟色胺合成及降解抑制顺铂诱导的肾损伤

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中草药 2021年第24期52卷 7501-7510页

作者：张怡关晶徐凡梁秀睿张誉馨金佳琦傅继华中国药科大学基础医学与临床药学学院江苏南京210009

目的探讨鹿血晶保护肾脏以及抑制顺铂诱导肾损伤的作用机制。方法人肾小管上皮HK-2细胞设对照组、模型组及鹿血晶(160、400、1000μg/mL)组和单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)抑制剂氯吉兰(15μmol/L)组,加入药物预处理1 h后加... 详细信息

目的探讨鹿血晶保护肾脏以及抑制顺铂诱导肾损伤的作用机制。方法人肾小管上皮HK-2细胞设对照组、模型组及鹿血晶(160、400、1000μg/mL)组和单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)抑制剂氯吉兰(15μmol/L)组,加入药物预处理1 h后加入顺铂(20μmol/L)刺激24 h诱导细胞损伤。雄性ICR小鼠随机分为对照组、模型组及鹿血晶(0.78 g/kg)组,鹿血晶组预给药7 d,然后模型组及鹿血晶组ip顺铂(25 mg/kg)诱导肾损伤,继续治疗3 d后处死动物。检测细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,以及细胞及小鼠肾组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平;采用荧光探针DCFH-DA、Mito-Tracker Red CMXRos及荧光染料Hoechst 33342分别检测细胞内ROS含量、定位及细胞凋亡情况;Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、NADH脱氢酶1(NADH dehydrogenase 1,ND1)、细胞色素B(cytochrome b,CYTB)、ATP合成酶亚单位6(ATP synthase 6,ATP6)、核因子-κB p65(nuclear factor kappa-B,NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p65(phosphorylated NF-κB p65,p-NF-κB p65)、抑制子κBα(inhibitor of NF-κB,IκBα)、p-IκBα蛋白表达,细胞及小鼠肾组织色氨酸羟化酶1(tryptophan hydroxylase,Tph1)、芳香簇氨基酸脱羧酶(aromatic amino acid decarboxylase,AADC)、5-HT2A受体(5-HT2A receptors,5-HT2AR)、MAO-A蛋白表达;采用苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠肾组织病理损伤;采用免疫组化法检测小鼠肾组织Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达。结果与模型组比较,鹿血晶可抑制HK-2细胞内ROS、MDA及上清液中TNF-α、IL-1β水平(P鹿血晶(1000μg/mL)组与氯吉兰组的作用效果接近,两组对顺铂诱导NF-κB p65磷酸化、细胞凋亡激活(Bax、Caspase-3、Caspase-9表达上调及Bcl-2表达下调)、呼吸链功能下降(ND1、CYTB、ATP6表达下调及ATP水平降低)的逆转作用也接近。并且,鹿血晶(1000μg/mL)组可明显抑制顺铂诱导的HK-2细胞Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达上调以及5-HT含量升高(P鹿血晶(1000μg/mL)组和氯吉兰组对其有相似的抑制效果。HE染色显示,顺铂致小鼠肾组织损伤的部位主要在近端肾小管上皮细胞,免疫组化显示该部位也是Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达上调最明显的部位。鹿血晶可抑制顺铂诱导的Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A蛋白表达的上调及肾组织5-HT、ROS含量升高(P鹿血晶活性成分抑制顺铂诱导肾损伤的机制可能是直接作用于肾脏近端肾小管上皮细胞,抑制顺铂对细胞Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达的上调,从而抑制细胞的5-HT合成及线粒体5-HT降解,达到抑制线粒体ROS生成、保护呼吸链,最终抑制氧化应激、炎症、细胞凋亡的效果。

关键词：鹿血晶近端肾小管上皮细胞线粒体 5-羟色胺合成 5-羟色胺降解活性氧

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鹿血晶对肾阳虚小鼠性激素水平的影响

贵州中医药大学学报 2023年第5期45卷 46-50页

作者：邓万娟梁潇刘娇胡涛蔡敏芳罗萍钱海兵贵州中医药大学贵州贵阳550025 贵州省中医药方证药理研究特色实验室贵州贵阳550025

目的:探究鹿血晶对肾阳虚小鼠的性激素水平影响。方法:ICR小鼠100只,雌雄各半,分为对照组、模型组、鹿血晶高、中、低剂量组(0.52 g/kg,0.26 g/kg,0.13 g/kg),每组20只,除对照组外,其余各组腺嘌呤(50 mg/kg)灌胃14 d后给药7 d。观察小... 详细信息

目的:探究鹿血晶对肾阳虚小鼠的性激素水平影响。方法:ICR小鼠100只,雌雄各半,分为对照组、模型组、鹿血晶高、中、低剂量组(0.52 g/kg,0.26 g/kg,0.13 g/kg),每组20只,除对照组外,其余各组腺嘌呤(50 mg/kg)灌胃14 d后给药7 d。观察小鼠体质量,体温,一般行为学(抓力、自主活动);计算肾脏、前列腺精囊、睾丸、子宫、卵巢器官指数;ELISA法测定雌二醇、孕酮、睾酮水平;HE染色观察小鼠肾脏组织形态。结果:鹿血晶能提高肾阳虚模型小鼠体质量、体温、抓力和自主活动次数(P鹿血晶能通过调节性激素分泌水平,改善肾阳虚小鼠的肾阳虚证候。

关键词：鹿血晶肾阳虚性激素

探究中药鹿血晶对骨髓间充质干细胞的增殖作用

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贵州中医药大学学报 2023年第4期45卷 13-17页

作者：胡涛刘娇梁潇钱海兵贵州中医药大学贵州贵阳550025

目的:探究鹿血晶是否通过PI3K/AKT信号通路促进骨髓间充质干细胞(bone marrww-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖。方法:通过MTT法检测不同鹿血晶药物浓度对细胞增殖影响,使用DAPI染色检测经药物刺激后的细胞数量,基于MTT法使... 详细信息

目的:探究鹿血晶是否通过PI3K/AKT信号通路促进骨髓间充质干细胞(bone marrww-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖。方法:通过MTT法检测不同鹿血晶药物浓度对细胞增殖影响,使用DAPI染色检测经药物刺激后的细胞数量,基于MTT法使用细胞周期实验检测细胞生长周期,通过Western blot实验检测PI3K与AKT的蛋白表达。结果:与对照组相比,鹿血晶浓度为200μg/ml时对BMSCs的增殖效果最佳,细胞数量明显增加(P鹿血晶作用于BMSCs,细胞数量显著增加,并且细胞中PI3K与AKT的蛋白表达提高。所以中药鹿血晶的促进BMSCs增殖作用可能是通过PI3K/AKT信号通路实现的。

关键词：鹿血晶骨髓间充质干细胞 PI3K AKT 仙灵骨葆胶囊

鹿血晶增强巨噬细胞抗黑色素瘤作用及其机制研究

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中国免疫学杂志 2020年第8期36卷 939-943页

作者：潘宇晨李京蔓李丹窦环(指导) 侯亚义南京大学医学院南京210093

目的:探索鹿血晶对巨噬细胞杀伤黑色素瘤细胞的影响。方法:细胞增殖试剂盒(CCK8)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和巨噬细胞吞噬情况。qRT-PCR法检测炎症因子mRNA表达水平,ELISA检测上清炎症因子浓度。蛋白印迹法检测mTOR信号通路... 详细信息

目的:探索鹿血晶对巨噬细胞杀伤黑色素瘤细胞的影响。方法:细胞增殖试剂盒(CCK8)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和巨噬细胞吞噬情况。qRT-PCR法检测炎症因子mRNA表达水平,ELISA检测上清炎症因子浓度。蛋白印迹法检测mTOR信号通路下游4EBP和S6磷酸化水平。结果:鹿血晶刺激后Raw264.7细胞培养上清抑制B16F10细胞活力,促进B16F10细胞凋亡。鹿血晶促进Raw264.7细胞吞噬B16F10细胞,增强Raw264.7细胞活力,并上调炎症因子iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA表达,促进上述炎症因子分泌,上调4EBP和S6蛋白磷酸化水平。结论:鹿血晶通过活化mTOR信号通路提高巨噬细胞对黑色素瘤细胞的杀伤作用。

关键词：鹿血晶巨噬细胞黑色素瘤 mTOR

鹿血晶辅助放疗对荷S180肉瘤小鼠免疫功能的影响

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郑州大学学报（医学版） 2018年第4期53卷 469-473页

作者：张昕刘宗文秦名扬宋俊丽戚瑞辉张艳郑州大学基础医学院药理学系郑州450001 郑州大学第二附属医院肿瘤放疗科郑州450014

目的:探讨鹿血晶对荷S180肉瘤小鼠放疗后免疫功能的影响及其可能机制,为临床用药提供依据。方法:建立S180荷瘤小鼠模型,分为模型组、放疗组、放疗+鹿血晶组,另设正常组,每组10只。放疗组、放疗+鹿血晶组小鼠给予X线局部照射,2 Gy/次,1次... 详细信息

目的:探讨鹿血晶对荷S180肉瘤小鼠放疗后免疫功能的影响及其可能机制,为临床用药提供依据。方法:建立S180荷瘤小鼠模型,分为模型组、放疗组、放疗+鹿血晶组,另设正常组,每组10只。放疗组、放疗+鹿血晶组小鼠给予X线局部照射,2 Gy/次,1次/d,连续5 d,放疗+鹿血晶组自照射开始即灌胃给予鹿血晶混悬液,连续给药10 d。治疗结束采用流式细胞术检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群比例;ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6水平;免疫组化法检测脾脏组织转录因子GATA-3和T-bet的表达。结果:与模型组比,放疗组荷瘤小鼠CD4^+T淋巴细胞数量减少,CD4^+/CD8^+细胞比例降低,血清IFN-γ水平降低,IL-4水平升高,脾脏组织GATA-3、T-bet的表达均降低;与放疗组比较,放疗+鹿血晶组荷瘤小鼠CD4^+T淋巴细胞数及CD4^+/CD8^+细胞比例均增加,脾脏指数升高,血清IFN-γ升高,IL-1、IL-4水平下降,脾脏组织GATA-3的表达降低,T-bet表达的下降减缓(P均鹿血晶对放疗荷瘤小鼠的免疫功能具有一定的保护作用,其可调节Th1/Th2型细胞因子的比例,部分机制可能与其影响T淋巴细胞转录因子T-bet与GATA-3的表达有关。

关键词：鹿血晶 S180肉瘤放疗免疫功能小鼠

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鹿血晶对荷瘤鼠放疗后免疫功能的影响

鹿血晶对荷瘤鼠放疗后免疫功能的影响

作者：张昕郑州大学

学位级别：硕士

目的:迄今为止,恶性肿瘤仍旧是影响人类生命健康和生活质量的一类严重疾病,是人类疾病中的第二大杀手,手术、化疗、放疗是其治疗的三大基本手段。多数肿瘤要依靠放射治疗,但放疗缺乏对正常细胞和肿瘤细胞的选择性,射线在杀死肿瘤细胞的... 详细信息

目的:迄今为止,恶性肿瘤仍旧是影响人类生命健康和生活质量的一类严重疾病,是人类疾病中的第二大杀手,手术、化疗、放疗是其治疗的三大基本手段。多数肿瘤要依靠放射治疗,但放疗缺乏对正常细胞和肿瘤细胞的选择性,射线在杀死肿瘤细胞的同时,对于正常细胞也存在杀伤作用,从而产生毒副作用,使得其存在极大的局限性,最为常见也最为关键的就是导致机体免疫力下降,严重影响患者的治疗效果和生存质量。因此,在肿瘤治疗的过程中,杀死肿瘤细胞和保护机体免疫系统同等重要。中国传统医药虽在控制肿瘤方面欠佳,但多数具有增强免疫、降低毒副作用的功效,且较为安全,在放疗辅助治疗上具备独特的优势。鹿血晶系梅花鹿血或马鹿血经炮制加工干燥后制得的产品,具有养血益精、行血祛瘀、消肿疗伤等作用。本文旨在通过观察外周血象、脾脏和骨髓组织形态、T细胞亚群及相关蛋白等的变化,评价鹿血晶对荷瘤鼠放疗后免疫功能的影响,并初步探讨其可能机制,为临床用药提供依据。方法:1制备S180腹水瘤细胞悬液,建立S180荷瘤鼠模型。2分组和给药。设置正常组、荷瘤模型组、放疗组、放疗+鹿血晶组。对治疗组进行X线局部照射,10 Gy/5次,2 Gy/次,每天1次,连续5天。放疗+鹿血晶组自照射开始即灌胃给予鹿血晶混悬液,连续给药10天,于开始给药后第16天处死。3在治疗期间观察小鼠的一般情况和肿瘤生长情况,并定期检测小鼠外周血血象,观察各组小鼠在治疗期间血象的变化。4治疗结束后将小鼠处死,钝性剥离脾脏和同侧股骨制作标本,称取脾重,计算脾脏指数;制备抗凝血,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血的T淋巴细胞亚群CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞。5采用酶联免疫吸附实验（ELISA）双抗体夹心法检测各组小鼠外周血血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-1表达水平。6采用免疫组化法检测各组小鼠脾脏组织中转录因子GATA3和T-bet的表达。7采用HE染色技术,观察各组小鼠脾脏和骨髓的组织形态变化。结果:1荷瘤鼠接受照射后体重呈下降趋势,给药后体重下降幅度减小,肿瘤增长也较放疗组减缓。2治疗期间外周血血象检测结果表明,与模型组相比,开始照射后5天,放疗组的白细胞、淋巴细胞、红细胞数均降低,给鹿血晶后白细胞数、淋巴细胞数有回升趋势,其中与模型组相比,各治疗组淋巴细胞数变化显著（P＜0.05）;尤其第10天,与模型组相比,放疗组和放疗+鹿血晶组的白细胞数、淋巴细胞数均显著下降（P＜0.01）,且第10天和第15天荷瘤鼠放疗+鹿血晶组的淋巴细胞数较放疗组明显升高（P＜0.05）。3对脾脏指数的影响:与模型组相比,放疗组的脾脏指数有所降低,但无统计学意义。与放疗组比较,鹿血晶对放疗荷瘤鼠放疗后脾脏指数的升高作用明显（P＜0.01）。4外周血T细胞亚群检测结果表明,与模型组相比,放疗后荷瘤鼠CD4+辅助性T细胞亚群、CD8+杀伤性T细胞亚群以及CD4+/CD8+的比例均下降（P＜0.05）;与放疗组相比,鹿血晶对荷瘤鼠放疗后外周血中CD4+辅助性T细胞亚群的数量有增强作用,CD4+/CD8+比例也增加（P＜0.01）。5外周血细胞因子检测结果表明,荷瘤鼠放疗后外周血的IFN-γ表达减少（P＜0.05）,给药后较放疗组荷瘤鼠外周血IFN-γ水平升高（P＜0.05）;放疗荷瘤鼠外周血的IL-4表达水平上升（P＜0.05）,与放疗组荷瘤鼠相比,给药后荷瘤鼠外周血IL-4表达降低（P＜0.05）。放疗组较模型组荷瘤鼠外周血的IL-6、IL-1表达均有增加趋势,给药后呈下降趋势,但差异未见统计学意义（P＞0.05）。6免疫组化法检测各组小鼠脾脏组织中转录因子GATA3与T-bet表达,结果表明,与模型组相比,放疗组和放疗+鹿血晶组T-bet和GATA3表达均降低,放疗组T-bet表达比GATA3降幅更大,GATA3表达占优势,给药后GATA3表达明显降低（P＜0.01）,T-bet表达上升。说明鹿血晶能缓解放疗造成的荷瘤鼠脾脏组织中T-bet/GATA3的比值降低,使T-bet表达占优势。7病理组织学检测结果表明,给药后放疗组荷瘤鼠的脾脏、骨髓组织形态学损伤减轻。结论:鹿血晶对放疗引起的荷瘤鼠血象损伤尤其是T淋巴细胞损伤具有一定的保护作用,能够缓解放疗引起的体重减轻以及脾脏、造血功能损伤,并能通过调节CD4+/CD8+T细胞比例、平衡Th1/Th2型细胞因子,增强细胞免疫功能。部分机制可能与其影响T淋巴细胞转录因子T-bet和GATA3的表达有关。

关键词：鹿血晶荷瘤鼠放疗免疫功能放疗辅助治疗

鹿血晶治疗肿瘤化疗所致血小板减少症的临床疗效观察

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鹿血晶治疗肿瘤化疗所致血小板减少症的临床疗效观察

作者：刘大学辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察鹿血晶治疗肿瘤化疗所致血小板减少症的临床疗效。材料与方法:符合条件的50例患者(1.经组织学或细胞学检查诊断的恶性肿瘤需化疗的患者;2.住院患者,经一周期化疗后血小板降低至(25.0-75.0)×109/L;3.需要继续接受至少两个周期... 详细信息

目的:观察鹿血晶治疗肿瘤化疗所致血小板减少症的临床疗效。材料与方法:符合条件的50例患者(1.经组织学或细胞学检查诊断的恶性肿瘤需化疗的患者;2.住院患者,经一周期化疗后血小板降低至(25.0-75.0)×109/L;3.需要继续接受至少两个周期以上相同化疗方案,剂量调整不超过±10%;4.男女不限,年龄在18-70岁;5.肝肾功等检查基本正常;6.ECOG评分≤2分;7.预计生存期大于3个月。)随机分为TPO组和TPO+鹿血晶组,各25例。TPO组:使用TPO 1.5万U,每日一次,皮下注射,TPO+鹿血晶组:使用TPO 1.5万U,每日一次,皮下注射联合鹿血晶1g,每日三次,口服,两组观察时间最长均为14d,观察血小板计数、白细胞、红细胞、生命体征、中医主要症状、肝肾功能、凝血功能及经济费用等。结果:1.两组临床疗效有差异,统计学有意义(P0.05);3.TPO组治疗前后白细胞,两组治疗前后红细胞、中性粒细胞对比统计学没有意义(P>0.05),而TPO+鹿血晶组治疗前后白细胞对比差异统计学有意义(P0.05);5.所有患者均未发生明显的药物不良反应。结论:鹿血晶联合TPO升血小板疗效优于单药TPO,并能缩短肿瘤化疗所致血小板减少症的治疗时间,鹿血晶能改善患者神疲乏力、心悸气短、睡眠等症状,且安全性良好。

关键词：鹿血晶化疗血小板减少症重组人血小板生成素

鹿血晶治疗化疗后血小板减少症的临床疗效观察

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鹿血晶治疗化疗后血小板减少症的临床疗效观察

作者：聂慧娟广州中医药大学

学位级别：硕士

目的：评价鹿血晶治疗恶性肿瘤化疗后所致血小板减少症的临床疗效。方法：化疗后血小板减少的患者60例(病理诊断明确,且血小板计数≥25×109/L且0.05),升至75×109/L、100×109/L的所需天数在三组之间有差异性,统计学均有意义(P0.05)。4... 详细信息

目的：评价鹿血晶治疗恶性肿瘤化疗后所致血小板减少症的临床疗效。方法：化疗后血小板减少的患者60例(病理诊断明确,且血小板计数≥25×109/L且鹿血晶,鹿血晶口服1g bid;C组鹿血晶联合巨和粒,皮下注射巨和粒,1.5mg,每日1次+鹿血晶口服1gbid,三组疗程最长均为14d,观察每个患者治疗前后的血小板计数、白细胞、血红蛋白、中医主要症候、体力状况评分、经济费用以及肝肾功能等变化情况。结果：1.A、B、C三组西医总体临床疗效有差异,统计学有意义(P0.05),升至75×109/L、100×109/L的所需天数在三组之间有差异性,统计学均有意义(P0.05)。4.三组体力状况评分比较,经统计学处理P鹿血晶能改善患者的体力状况。5.中医主要症状疗效比较,三组在神疲乏力、头晕目眩、心悸气短、腰膝酸软、睡眠症状中比较,三组差异均具有统计学意义(P0.05)。结论：鹿血晶升血小板数目疗效确切,能改善患者的体力状况,且安全低毒,服用方便,经济费用低。但目前研究属小样本研究,需扩大病例数,以期得出更为科学、真实的结果。

关键词：鹿血晶巨和粒化疗血小板减少症

鹿血晶治疗化疗后血小板减少症的临床疗效及安全性观察

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鹿血晶治疗化疗后血小板减少症的临床疗效及安全性观察

作者：戈欣上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察中药鹿血晶治疗实体恶性肿瘤化疗后所致血小板减少症的临床疗效及安全性资料与方法:将符合条件的44例患者(经病理组织学确诊为恶性实体肿瘤患者;符合化疗适应症,并接受化疗,25×109/L≤化疗后血小板计数≤75×109/L;预计生存期... 详细信息

目的:观察中药鹿血晶治疗实体恶性肿瘤化疗后所致血小板减少症的临床疗效及安全性资料与方法:将符合条件的44例患者(经病理组织学确诊为恶性实体肿瘤患者;符合化疗适应症,并接受化疗,25×109/L≤化疗后血小板计数≤75×109/L;预计生存期≥3月;性别不限,年龄185岁;东部肿瘤协作组(ECOG)评分:0-2;自愿签署知情同意书),按照随机对照原则分为A组(鹿血晶+CIT常规治疗组)和B组(CIT常规治疗组),A组:鹿血晶联合CIT常规治疗,化疗后发生血小板减少(PLT≤75×109/L)即开始口服鹿血晶,每次1g,每天2次,直至PLT≥100×109/L或虽没有达到100×109/L,但绝对值上升50×109/L,若血小板未能达到以上标准则连用14天后停药。B组:CIT常规治疗:a.75×109/L0.05)。两组均未输注血小板。3.两组治疗前后主要的中医症候(紫斑、潮热盗汗、五心烦热、自汗、腰酸、膝软、头晕、神疲乏力、心悸、食欲不振、失眠等)无显著差异(P>0.05)。4.两组治疗前后ECOG评分均未见明显改善,无统计学差异。5.两组均未出现严重的药物不良反应。结论:A组(鹿血晶+CIT常规治疗组)疗效优于B组(CIT常规治疗组),并且能显著缩短实体肿瘤化疗相关血小板降低治疗时间,且具有安全性好,患者接受度高等优势。

关键词：鹿血晶化疗血小板减少症实体肿瘤 IL-11 TPO