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鸭MCHR2的基因克隆及蛋白表达鉴定

中国药理学通报 2010年第11期26卷 1520-1522页

作者：朱勇汪长东刘革力袁成福卜友泉易发平焦庆昉艾青刘竹兰欢武向梅宋方洲胡平生 Tomas Hokfelt 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室重庆400016 Karolinska Instituter Stockholm Sweden SE-11276/S-17177

目的筛查能够稳定表达黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因的动物,为构建动物模型提供实验依据。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,从新鲜的鸭、Wista鼠、SD鼠、C3H10鼠、C57鼠、狗、羊、猪等大脑组织中提取总RNA,以此扩增MCHR2基... 详细信息

目的筛查能够稳定表达黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因的动物,为构建动物模型提供实验依据。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,从新鲜的鸭、Wista鼠、SD鼠、C3H10鼠、C57鼠、狗、羊、猪等大脑组织中提取总RNA,以此扩增MCHR2基因的全长cDNA编码区序列;利用Western blot检测鸭、犬和猪的大脑海马区及皮质区MCHR2蛋白的表达情况。结果通过RT-PCR获得鸭、犬、猪脑组织中的目的片段;通过Western blot验证了MCHR2蛋白在鸭脑组织中具有高表达。结论将鸭作为构建动物模型的对象,用于MCHR2基因的相关功能研究具有可行性。

关键词： MCHR2 MCR RT-PCR Western blot 鸭肥胖

减毒麻疹病毒联合拉米夫定体内抗鸭乙型肝炎病毒作用的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2001年第1期15卷 39-42页

作者：杨湛邓学龙张奉学吴婉芬朱宇同广州第八人民医院肝病研究所 510060 广州中医药大学

目的　观察减毒麻疹病毒与拉米夫定 (3TC)联合用药在鸭体内抗乙型肝炎病毒的作用。方法　以感染鸭乙型肝炎病毒 (DHBV)的广州麻鸭为实验动物模型 ,在感染后分别给予口服3TC、肌注麻疹疫苗和联合使用麻疹疫苗与 3TC ,并以无环鸟苷 (ACV)... 详细信息

目的　观察减毒麻疹病毒与拉米夫定 (3TC)联合用药在鸭体内抗乙型肝炎病毒的作用。方法　以感染鸭乙型肝炎病毒 (DHBV)的广州麻鸭为实验动物模型 ,在感染后分别给予口服3TC、肌注麻疹疫苗和联合使用麻疹疫苗与 3TC ,并以无环鸟苷 (ACV)口服作为用药对照组 ,肌注生理盐水作为病毒对照组。于给药前 (T0 ) ,给药第 5天 (T5) ,第 10天 (T10 )及停药第 3天 (T13)留取血清 ,采用斑点杂交方法测定DHBVDNA。结果　 3TC组在T5和T13 两点病毒量略有下降 ,但与T0 比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;麻疹疫苗组在给药早期病毒量无下降 ,T13 点时病毒量与T0 比较有显著下降 (P 0 0 5 ) ,停药第 3天时的病毒量与给药前及病毒对照组同期比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　减毒麻疹病毒与 3TC联合给药较单独给药对DHBV

关键词：麻疹病毒拉米夫定肝炎病毒鸭

水芹水提物在鸭原代肝细胞培养中对DHBV抑制作用的初步研究

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中国药学杂志 1997年第11期32卷 720-723页

作者：黄正明杨新波曹文斌邵兴无陈鸿珊中国人民解放军北京医学高等专科学校药理教研室中国医学科学院医药技术研究所病毒室

目的：应用鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）体外肝细胞培养模型，研究中草药水芹（ＳＱ）抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用。方法：制取北京雏鸭原代肝细胞（５０万／ｍｌ／孔／２４孔板）于３７℃，ＣＯ２培养２４ｈ存活后，除对照组外，给... 详细信息

目的：应用鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）体外肝细胞培养模型，研究中草药水芹（ＳＱ）抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用。方法：制取北京雏鸭原代肝细胞（５０万／ｍｌ／孔／２４孔板）于３７℃，ＣＯ２培养２４ｈ存活后，除对照组外，给药组每天换药１次，连续加药５ｄ并测定ＤＮＡ的含量。结果：①在肝细胞毒性实验中，ＳＱ对鸭肝细胞无毒性，半数有毒浓度（ＣＤ５０）大于１００００μｇ·ｍｌ－１。②在ＤＨＢＶ感染鸭的原代肝细胞培养中能够保护肝细胞，连续给药培养７ｄ，肝细胞的贴壁状态、形态和存活量均优于对照组。③对ＤＨＢＶＤＮＡ有明显的抑制作用，其抑制率（２５００μｇ·ｍｌ－１）为６４％，半数有效浓度（ＥＤ５０）为１１２０．８μｇ·ｍｌ－１，选择指数（ＳＩ）大于９。结论：实验结果提示，ＳＱ对ＤＨＢＶ有一定的抑制作用。

关键词：水芹鸭乙型肝炎病毒肝细胞培养

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鸭出血性卵巢炎实验感染模型的建立

中国农业科学 2011年第10期44卷 2161-2167页

作者：林健韩春华陈华林蒋桃珍梁武何平有杨保收王英韩婧雯刘东艳潘洁段会娟丁佩佩胡胜强刘月焕北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京首都农业集团中国兽医药品监察所瑞普保定生物药业有限公司

【目的】建立鸭出血性卵巢炎的实验动物感染模型并对其发病特点进行观察,为疫苗研究和筛选评价抗病毒药物提供工具。【方法】以每只约104个ELD50的剂量经滴鼻、点眼和口服途径感染196日龄北京鸭后,观察鸭临床症状,于感染后5、7、9、21... 详细信息

【目的】建立鸭出血性卵巢炎的实验动物感染模型并对其发病特点进行观察,为疫苗研究和筛选评价抗病毒药物提供工具。【方法】以每只约104个ELD50的剂量经滴鼻、点眼和口服途径感染196日龄北京鸭后,观察鸭临床症状,于感染后5、7、9、21、28、34 d采血和剖检鸭,应用固定病毒稀释血清的方法测定血清中和抗体,取卵泡膜、肝脏、脾脏和脑组织进行病毒分离,对主要组织脏器进行病理学检查。【结果】攻毒后3、4、5d采食量均显著下降(下降80%),6d采食量恢复至约正常量的50%,11d恢复到正常水平;攻毒后3、4、5d产蛋量出现明显下降,6、7、8d鸭群未见产蛋,36d发病鸭群的产蛋率恢复到60%,39d鸭群的产蛋率达到80%。攻毒后5d 3只(3/3)鸭的卵泡膜和肝脏均可以分离到病毒,7d 2只(2/2)鸭的卵泡膜中均分离到病毒,1只鸭(1/2)脾脏和脑组织中均分离到病毒,9d 1只鸭(1/2)的卵泡膜中分离到病毒,21d和28d卵泡膜病毒分离结果均为阴性。感染鸭的卵巢变性、变形,卵泡膜充血、出血;卵巢、肝脏、脑、脾等组织和脏器均出现以网状细胞(巨噬细胞)增生为主的病理变化,表现为急性出血性卵巢炎、间质性肝炎、非化脓性脑炎、坏死性脾炎、间质性肾炎和轻度的心肌炎。感染后3周可检测出低效价的中和抗体。【结论】实验感染鸭出血性卵巢炎病毒后可引起急性出血性卵巢炎,利用产蛋北京鸭建立的鸭出血性卵巢炎模型,可用于评价抗病毒药物和疫苗的研究。

关键词：鸭出血性卵巢炎实验模型

鸭leptin基因在大肠杆菌中的融合表达及生物学活性分析

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中国农业科学 2007年第11期40卷 2615-2620页

作者：戴汉川张晓伟龙良启伍晓雄华中农业大学动物科技学院华中农业大学动物科技学院武汉430070

【目的】研究鸭leptin在体外高效表达特点,探讨表达产物的生物学活性及其功能。【方法】构建重组鸭leptin基因原核表达菌株,重组菌株经不同浓度IPTG和不同时间诱导后,对表达蛋白进行提取、纯化、复性和浓缩,经注射昆明小鼠后,对小鼠的... 详细信息

【目的】研究鸭leptin在体外高效表达特点,探讨表达产物的生物学活性及其功能。【方法】构建重组鸭leptin基因原核表达菌株,重组菌株经不同浓度IPTG和不同时间诱导后,对表达蛋白进行提取、纯化、复性和浓缩,经注射昆明小鼠后,对小鼠的体重﹑采食量和体脂含量进行分析。【结果】鸭leptin在大肠杆菌中实现了高效特异性融合表达,融合蛋白分子量约为20kD,其中16kD为鸭leptin基因表达产物,目的蛋白在0.2mmol·L-1IPTG的诱导下,表达量最高约占菌体总蛋白的57%。重组蛋白纯化﹑复性﹑浓缩后,能够明显降低小鼠摄食量、体重和体脂含量。【结论】鸭leptin基因在大肠杆菌中进行了高效融合表达,表达产物具有明显的生物学活性。

关键词：鸭 leptin基因基因表达生物学活性

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湖北麻鸭乙型肝炎病毒体内感染模型的建立

中华实验和临床病毒学杂志 2008年第2期22卷 113-115页

作者：胡权方瑗张正茂张小勇张振华杨东亮湖北省武汉市疾病预防控制中心传染病防治所湖北省武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室

目的建立标准化的湖北麻鸭乙型肝炎病毒（DHBV）动物模型，并初步观察拉米呋啶（3TC）体内抗DHBV的作用。方法将收集的转染细胞培养上清液纯化后作为体内实验感染的标准毒种，经腹腔接种2日龄雏鸭，连续观察50d，用Real-TimePCR检测血清... 详细信息

目的建立标准化的湖北麻鸭乙型肝炎病毒（DHBV）动物模型，并初步观察拉米呋啶（3TC）体内抗DHBV的作用。方法将收集的转染细胞培养上清液纯化后作为体内实验感染的标准毒种，经腹腔接种2日龄雏鸭，连续观察50d，用Real-TimePCR检测血清中DHBVDNA出现和持续时间。药物组则于接种3d后给予3TC，检测观察期间感染鸭血清中病毒含量的变化情况。结果雏鸭实验感染率达到87．5％；雏鸭在接种后第7天出现病毒血症，血清病毒含量于第11天达到高峰值，后逐步降低，但在观察期内仍维持较高水平。在3TC治疗期间，感染鸭体内病毒血症处于较低水平，被感染肝细胞的数量也明显减少，且无明显的毒性作用；在停药3d后，病毒血症即出现反跳现象，此后又有上升趋势。结论通过接种转染细胞上清液成功建立湖北麻鸭乙型肝炎病毒动物模型，药物评估实验证明其良好的稳定性和实用性；该模型也为研究DHBV生物学特性提供了有力的手段。

关键词：肝炎病毒乙型鸭模型动物基因病毒

鸭circ＿MBNL1在脂肪细胞分化过程中的功能预测

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农业生物技术学报 2023年第10期31卷 2140-2149页

作者：张傲王来娣杨婷江勇王志秀陈国宏白皓常国斌江苏省动物遗传育种与分子设计重点实验室/扬州大学动物科学与技术学院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室/扬州大学农业科技发展研究院

环状RNA (circular RNAs, circRNAs)是一种新型内源性非编码RNA，在各种组织中均有表达。本研究以樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domesticus)胚原代细胞分化过程中circRNA测序结果为基础，针对由肌肉盲样剪接调节因子1 (musblind-like 1,... 详细信息

环状RNA (circular RNAs, circRNAs)是一种新型内源性非编码RNA，在各种组织中均有表达。本研究以樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domesticus)胚原代细胞分化过程中circRNA测序结果为基础，针对由肌肉盲样剪接调节因子1 (musblind-like 1, MBNL1)基因编码的circ＿MBNL1进行鉴定与功能分析。通过PCR扩增和焦磷酸测序技术获得接合序列，采用核质分离消化实验验证了鸭circ＿MBNL1主要定位在细胞核中。组织表达谱结果提示，circ＿MBNL1主要在鸭脾脏、脂肪和肺组织中表达。生物信息学分析结果表明，circ＿MBNL1与预测的靶基因主要富集在脂肪细胞因子信号通路、FoxO信号等通路，推测circ＿MBNL1可能参与调控鸭脂肪细胞的分化过程。本研究为深入探究circ＿MBNL1在鸭脂肪细胞分化过程中的调控作用提供了理论基础。

关键词：鸭肌肉盲样剪接调节因子1 (MBNL1) 脂肪细胞功能预测

鸭腺苷琥珀酸裂解酶基因序列特征及表达与肌肉肌苷酸含量的相关性分析

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中国农业科学 2012年第4期45卷 774-785页

作者：徐善金虞德兵汪峰何宗亮张剑锋于海龙杜文兴南京农业大学动物科技学院南京市畜牧家禽科学研究所

【目的】克隆鸭腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase,ADSL)基因的完整编码区(codingsequences,CDS),对其进行核酸和蛋白序列分析,研究该基因在各品种肌肉组织mRNA表达水平;对该基因mRNA表达水平与肌肉组织肌苷酸(inosine monophosp... 详细信息

【目的】克隆鸭腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase,ADSL)基因的完整编码区(codingsequences,CDS),对其进行核酸和蛋白序列分析,研究该基因在各品种肌肉组织mRNA表达水平;对该基因mRNA表达水平与肌肉组织肌苷酸(inosine monophosphate acid,IMP)含量进行相关性分析。为揭示中国优良地方鸭种的风味基因结构、研究其生物学功能以及与重要风味物质的关系奠定理论基础。【方法】通过PCR扩增和克隆测序获得鸭ADSL基因部分cDNA序列,运用生物信息学方法分析鸭ADSL基因编码区序列、蛋白结构和进化关系,利用real-time-PCR技术检测鸭肌肉组织中ADSL基因mRNA表达水平,利用高效液相色谱法测定肌肉组织IMP含量。【结果】①鸭ADSL基因CDS全长均为1 380 bp,编码459个氨基酸,与鸡的同源性为94.77%。②ADSL蛋白为偏碱性,有较为强烈的信号肽和细胞内跨膜结构,蛋白二级结构主要由α-螺旋构成。③鸭和鸡首先聚为一类,后与人、鼠等哺乳动物聚为一类,而与两栖、鱼类相聚较远。④ADSL基因表达量品种间差异极显著(P鸭除外,为P>0.05)。⑤IMP含量在品种间差异极显著(P鸭ADSL基因CDS序列与鸡的同源性极高,在肌肉组织中该基因的表达量及对应IMP含量表现为不同品种、同一品种不同性别、同一性别不同部位间极显著或显著差异,两者并显现出显著正相关。

关键词：鸭 ADSL 克隆 mRNA表达肌苷酸高效液相色谱法

鸭生长激素(GH)基因编码区及调控区多态性分析

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畜牧兽医学报 2007年第9期38卷 907-912页

作者：许盛海包文斌程金花黄军张红霞陈国宏扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

根据鸭生长激素基因编码区及调控区的序列设计8对引物,利用PCR-SSCP方法对北京鸭、西湖野鸭、樱桃谷鸭、金定鸭、山麻鸭、荆江鸭、绍兴鸭、缙云麻鸭等8个鸭种进行单核苷酸多态性分析。结果共发现3个突变位点,分别为230处(C→G)、244处(C... 详细信息

根据鸭生长激素基因编码区及调控区的序列设计8对引物,利用PCR-SSCP方法对北京鸭、西湖野鸭、樱桃谷鸭、金定鸭、山麻鸭、荆江鸭、绍兴鸭、缙云麻鸭等8个鸭种进行单核苷酸多态性分析。结果共发现3个突变位点,分别为230处(C→G)、244处(C→A)和3 701处(C→T)。前两处突变位于5′调控区,3 701处突变位于编码区第4外显子,但该编码区的突变是沉默突变,3′调控区表现了高度的保守性。统计结果发现:⑴在5′调控区基因座上,金定鸭的等位基因B频率显著高于其他品种;⑵在外显子4基因座上,基因型频率的分布与品种有关,且肉用型鸭的CC基因型频率显著高于蛋用型。可以推测,本研究所检测到的基因座可能与生产性能相关。

关键词：鸭生长激素基因单核苷酸多态性