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鸭腺病毒研究进展

养禽与禽病防治 2024年第3期 34-38页

作者：徐静汪威江心月汪婷徐欢殷世彬汪招雄长江大学动物科学技术学院湖北荆州434025

鸭腺病毒(duck adenovirus,DAdV)为腺病毒科,可分为鸭腺病毒A种和鸭腺病毒B种。A种包括鸭1型腺病毒(duck adenovirus 1,DAdV-1),B种包括鸭2型腺病毒(duck adenovirus 2,DAdV-2)、鸭3型腺病毒(duck adenovirus3,DAdV-3)以及鸭4型腺病毒(duckadenovirus 4,DAdV-4)。DAdV-1可感染于鸡和鸭,临床症状为产蛋率下降、子宫水肿;DAdV-2和DAdV-3临床上大部分发生于番鸭,因此也称番鸭“白肝病”,已广泛流行于广东、广西、福建和浙江等东南地区水禽养殖密集地;患鸭出现拉绿色粪便、神经症状,剖检可见肝脏“花斑肾”样、肠道出血和心包积液等临床症状。DAdV-4主要以心包积液、肝炎为主。本文从DAdV流行病学和临床症状、病原学、致病机制、疾病诊断、疫苗研究现状和防控措施等方面综述,为DAdV的综合防治提供参考。

关键词：鸭腺病毒白肝病临床症状

鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗的研制及其免疫原性研究

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鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗的研制及其免疫原性研究

作者：纪凤仙四川农业大学

学位级别：硕士

以鸭胚尿囊腔途径增殖鸭腺病毒,24-120 h死亡鸭胚和120 h后未死亡鸭胚置4℃冰箱过夜,无菌操作分别收集尿囊液。对鸭腺病毒连续传代,选择传代稳定的鸭胚尿囊液作为种毒,种毒鸭胚半数感染量为10-751/0.2ml, HA价1：216。用种毒制备疫苗抗... 详细信息

以鸭胚尿囊腔途径增殖鸭腺病毒,24-120 h死亡鸭胚和120 h后未死亡鸭胚置4℃冰箱过夜,无菌操作分别收集尿囊液。对鸭腺病毒连续传代,选择传代稳定的鸭胚尿囊液作为种毒,种毒鸭胚半数感染量为10-751/0.2ml, HA价1：216。用种毒制备疫苗抗原,加0.3%甲醛、37℃灭活48 h,加蜂胶佐剂,制备鸭腺病毒蜂胶灭活苗,蜂胶最终含量10mg/ml,疫苗安全检验合格。建立了间接ELISA法检测鸭腺病毒抗体。ELISA最佳反应条件为：鸭腺病毒抗原包被浓度2.45μg/ml,血清稀释倍数1：100,作用时间90 min。HRP-羊抗鸭IgG稀释度为1:2000。用32份阴性血清测得临界值为0.2310。建立的ELISA方法重复性好,板内变异系数1.09%-2.67%,板间变异系数2.79-4.06%,均小于10%。建立的方法与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、沙门氏菌阳性血清无交叉反应,特异性好。用制备的鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗免疫实验鸭,以间接ELISA和血凝抑制试验监测免疫鸭抗体消长规律。ELISA结果显示：一次免疫组种鸭免疫后第3d就可在血清中检测到血清呈阳性,第14d时抗体达到峰值(OD=0.628)随后缓慢下降,到免疫后56天仍为阳性;二次免疫组种鸭首免后第7d免疫第二次,共免疫2次,21d到达峰值(0.759)。结果显示：同时间点所测二次免疫组的OD450值显著高于一次免疫组(P鸭的抗体水平更高。免疫组的抗体水平显著高于对照组(P鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗免疫实验鸭,以MTT法和白细胞吞噬试验监测免疫鸭细胞免疫应答。MTT法检测鸭外周血淋巴细胞转化活性结果显示：一次免疫组在免疫后第3 d检测发现T淋巴细胞对ConA反应增强,且显著高于对照组(P<0.05)。到第10d到达峰值,然后快速下降。二次免疫组在首免后10-14 d,T淋巴细胞转化活性最高,随后逐渐下降。在本实验的整个测定过程中,在首免后第10d、 14d、21d、28d二次免疫组的转化率显著高于一次免疫组(P<0.05)和对照组(P<0.05),在42 d时两个试验组和对照组差异均不显著。白细胞吞噬试验结果显示：一次免疫组白细胞吞噬指数在免疫后21d达到最大值,吞噬指数为3.03,然后快速下降。二次免疫组白细胞吞噬指数一直大于一次免疫组和对照组,并且在首免后21 d到达最大值。

关键词：鸭腺病毒蜂胶体液免疫细胞免疫

检测鸭腺病毒的夹心间接ELISA方法建立与应用

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检测鸭腺病毒的夹心间接ELISA方法建立与应用

作者：魏志刚四川农业大学

学位级别：硕士

鸭腺病毒(Duck Adenovirus)属于腺病毒科腺胸腺病毒属(Atadenovirus),在临床上可引起鸡、鸭、鹅等家禽的产蛋下降综合征(Egg Drop Syndrome),所以也叫产蛋下降综合征病毒或者EDS病毒。产蛋下降综合征是1976年荷兰学者VanEck首次报道,所... 详细信息

鸭腺病毒(Duck Adenovirus)属于腺病毒科腺胸腺病毒属(Atadenovirus),在临床上可引起鸡、鸭、鹅等家禽的产蛋下降综合征(Egg Drop Syndrome),所以也叫产蛋下降综合征病毒或者EDS病毒。产蛋下降综合征是1976年荷兰学者VanEck首次报道,所以也称EDS76病毒。现已在世界上大部分国家分离到多株病毒。之前的观点认为鸭只是EDS76的储藏宿主,不引起产蛋鸭发病,但1984年Bartha等从产蛋下降的病鸭中分离到了病毒,国内外有关鸭产蛋下降综合征研究开始增多,各种研究表明鸭感染EDS76也会引起产蛋率严重下降。本实验从实验室保存的EDS76入手,制备出高免鸭抗EDS76抗体和兔抗EDS76抗体,建立了夹心间接ELISA检测EDS76的方法,并与HA检测法和常规PCR检测法在敏感性上进行了比较。1.检测鸭腺病毒的夹心间接EL ISA方法的建立本实验从鸭源减蛋综合征病毒AV71株抗原(EDS76)入手,用11日龄鸭胚进行复苏,增殖后收取尿囊液,用血凝和血凝抑制实验、PCR方法方法进行检测,确定其为EDS76。然后进行传代培养至第9代,其血凝价达到13-14且稳定后,用第9代EDS76分别免疫青年雄性兔子和产蛋初期母鸭,制备高免的鸭抗EDS76抗体和兔抗EDS76抗体,用饱和硫酸铵法提纯IgG。筛选的鸭抗EDS76IgG最佳包被浓度是1：40,最佳包被时间是37℃120 min,最适合的封闭液是1%的小牛血清白蛋白(BSA-PBST),最佳封闭时间是37℃60min, EDS76抗原与鸭抗EDS76IgG最佳作用时间是37℃60 min,兔抗EDS76IgG的稀释浓度为1：160,兔抗EDS76 IgG与EDS76抗原最佳作用时间为37℃60min, HRP标记的羊抗兔酶标抗体最佳稀释浓度是1：5000,酶标抗体的最佳作用时间是37℃90 min,显色液的最佳作用时间为37℃10 min。经过重复性实验、特异性实验和交叉性实验等检测,证明该方法是一种敏感、特异、快速、操作方便的方法。2.夹心间接ELISA检测鸭腺病毒抗原的应用应用建立起来的夹心间接ELISA对雅安周边草坝、上里、浦江、新津及眉山五个地方蛋鸭场105份样品进行检测,结果显示有12份样品为阳性,阳性率为11.4%。对产蛋初期母鸭进行攻毒后,产蛋率下降明显,攻毒后检测鸭体内的抗体和抗原,攻毒后7 d,抗体HI效价已经达到11,14 d后HI抗体效价基本稳定在13,21 d后HI抗体效价已略有下降。攻毒21d后,取鸭子血液及心、肝、脾、肺、卵巢、输卵管等组织器官,用建立的夹心间接ELISA方法和血凝实验进行检测,除心脏和肺脏外均测到了EDS76抗原。说明产蛋鸭一旦感染了EDSV,将长期带毒排毒。

关键词：鸭腺病毒血凝实验血凝抑制实验夹心间接ELISA

禽腺病毒四型重组病毒和鸭腺病毒三型重组病毒的构建

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禽腺病毒四型重组病毒和鸭腺病毒三型重组病毒的构建

作者：刘仙琦山东大学

学位级别：硕士

禽腺病毒血清四型（FAdV-4）是肝炎-心包积水综合征（HPS）的主要病原,HPS引起感染鸡心包积水和肝脏坏死,具有发病率高、无季节性、死亡率高的特点,近年来在我国多省均有报道,且感染率逐年上升。因此研究FAdV-4的基因功能、致病机制和... 详细信息

禽腺病毒血清四型（FAdV-4）是肝炎-心包积水综合征（HPS）的主要病原,HPS引起感染鸡心包积水和肝脏坏死,具有发病率高、无季节性、死亡率高的特点,近年来在我国多省均有报道,且感染率逐年上升。因此研究FAdV-4的基因功能、致病机制和减毒机理,为构建更安全有效的禽腺病毒载体疫苗奠定基础具有现实意义。本研究以2015年分离得到的FAdV-4高致病性毒株CH/HNJZ/2015为亲本株,构建了在其基因组1966 bp缺失突变处插入炎症因子IL-1β的受体拮抗剂IL-1Ra基因的重组质粒,将重组质粒转染鸡肝癌细胞,成功拯救出重组病毒rHNJZ-IL-1Ra-1966。对比重组病毒和亲本毒株的复制动态,IL-1Ra基因的插入不影响重组病毒的体外复制,同时免疫印迹实验和连续传代结果表明成功构建了能稳定表达IL-1Ra蛋白的重组禽腺病毒rHNJZ-IL-1Ra-1966。2014年,在我国广东一番鸭厂发生了以肝脏出血、肿大和坏死为特征的新型疫病,从发病番鸭体内纯化到一株病毒CH-GD-12-2014,全基因组序列分析和进化树分析表明该病毒属于禽腺病毒属,纤维蛋白基因和六邻体基因比对结果表明该病毒是一种新型的鸭腺病毒,命名为鸭腺病毒三型（DAdV-3）。近年来,D AdV-3在我国多地传播,虽致死率较低,但其在鸭群中阳性比例高、易二次感染,给家禽养殖行业造成重大经济损失,因此急需开发安全有效的防控手段以预防D AdV-3的感染。鸭甲型病毒性肝炎（DVHA）由鸭甲型肝炎病毒（DHAV）引起,DHAV感染情况复杂,常与其它鸭源病毒混合感染。目前DHAV广泛传播,不断出现新的变异株,为DVHA的防治带来了巨大挑战,实际生产中多在雏鸭感染后注射卵黄抗体来防控DHAV。因此开发安全有效的病毒载体疫苗以控制DVHA具有广阔的发展前景。本研究以DAdV-3毒株CH-GD-12-2014为亲本株,构建了表达DHAV-VP1蛋白的重组质粒,并成功拯救出重组病毒rDAdV3-DHAV-VP1。对比 rDAdV3-DHAV-VP1 和 CH-GD-12-2014 的生长曲线,DHAV-VP1 的插入对重组病毒在感染初期的复制有一定影响,还需要进一步的实验来验证。免疫印迹实验结果验证了 DHAV-VP1蛋白的表达,连续传代结果证明rDAdV3-DHAV-VP 1具有良好的遗传稳定性。番鸭细小病毒病（MPVD）是由番鸭细小病毒（MDPV）引起的雏番鸭病毒性疾病,在我国南方多省均有发生,感染该病的雏鸭生长发育迟缓,给番鸭养殖场带来巨大的损失。MPVD的防控和免疫目前依靠灭活疫苗、弱毒疫苗的接种,因此在规避传统疫苗的缺点的基础上开发一种安全有效的病毒载体疫苗对MDPV进行有效防治,仍具有现实意义。本研究以DAdV-3毒株CH-GD-12-2014为亲本株,构建了表达MDPV-VP3蛋白的重组质粒,并成功拯救出重组病毒。重组病毒rDAdV3-MDPV-VP3的最高病毒滴度与亲本相近,免疫印迹实验验证了重组病毒中MDPV-VP3蛋白的表达。结果表明,成功构建了表达MDPV-VP3蛋白的重组鸭腺病毒rDAdV3-MDPV-VP3。

关键词：禽腺病毒鸭腺病毒鸭甲型肝炎病毒番鸭细小病毒重组病毒载体

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一例鸭腺病毒病的诊断

中国动物保健 2023年第1期25卷 119-121,126页

作者：陈敏江苏省如皋高新技术产业开发区畜牧兽医站江苏南通226500

禽腺病毒感染在家禽中广泛存在,鸭群作为腺病毒的天然贮存宿主,近年来感染率不断上升,其中鸭3型腺病毒(DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大、发黄、质地变脆、坏死、呈弥散性出血;肾脏肿大、大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。DAd... 详细信息

禽腺病毒感染在家禽中广泛存在,鸭群作为腺病毒的天然贮存宿主,近年来感染率不断上升,其中鸭3型腺病毒(DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大、发黄、质地变脆、坏死、呈弥散性出血;肾脏肿大、大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。DAdV-3会引起雏番鸭发病和死亡,造成疫病流行,严重危害养殖业生产。本文就一例感染DAd V-3病鸭的诊断进行详细的描述和探讨。首先利用剖检的方法观察病鸭的大体病变,同时采集病料,制作组织切片进行镜检观察。然后利用细胞接种的方法获得病毒液,提取病毒DNA。利用PCR实验的方法对禽腺病毒特定DNA片段进行扩增,结果显示扩增条带与标准DAdV-3条带大小相似,接种细胞可见细胞变圆、团聚、空泡化现象,表明该疾病为鸭腺病毒病。该论文服务于进一步的科研分析,为深入探究鸭腺病毒病的致病机理打下基础。

关键词：鸭腺病毒 DAdV-3 诊断组织切片 PCR实验

增免灵对SOD酶活性和鸭腺病毒HI抗体效价的影响

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中兽医学杂志 2002年第3期 3-5页

作者：翟少钦王天益程安春付利芝重庆市养猪科学研究院重庆市402460 四川农业大学

本研究应用中药复方增免灵 (即黄连解毒汤加味 )与鸭腺病毒蜂胶复合佐剂灭活疫苗配合使用 ,通过检测不同时间红细胞中的铜锌超氧化物歧化酶 (CuZn -SOD)的活性 ,血中鸭腺病毒HI抗体效价 ,结果表明该复方能极显著提高红细胞中超氧化物歧... 详细信息

本研究应用中药复方增免灵 (即黄连解毒汤加味 )与鸭腺病毒蜂胶复合佐剂灭活疫苗配合使用 ,通过检测不同时间红细胞中的铜锌超氧化物歧化酶 (CuZn -SOD)的活性 ,血中鸭腺病毒HI抗体效价 ,结果表明该复方能极显著提高红细胞中超氧化物歧化酶的活性 ,P 鸭腺病毒HI抗体效价。在第 14天时显著高于对照组 ,P 鸭腺病毒蜂胶复合佐剂灭活疫苗的免疫力。揭示了SOD酶与机体的免疫功能有关。

关键词： SOD酶活性鸭腺病毒 HI抗体效价免疫功能增兔灵 CuZn-SOD

鸭源I群血清3型禽腺病毒分离株的生物学特性分析及荧光定量PCR检测方法建立

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鸭源I群血清3型禽腺病毒分离株的生物学特性分析及荧光定量PCR检...

作者：姜雪芹佛山科学技术学院

学位级别：硕士

禽腺病毒血清3型（Fowl Adenovirus type 3,FAdV-3）,主要感染水禽（鸭为主）,称鸭源I群血清3型禽腺病毒（Duck Adenovirus type 3,DAdV-3）。该病是一种以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏肿大及坏死为特征的新发水禽疫病。虽病毒力弱,但具有... 详细信息

禽腺病毒血清3型（Fowl Adenovirus type 3,FAdV-3）,主要感染水禽（鸭为主）,称鸭源I群血清3型禽腺病毒（Duck Adenovirus type 3,DAdV-3）。该病是一种以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏肿大及坏死为特征的新发水禽疫病。虽病毒力弱,但具有极强的传播能力,由于该病感染后引发鸭出现免疫抑制导致继发感染,因此对水禽尤其是鸭养殖业造成巨大损失。本研究以DAdV-3分离株开展生物学特性、致病性及血清交叉保护作用的研究,为后续深入研究该病的致病机理奠定基础。本研究通过从广东省惠州市内3个不同养殖场采集18份病料（10份番鸭、3份鹅、5份樱桃谷鸭）进行分离鉴定,12份为核酸阳性,阳性率为66.6%。经序列分析后选取差异性较大的三株代表毒株（825-1-2021、FRK-2021、XZD-2021）。通过TCID试验测得825-1-2021株为10TCID/mL、FRK-2021株TCID为10TCID/mL,XZD-2021株TCID为10TCID/mL),进而选取XZD-2021株进行生物学特性研究、致病性研究及检测方法建立。结果表明:此毒株与Duck adenovirus 3 CH-GD-12-2014株（Gen Bank:KR135164.1）核苷酸相似性99.9%,命名为Duck adenovirus 3 CH-GD-XZD-2021株（简称XZD-2021）。基于此毒株基因建立DAdV-3 SYBR GreenⅠqPCR检测。结果表明:标准曲线为y=-3.335x+46.714,相关系数R=0.988,扩增效率E=99.4%,组内和组间重复试验变异系数均低于0.95%;敏感度高:最低可检测10～2copies/μL病毒拷贝数;特异性强,与鸭群常见传染病病原无交叉反应,Tm值为（81.79±0.11）℃;稳定性好。本研究检测方法的成功建立为后续开展DAdV-3流行病学调查研究奠定基础。为探究XZD-2021分离株对LMH、DEF的致病性,以0.2ml/孔的病毒量接种病毒,观察病变状况。结果显示:该毒株对细胞致病性较强,可导致细胞出现肿大、破碎等病变。生长曲线结果显示:对LMH细胞致病性最强,在接毒后36小时左右就开始出现细胞病变,而DEF在接毒后48小时才开始出现细胞病变,表明分离株XZD-2021更为适应LMH细胞,增殖速率较快,最佳收获病毒液时间为接毒后36～60h,可获得较高滴度病毒。本研究分离株通过接种LMH细胞进行传代,第7代时出现明显的CPE,经蚀斑纯化后,测定TCID结果为:FRK-2021株TCID为10TCID/mL,XZD-2021株TCID为10TCID/mL,825-1-2021株为10TCID/mL。结果显示各分离株具有良好的病毒滴度,表明本次病毒增殖效果较好。为进一步探究分离株XZD-2021对雏鸭的致病性,本实验选用(选用120只3日龄的番鸭,平均分成4组,每组30只,用FRK-2021、XZD-2021、825-1-2021 F7病毒进行攻毒。通过腿肌注射10TCID/0.2ml病毒液接种至3日龄雏鸭。第4组为对照（注射等体积生理盐水）。攻毒后观察21天。结果显示:分离株XZD-2021株在临床表现、解剖病变及病理切片病变最明显、FRK-2021次之,825-1-2021株致病最弱。感染后鸭群均出现不同程度的雏鸭精神不振、卧地不起、翎毛松乱;解剖病变可见肝脏出现不同程度肿大和出血,部分感染严重的雏鸭出现“肝脏黄化”或“肝脏白化”;心脏出现不同程度的心包积液;脾脏出现严重肿大及出血;肾脏肿大严重并伴随出血,胸腺及胰腺虽然未出现肿大,但出现不同程度出血;病理切片结果显示肝脏、脾脏、肾脏、胸腺及胰腺均出现不同程度的细胞肿胀、出血。各组死亡情况:XZD-2021株死亡26只,死亡率为86.6%,FRK-2021株死亡22只,死亡率为73.3%,825-1-2021株死亡16只,死亡率为53.3%。病毒载量分析结果显示:病毒具有广泛亲嗜性,对肝脏、肾脏、脾脏及胸腺亲嗜性最高,肝脏病毒载量最高。最后本研究还对实验室保存标准疫苗株Fadv-4、Fadv-8a、Fadv-11株与XZD-2021分离株做进行血清中和试验,验证其有无交叉保护作用。结果显示:各血清型同型血清中和实验结果均表现为强阳性,DAdV-3、Fadv-4、Fadv-8a与Fadv-11交叉中和试验亦表现为阳性,DAdV-3血清可中和Fadv-4、Fadv-8a、Fadv-11,且结果显示为阳性。为研究三价苗提供一定指导意义。总结本研究通过对XZD-2021分离株进行分子生物学分析,建立qPCR检测方法;利用LMH、DEF细胞系,雏鸭感染实验和血清交叉中和试验,探究该分离株的致病性,与疫苗株的血清交叉保护能力

关键词：禽腺病毒鸭腺病毒序列分析荧光定量致病性交叉中和

2019—2020年山东省中西部地区鸭源禽腺病毒病原学检测及遗传进化分析

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中国动物检疫 2021年第6期38卷 6-12页

作者：宋一诺邱杨刘奎昊赵伊然赵君牛玉娟李宁刘思当山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省泰安第二中学山东泰安271001 青岛大学生物医学研究院山东青岛266071

禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)2015年开始在我国鸡群中大规模流行,目前在鸭群中的检出也日益频繁。为了解山东省鸭群中FAdV流行及遗传变异情况,2019—2020年从山东省中西部8个地区21个鸭场,收集病死鸭组织样品237份,通过PCR进行病原... 详细信息

禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)2015年开始在我国鸡群中大规模流行,目前在鸭群中的检出也日益频繁。为了解山东省鸭群中FAdV流行及遗传变异情况,2019—2020年从山东省中西部8个地区21个鸭场,收集病死鸭组织样品237份,通过PCR进行病原学检测,并将阳性病料接种鸡肝癌细胞进行病毒分离,扩增其六邻体(Hexon)基因进行遗传进化和氨基酸位点突变分析;利用蚀斑试验和高通量测序纯化鸭源FAdV(命名为CHSD-2)并分析其全基因组序列。结果显示:237份样品中,有68份检测为FAdV阳性,阳性检出率为28.69%;冬、夏季节FAdV阳性检出率较高。共分离到16株鸭源FAdV,全部为血清4型(FAdV-4);所有分离毒株与鸡源FAdV-4亲缘关系最近,与参考毒株的Hexon蛋白氨基酸同源性为99.1%~99.9%,仅有个别氨基酸发生突变,分离毒株间的Hexon氨基酸同源性为98.6%~100%;纯化后分离毒株CHSD-2基因组全长43724 bp,与鸡源FAdV-4参考毒株全基因组核苷酸同源性为100%。结果表明,FAdV在山东省中西部地区鸭群中分布较为广泛,与鸡群中流行的毒株相同,未发生大的变异,因此使用疫苗免疫依然是防控该病的有效措施。

关键词：鸭腺病毒流行病学病原检测遗传变异