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鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体的制备及应用效果评价

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畜牧与饲料科学 2020年第6期41卷 100-105页

作者：李丽琴程雪娇王宇鹏孙珊珊石青青宋秀梅于海超王建天津市中升挑战生物科技有限公司天津300380

为了有效预防鸭短喙侏儒综合征,采用新型鸭细小病毒毒株(SD03株)制备了一种鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体。采用琼脂扩散试验和中和试验进行蛋黄抗体效价的测定,分析蛋黄抗体的消长规律,确定最佳免疫程序、收蛋时间和临床应用效价标准,... 详细信息

为了有效预防鸭短喙侏儒综合征,采用新型鸭细小病毒毒株(SD03株)制备了一种鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体。采用琼脂扩散试验和中和试验进行蛋黄抗体效价的测定,分析蛋黄抗体的消长规律,确定最佳免疫程序、收蛋时间和临床应用效价标准,并对制备的3批供试品进行临床应用效果评价。结果表明:该研究成功制备了一种鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体,该抗体琼扩效价和中和效价均在三免15 d达到高峰,分别为1∶64和1∶640,由此确定高免蛋收集时间为三免15 d;基础免疫完成后,最佳加强免疫时间为每隔30 d进行一次加强免疫,可使抗体效价一直维持在较高水平;确定了抗体琼扩效价≥1∶32或中和效价≥1∶320为临床应用效价标准。3批供试品临床应用试验结果表明,该鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体安全性好,对鸭短喙侏儒综合征有良好的预防和紧急预防效果。

关键词：鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体效价测定临床应用

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鸭短喙-侏儒综合征病原的初步鉴定

中国动物传染病学报 2015年第6期23卷 1-6页

作者：李传峰李琦陈宗艳唐井玉刘光清中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

2014年下半年以来,在我国华东地区商品肉鸭养殖地区暴发了一种以生长迟缓、鸭喙变短、舌头外露下垂、跛行、瘫痪、拉稀以及翅腿易折断为主要临床特征的传染性疾病,暂命名为鸭短喙-侏儒综合征。剖检时可见发病鸭胰腺、肺脏和胸腺等组织... 详细信息

2014年下半年以来,在我国华东地区商品肉鸭养殖地区暴发了一种以生长迟缓、鸭喙变短、舌头外露下垂、跛行、瘫痪、拉稀以及翅腿易折断为主要临床特征的传染性疾病,暂命名为鸭短喙-侏儒综合征。剖检时可见发病鸭胰腺、肺脏和胸腺等组织出血。组织病理学变化主要表现为心脏、胰腺、肾脏、肺脏和肝脏等组织细胞变性、坏死以及充血、出血。RT-PCR/PCR检测结果显示,在患鸭组织中存在类似鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)的特异性核酸,未见其他水禽病毒核酸。系统进化树分析显示本病病原与经典GPV密切相关。免疫组化进一步检测发现,患鸭组织中存在GPV特异性的抗原。鉴于本病与经典水禽细小病毒病的临床表征、剖检及组织病理学变化的差异性,我们初步确定鸭短喙-侏儒综合征病原为一种与GPV密切相关的新型鸭细小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)。

关键词：鸭短喙侏儒综合征鹅细小病毒免疫组化 PCR

新型鹅细小病毒徐州分离株NGPV XZ-01的分离和致病性研究

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畜牧与兽医 2024年第2期56卷 82-88页

作者：迟兰蔺辉星徐州生物工程职业技术学院江苏徐州221006 南京农业大学江苏南京210095

为了研究2021年6月江苏徐州某商品半番鸭养殖场所发疾病的病原及其致病性,从该养殖场发病的半番鸭群中无菌采集肝脏、脾脏、肠道等临床样品,采用PCR方法对病原进行鉴定,将所采集样本处理后接种至非免疫鸭胚中,连续多次传代后,对鸭胚组... 详细信息

为了研究2021年6月江苏徐州某商品半番鸭养殖场所发疾病的病原及其致病性,从该养殖场发病的半番鸭群中无菌采集肝脏、脾脏、肠道等临床样品,采用PCR方法对病原进行鉴定,将所采集样本处理后接种至非免疫鸭胚中,连续多次传代后,对鸭胚组织及尿囊液进行病理学、电镜检查及动物试验。结果显示:PCR检测结果鉴定为新型鹅细小病毒阳性;鸭胚尿囊液在电镜下观察到细小病毒粒子,胚体病理切片观察显示符合细小病毒所致病变;动物试验显示,攻毒试验鸭主要表现为生长发育明显受阻,大部分试验鸭成为“僵鸭”,于20日龄后陆续出现上下喙变短、舌头外露等症状,剖检病变主要为肠内容物稀薄及泄殖腔膨大,肠道组织切片观察显示肠绒毛上皮细胞坏死、脱落及部分肠腺坏死,符合鸭短喙侏儒综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)所致雏鸭的症状与病变。结果表明:该肉鸭养殖场所发疾病为SBDS,将该场分离的病毒命名为新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)。

关键词：鸭短喙侏儒综合征新型鹅细小病毒徐州分离株分离鉴定动物试验

新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)对半番鸭生长发育的影响

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黑龙江畜牧兽医 2024年第12期 64-68,126-128页

作者：迟兰蔺辉星徐州生物工程职业技术学院江苏徐州221006 南京农业大学动物医学院南京210095

为了探究新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)对半番鸭生长发育的影响,试验将180只健康非免疫半番鸭随机分为3组,分别为对照组、3日龄攻毒组和7日龄攻毒组,每组60只,对照组于3日龄时皮下注射灭菌生理盐水0.2 mL,3日龄攻毒组和7日龄... 详细信息

为了探究新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)对半番鸭生长发育的影响,试验将180只健康非免疫半番鸭随机分为3组,分别为对照组、3日龄攻毒组和7日龄攻毒组,每组60只,对照组于3日龄时皮下注射灭菌生理盐水0.2 mL,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组分别于3日龄和7日龄时皮下注射NGPV XZ-01株病毒液(第7代,效价为5.7 lgELD_(50)/mL)0.2 mL,攻毒后观察并记录各组的生长发育情况、临床症状、发病和死亡情况,并对喙长和体重进行测定,于25日龄时全部扑杀,进行剖检、病理切片观察和X光检查。结果表明:攻毒后,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组均生长发育迟缓或成僵鸭;24日龄时,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组的体型明显小于对照组,3日龄攻毒组体型明显小于7日龄攻毒组。试验期间,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组表现为精神萎靡不振、喜卧、打堆、排白色或黄白色粪便,部分患鸭出现运动障碍、瘫痪等症状;随着日龄的增长,上下喙变短及舌头外露的症状逐渐明显。其中3日龄攻毒组发病率为90.0%、死亡率为11.7%;7日龄攻毒组发病率为76.7%、死亡率为6.7%;对照组无发病和死亡情况。10~22日龄时,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组的体重和喙长均显著低于对照组(P喙长均显著低于7日龄攻毒组(P喙、翅、腿等部位明显小于对照组,且胫骨长度远低于对照组。说明NGPV XZ-01株可使半番鸭的生长发育明显受阻,具有很强的致病性,且对半番鸭的影响随感染日龄的增加而减小。

关键词：鸭短喙侏儒综合征新型鹅细小病毒徐州分离株半番鸭生长发育

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新型鹅细小病毒四川株的全基因组扩增及遗传进化分析

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四川农业大学学报 2017年第4期35卷 574-580页

作者：葛志琪刘亚刚陈舜朱德康刘马峰汪铭书贾仁勇孙昆峰杨乔吴英赵新新程安春西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 四川农业大学动物医学院预防兽医研究所成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治与研究中心成都611130 四川农业大学动物医学院动物疾病与人类健康四川省重点实验室成都611130

【目的】了解四川地区新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)的分子生物学特征及遗传变异情况。【方法】根据Gen Bank中发表的新型鹅细小病毒的全基因组序列,设计5对兼并引物采用PCR方法分段扩增新型鹅细小病毒四川株的全基因组... 详细信息

【目的】了解四川地区新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)的分子生物学特征及遗传变异情况。【方法】根据Gen Bank中发表的新型鹅细小病毒的全基因组序列,设计5对兼并引物采用PCR方法分段扩增新型鹅细小病毒四川株的全基因组序列,并利用DNAstar等生物信息分析软件对获得的基因组序列进行分子特性与遗传演变分析。【结果】获得的新型鹅细小病毒四川株(命名为SC16)全长5 109 nt,5′端ITR长408 nt,3′端ITR长407 nt,NS基因长1 884 nt,VP基因长2 199 nt。序列比对和遗传进化分析显示,SC16株与山东分离株SDLC01(KT343253.1)及QH15(KT751090.1)的基因组核苷酸同源性高达99%,与两者的亲缘关系最近,基于NS及VP蛋白的氨基酸序列系统进化树分析结果与此一致。但SC16株的5′端ITR还是发生了一定的变异:与SDLC01及QH15相比,多了几个14 nt的插入片段。【结论】研究结果丰富了NGPV的分子生物学资料。

关键词：新型鹅细小病毒鸭短喙侏儒综合征全基因组扩增遗传进化分析

新型鸭细小病毒DS15株的分离鉴定及VP2蛋白在昆虫细胞中的表达

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新型鸭细小病毒DS15株的分离鉴定及VP2蛋白在昆虫细胞中的表达

作者：李琦甘肃农业大学

学位级别：硕士

2014年以来,中国东部许多肉鸭养殖场发生了一种新的鸭病毒性传染病,临床上主要表现为雏鸭生长发育迟缓,上下喙萎缩,鸭舌头肿大外伸,行走困难。暂命名为鸭短喙侏儒综合症（Short beak and dwarfism syndrome,SBDS）。该病病死率很低,但... 详细信息

2014年以来,中国东部许多肉鸭养殖场发生了一种新的鸭病毒性传染病,临床上主要表现为雏鸭生长发育迟缓,上下喙萎缩,鸭舌头肿大外伸,行走困难。暂命名为鸭短喙侏儒综合症（Short beak and dwarfism syndrome,SBDS）。该病病死率很低,但发病率10%0%,部分鸭群发病率达到50%。给养鸭业造成较为严重的经济损失。由于这是一种在我国新出现的鸭传染病,其致病病原尚不清楚,更缺乏有效的疫苗或治疗性药物。为此,本研究对采自安徽省砀山县某养殖场发病鸭的病料进行了病原分离和鉴定,同时还对其全基因组序列进行了克隆和测序,此外我们还利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中尝试表达了病原的结构蛋白,为进一步研制新型疫苗或药物奠定基础。首先,对砀山发病鸭实质脏器进行了RT-PCR/PCR检测,在排除其他常见鸭病毒性传染病病原的前提下,初步确定该病病原为新型鸭细小病毒（Novel duck parvovirus,NDPV）。然后,将组织研磨液接种SPF鸭胚,盲传3代后鸭胚出现规律性死亡。在鸭胚尿囊液中检测到了新型鸭细小病毒,其病毒滴度（ELD50）为10-4.2/0.2mL。将感染鸭胚的尿囊液进行浓缩和纯化,在扫描电镜下可见直径20nm左右,正二十面体病毒粒子。用病毒液感染1日龄雏鸭,可复制出与临床症状相似的鸭短喙侏儒症状,进一步证实分离的鸭细小病毒是造成鸭短喙侏儒综合症的关键性病原。参照Genbank登录的鹅细小病毒（Goose parvovirus,GPV）B株的基因序列,我们设计了6对特异性引物,对NDPV DS15株的全基因序列进行了分段扩增。试验结果显示,NDPV DS15株病毒基因组全长5104nt,结构与鹅细小病毒相似,两端为ITR,中间为两个大开放阅读框。与其他水禽细小病毒进行全基因组同源性比对,分析结果显示DS15株与鸭短喙侏儒症分离株GPV SDLC01同源性最高,达到99.8%,与其他GPV同源性在92.6%7.2%之间,与番鸭细小病毒（Muscovy parvovirus,MDPV）同源性在81.2%5.4%之间。DS15株NS1蛋白和VP1蛋白的氨基酸序列分析结果显示,与传统的GPV相比,我们分离到的NDPV DS15株和其他几株鸭短喙侏儒症分离株在NS1和VP1蛋白氨基酸水平具有极高相似性,氨基酸突变情况基本相同。系统发育进化树显示,水禽细小病毒分为GPV和MDPV两大分支,DS15株与其他几个SBDS分离株处于GPV分支且单独形成一个小分支。为了制备检测NDPV的多克隆抗体,本文用PCR法扩增NDPV的VP3基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21菌株,以IPTG诱导表达重组VP3蛋白,然后利用包涵体纯化方法纯化重组VP3蛋白,免疫试验兔获得多克隆抗体。Western-blot检测结果表明,该抗体能与重组的NDPV VP3蛋白及自然感染的NDPV发生反应,证明制备的抗体具有良好的抗原反应性。为给研发抗NDPV感染的亚单位疫苗提供候选抗原,我们用PCR方法扩增了DS15株VP2基因,然后将其插入供体质粒pFastBacHTA中,构建重组pFastBacHTA-VP2供体质粒。再转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-HTA-VP2。用该重组质粒转染sf9细胞,48h后分别用间接免疫荧光和Western blot试验检测靶基因的表达。结果表明我们在sf9细胞中成功表达出VP2蛋白,电镜负染结果进一步证明,所表达的重组VP2蛋白能够在昆虫细胞中自我组装形成病毒样颗粒。动物实验结果表明所制备的病毒样颗粒具有良好免疫原性。这些研究结果为进一步研制NDPV诊断抗原和病毒样颗粒疫苗奠定了基础。

关键词：鸭短喙侏儒综合征新型鸭细小病毒全基因序列多克隆抗体病毒样颗粒