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平菇和白玉菇碱提多糖与半乳凝集素-1相互作用的研究

平菇和白玉菇碱提多糖与半乳凝集素-1相互作用的研究

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作者：吴润杰东北师范大学

学位级别：硕士

半乳凝集素-1(Galectin-1)是典型的原型半乳凝集素,拥有一个结构非常保守的糖识别结构域(CRD),可特异性的识别半乳糖苷键,并与含有半乳糖苷键的配体可逆结合。半乳凝集素-1在水溶液中单体之间会通过疏水相互作用形成二聚体,并以二聚体... 详细信息

半乳凝集素-1(Galectin-1)是典型的原型半乳凝集素,拥有一个结构非常保守的糖识别结构域(CRD),可特异性的识别半乳糖苷键,并与含有半乳糖苷键的配体可逆结合。半乳凝集素-1在水溶液中单体之间会通过疏水相互作用形成二聚体,并以二聚体的形式行使其生物学功能。半乳凝集素-1在细胞发育,凋亡,粘附等生理过程中发挥着重要的作用。同时,它与肿瘤的发生、发展密切相关,在多种肿瘤的生成、转移、免疫逃逸的生理进程中半乳凝集素-1都起着重要的作用。实验表明某些多糖是半乳凝集素的天然抑制剂,通过于半乳凝素作用产生免疫调剂、抗肿瘤、延缓衰老、抗氧化等等活性。真菌多糖来源广泛,毒副作用小,活性多样,日益受到关注。本文分离纯化了两中真菌中性糖,然后使用红细胞凝集阻抑实验研究两种糖与半乳凝集素-1的相互作用,研究内容和结果如下:首先,本文利用分子生物学手段重组半乳凝集素-1与pET 28a质粒,构建了半乳凝集素-1的原核表达载体。用重组质粒转化大肠杆菌表达体系,诱导基因表达,分离纯化出了半乳凝集素-1蛋白。利用鸡红细胞凝集实验检测半乳凝集素-1的活性实验结果表明,所制备的半乳凝集素-1可以使鸡红细胞发生凝集,最小凝集浓度为0.6μg/mL。在含有40%(v/v)聚乙二醇3500(PEG3500)+0.1 M LiCl中成功收集到半乳凝集素-1结晶,X-衍射得到了分辨率为3.17?的半乳凝集素-1的晶体结构。使用稀碱提取平菇和白玉菇多糖,得到平菇和白玉菇总多糖APOP和AHMP,得率分别为1.67%和1.41%。采用DEAE-纤维素离子交换层析分离总多糖,得到两个中性糖级分,APOP-N和AHMP-N。经HPLC检测,APOP-N的单糖组成为Man:Glc:Gal:Me-Gal:Fuc=13.8:60.6:19.4:4.7:2.1,AHMP-N的单糖组成为Man:Glc:Gal:Fuc=12.3:34.2:40.7:12.8。采用半乳凝集素-1引起的红细胞凝集阻抑实验检测APOP-N和AHMP-N级分。实验结果显示,平菇中性糖APOP-N几乎不能阻抑半乳凝集素-1对鸡红细胞的凝集作用。而白玉菇中性糖AHMP-N却可以在较低浓度阻抑红细胞的凝集,最低阻抑浓度为0.15 mg/mL。由此,AHMP-N可能是一个较好的半乳凝集素-1配体。研究结果为开发真菌提供了理论依据和指导.

关键词：半乳凝集素-1 晶体结构真菌多糖鸡红细胞凝集

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