检索结果-南通市图书馆

Rho-GTP酶类及相关调控因子在足细胞中作用的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肾脏病杂志 2020年第8期36卷 652-656页

作者：杜知微郑必霞张爱华南京医科大学附属儿童医院肾内科南京210008 南京医科大学附属儿童医院重点实验室南京210008

足细胞又称肾小球脏层上皮细胞,是构成肾小球滤过膜功能的重要屏障。以肌动蛋白为基础的细胞骨架在维持足细胞的正常功能中起着重要作用。本文综述了近年来发现的Rho-GTP酶类(Rho-GTPases)及相关调控因子在足细胞肌动蛋白骨架调控中的... 详细信息

足细胞又称肾小球脏层上皮细胞,是构成肾小球滤过膜功能的重要屏障。以肌动蛋白为基础的细胞骨架在维持足细胞的正常功能中起着重要作用。本文综述了近年来发现的Rho-GTP酶类(Rho-GTPases)及相关调控因子在足细胞肌动蛋白骨架调控中的研究进展。在足细胞中,以RhoA、Rac1和Cdc42为代表的Rho-GTPases在调控肌动蛋白细胞骨架中起着核心作用。

关键词：足细胞细胞骨架蛋白尿肾病综合征 Rho⁃GTPase 鸟嘌呤核苷酸交换因子

转运蛋白颗粒复合体Ⅲ亚基MoTrs85调控稻瘟病菌自噬的机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

转运蛋白颗粒复合体Ⅲ亚基MoTrs85调控稻瘟病菌自噬的机制研究

作者：崔馨月安徽农业大学

学位级别：硕士

由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)侵染引起的稻瘟病是最具毁灭性的水稻真菌病害,对水稻的安全生产造成极大威胁。自噬在稻瘟病菌侵染过程中发挥重要作用,因此,对稻瘟病菌自噬及其调控机理的研究已成为植物病理学研究领域的热点。先前的... 详细信息

由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)侵染引起的稻瘟病是最具毁灭性的水稻真菌病害,对水稻的安全生产造成极大威胁。自噬在稻瘟病菌侵染过程中发挥重要作用,因此,对稻瘟病菌自噬及其调控机理的研究已成为植物病理学研究领域的热点。先前的研究表明自噬与囊泡运输相偶联,除自噬相关基因(Autophagy-related genes,ATGs)参与自噬外,涉及囊泡运输的Rab蛋白也参与自噬过程。鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide-exchange factors,GEFs)调控Rab蛋白的活性。鉴于此,对稻瘟病菌中鸟嘌呤核苷酸交换因子的研究,有助于深入了解稻瘟病菌自噬过程。转运蛋白颗粒(Transport protein particle,TRAPP)复合体属于多亚基的栓系复合体,它是Rab蛋白的GEF。其中,酵母(Saccharomyces cerevisiae)中TRAPP III复合体是Ypt1(Rab1同源蛋白)的GEF,其特异亚基Trs85在GEF功能和自噬中发挥重要作用,但Trs85同源蛋白在植物病原真菌中尚未报道。本文在稻瘟病菌中鉴定到Trs85的同源蛋白MoTrs85,利用同源重组技术获得Mo TRS85的缺失突变体ΔMotrs85,并对其进行表型分析发现缺失突变体ΔMotrs85导致稻瘟病菌生长速率降低、产孢减少、隔膜发育异常、附着胞形成率下降、糖原、脂质转移延迟、囊泡运输和内吞过程缺陷,以及致病力下降;进一步研究发现Mo TRS85参与调控Mo Ypt1的激活和稳定性,与野生型菌株相比,Mo TRS85缺失导致GFP-Mo Ypt1的荧光信号明显及其蛋白表达显著降低。为揭示MoTrs85调控稻瘟病菌生物学功能的分子机理,本文通过免疫沉淀结合质谱分析、生物信息分析和互作验证,发现Mo Snx41与MoTrs85互作。已有报道表明Mo Snx41参与内涵体转运和过氧化物酶体自噬,鉴于此,我们推测Mo Snx41与MoTrs85互作协同调控膜运输。总之,本研究结果揭示MoTrs85调控自噬介导稻瘟病菌致病的分子机制,为开发环境友好型杀菌剂提供理论依据和参考靶点。

关键词：稻瘟病菌致病性转运蛋白颗粒复合体鸟嘌呤核苷酸交换因子自噬

拟南芥鸟苷酸交换因子RopGEF4/8基因表达及其响应ABA信号的初步分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

拟南芥鸟苷酸交换因子RopGEF4/8基因表达及其响应ABA信号的初步分...

作者：宋红弟南京农业大学

学位级别：硕士

ROP GTPase(简称ROP蛋白)是植物特有的一类小G蛋白,通过GTP结合的活性形式和GDP结合的非活性形式参与调节植物的生长发育和逆境反应。鸟苷酸交换因子(GEF)是ROP蛋白活性调节因子之一,可以使GDP结合的非活性的ROP转换为GTP结合的活性ROP... 详细信息

ROP GTPase(简称ROP蛋白)是植物特有的一类小G蛋白,通过GTP结合的活性形式和GDP结合的非活性形式参与调节植物的生长发育和逆境反应。鸟苷酸交换因子(GEF)是ROP蛋白活性调节因子之一,可以使GDP结合的非活性的ROP转换为GTP结合的活性ROP。拟南芥中存在14个基因编码该类RopGEFs蛋白,这14个RopGEFs成员均含保守的DUF315区域以及变化的N-和C-端。目前关于RopGEFs在拟南芥生长发育和逆境信号中的作用尚不明确。因此,本文采用拟南芥野生型(哥伦比亚生态型)和T-DNA插入的单突变体材料,初步探究了RopGEFs家族中RopGEF4和RopGEF8基因表达模式,及其在ABA信号中的作用。具体研究结果如下：利用荧光定量qRT-PCR技术初步分析了RopGEF4和RopGEF8在转录水平上的表达模式,结果表明：RopGEF4在各个组织中均有不同程度的表达,而RopGEF8主要在花中表达。具体来说：RopGEF4在花中的表达量最高,其次是根、果荚及茎,在幼苗中的表达量最低;RopGEF8主要在花中表达,其次是果荚,在其他的组织中检测到的表达量很低。为了进一步确定RopGEF4和RopGEF8的组织表达模式,我们构建了RopGEF4和RopGEF8启动子驱动的GUS(p-葡萄糖甘酸酶)报告基因表达载体,采用花浸染法(Floral Dipping)转化拟南芥,阳性植株纯和后代GUS染色结果与qRT-PCR结果基本一致,有意思的是：RopGEF4在幼苗中的表达量虽然低但也有一定的特异性,只在幼苗子叶主叶脉尖端表达;而RopGEF8启动子驱动的GUS报告基因主要在花中表达。我们构建了35S启动的RopGEF4的绿色荧光蛋白(GFP)和RopGEF4特异启动子驱动的黄色荧光蛋白(YFP)原生质体瞬时表达载体。利用激光共聚焦显微镜和质膜染料FM4-64确定了RopGEF4的亚细胞定位。研究结果表明：不管是35S驱动的GFP标记的RopGEF4还是RopGEF4特异启动子驱动的YFP均定位在原生质体细胞的细胞膜、细胞质和细胞核中。RopGEF4是如何通过这样的细胞定位调节相应ROP蛋白的活性或发挥功能的的还需要进一步的共定位实验数据研究。本文还对RopGEF4和RopGEF8在ABA介导的一系列生理过程中的作用进行了初步研究。首先,100μM ABA处理生长一个月左右的拟南芥苗,发现在叶片中,RopGEF4表达量开始下降,3h后上升正常水平,6h又开始下降;在根中,RopGEF4在0.5h时有一个上升高峰随后一直下降。RopGEF8在根和叶片中均先上升后下降,在ABA处理1h时后达到上升的高峰期。我们采用拟南芥野生型和T-DNA插入的突变体材料进行了ABA处理实验。结果表明：ropgef8对ABA介导的抑制种子萌发不敏感,而ropgef4种子萌发表型与野生型没有明显差异;两个材料对ABA介导的抑制根的伸长的表型均与野生型一样。另外,ropgef4对ABA诱导的气孔关闭不敏感。总之,本文采用细胞生物学、分子生物学、植物生理学实验方法初步确定了RopGEF4和RopGEF8的基因表达模式和RopGEF4的亚细胞定位;通过ABA处理突变体的生理实验我们初步判断RopGEF4和RopGEF8参与ABA介导的信号转导过程,但是具体作用机制还需要进一步的实验证明。

关键词：拟南芥鸟嘌呤核苷酸交换因子基因表达脱落酸

丹参SmRopGEF1基因的克隆、亚细胞定位与表达分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国现代中药 2023年第6期25卷 1199-1206页

作者：陈颖满金辉石玥黄钰莹张晓芹王馨刘珊瑚何高洁安克露王晓晖魏胜利北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学生命科学学院北京102488 北京中医药大学北京中医药研究院中药现代研究中心北京102488

目的:克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法:根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息... 详细信息

目的:克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法:根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息学方法分析SmRopGEF1蛋白序列特征及进化关系;构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并转化至大肠埃希氏菌中诱导表达,构建35S启动的SmRopGEF1的绿色荧光蛋白原生质体瞬时表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察SmRopGEF1的亚细胞定位;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测逆境胁迫(低温、盐及干旱)和激素诱导(生长素、脱落酸、茉莉酸甲酯)下的基因表达量。结果:丹参SmRopGEF1基因开放阅读框(ORF)全长为1701 bp,编码566个氨基酸,蛋白相对分子质量是62362.99。生物信息学分析显示SmRopGEF1蛋白含有1个PRONE保守结构域,系统进化树分析表明SmRopGEF1蛋白与芡欧鼠尾草和一串红RopGEF1蛋白为高同源蛋白。成功构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并在大肠埃希氏菌Rosetta(DE3)菌株中表达、纯化出SmRopGEF1重组蛋白。亚细胞定位的结果显示SmRopGEF1存在于植物细胞的细胞核中。qRT-PCR实验结果表明盐胁迫和冷胁迫能够显著提高SmRopGEF1的表达量;干旱胁迫后丹参愈伤中SmRopGEF1表达量下降。茉莉酸甲酯诱导后SmRopGEF1表达量升高。结论:克隆了丹参SmRopGEF1基因,其在抗逆胁迫中起到重要作用并且可能参与茉莉酸甲酯信号转导。研究结果丰富了丹参防御反应机制的研究,为选育丹参抗逆优良品种、提高丹参的产量与品质提供了参考。

关键词：丹参鸟嘌呤核苷酸交换因子序列分析基因表达

ALKBH5调控GEFT的m6A修饰对胆管癌转移及EMT的实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代检验医学杂志 2023年第4期38卷 1-7,21页

作者：王希方郑伟马东瑞何莉孙晶莹孙杨孟莲孙超陕西省人民医院肿瘤内科西安710068 陕西省人民医院肝胆外科西安710068 陕西省人民医院教学处西安710068 陕西省人民医院中心实验室西安710068 陕西省人民医院统计室西安710068 石河子大学医学院第一附属医院病理科新疆石河子832008

目的探究alkB同源蛋白5(ALKBH5)调控鸟嘌呤核苷酸交换因子T(guanine nucleotide exchange factors T,GEFT)的m6A修饰对胆管癌转移和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法将HuCCT1细胞按照转染类别分为Control组,NC-sh组、ALKBH5-sh组、NC-LV组、ALKBH5-LV组、ALKBH5-LV+NC-sh组和ALKBH5-LV+GEFT-sh组。Control组细胞不进行转染,使用Lipofectamine 2000对其他组细胞分别转染相应的慢病毒。采用MTT法检测细胞增殖水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭水平。采用RT-qPCR分析HuCCT1细胞中的ALKBH5,GEFT,Bax,Bcl-2,MMP2,MMP9,E-cadherin,N-cadherin和Vimentin的mRNA水平。采用Western blot分析HuCCT1细胞中的ALKBH5和GEFT蛋白水平。采用MeRIP-qPCR分析HuCCT1细胞中GEFT m6A甲基化水平。结果与Control组和NC-sh组比较,ALKBH5-sh组ALKBH5和GEFT的mRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力降低,细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,迁移和侵袭细胞数量降低,MMP2和MMP9 mRNA水平降低,E-cadherin mRNA水平升高,N-cadherin和Vimentin水平降低,GEFT m6A甲基化水平升高,差异具有统计学意义(F=43.347~1995.868,均P<0.001)。与Control组和NC-LV组比较,ALKBH5-LV组ALKBH5和GEFT的mRNA和蛋白水平升高,相对细胞活力升高,细胞凋亡率和Bax mRNA水平降低,Bcl-2 mRNA水平升高,迁移和侵袭细胞数量升高,MMP2和MMP9 mRNA水平升高,E-cadherin mRNA水平降低,N-cadherin和Vimentin水平升高,GEFT m6A甲基化水平降低,差异具有统计学意义(F=42.421~720.275,均P<0.001)。与ALKBH5-LV+NC-sh组比较,ALKBH5-LV+GEFT-sh组GEFT的mRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力降低,细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,迁移和侵袭细胞数量降低,MMP2和MMP9 mRNA水平降低,E-cadherinmRNA水平升高,N-cadherin和Vimentin水平降低,差异具有统计学意义(t=7.175~77.872,均P<0.001)。结论ALKBH5和GEFT均促进胆管癌细胞的生长和转移,ALKBH5可能通过调控GEFT m6A甲基化修饰来影响胆管癌的转移及EMT。

关键词：胆管癌 m6A甲基化 alKB同源蛋白鸟嘌呤核苷酸交换因子上皮间充质转化

VAV2蛋白DH结构域与CDC42蛋白相互作用的亲和力和热力学参数研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重庆医科大学学报 2021年第12期46卷 1492-1496页

作者：何诗雨串俊兰杨正林西南医科大学临床医学院泸州646000 四川省医学科学院·四川省人民医院分子遗传中心成都610072

目的:利用等温滴定量热技术研究VAV2蛋白的DH结构域(VAV2-DH)与CDC42的相互作用。方法 :首先分别将VAV2-DH和CDC42蛋白的编码基因克隆至pGEX-6p-1和pET28a载体上,构建VAV2-DH和CDC42蛋白的重组表达载体。再将重组表达载体转入大肠杆菌... 详细信息

目的:利用等温滴定量热技术研究VAV2蛋白的DH结构域(VAV2-DH)与CDC42的相互作用。方法 :首先分别将VAV2-DH和CDC42蛋白的编码基因克隆至pGEX-6p-1和pET28a载体上,构建VAV2-DH和CDC42蛋白的重组表达载体。再将重组表达载体转入大肠杆菌中诱导表达蛋白,并亲和层析、凝胶过滤层析纯化得到VAV2-DH和CDC42蛋白,最后利用鸟嘌呤核苷酸交换试验来验证VAV2-DH的鸟苷酸交换活性,并采用等温滴定量热技术检测这2种蛋白质相互作用的亲和力和热力学参数。结果:VAV2-DH和CDC42蛋白的平衡解离常数K_(D)=(11.44±2.12)μmol/L,其中摩尔结合焓DH=(-224.33±95.48) kJ/mol、-TDS=(195.97±95.95) kJ/mol、吉布斯自由能DG=(-28.30±0.49) kJ/mol。结论:VAV2-DH和CDC42蛋白属于中等强度的相互作用,是一个焓驱动的结合过程。

关键词： VAV2 CDC42 鸟嘌呤核苷酸交换因子蛋白相互作用等温滴定量热法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

靶向Rho通路的抗高血压治疗策略研究进展

国际药学研究杂志 2019年第2期46卷 81-88页

作者：王琦艾常虹商庆辉呼伦贝尔市人民医院呼伦贝尔021000 呼伦贝尔市中蒙医院呼伦贝尔021000

在过去几十年中,高血压的患病率呈逐年上升趋势。它不但增加左心室肥厚、心绞痛、心肌梗死和心力衰竭等心血管疾病的患病风险,还可能导致卒中(中风)、肾衰竭等相关后遗症。尽管目前有多种降压方案可供选择,但经过药物治疗后,只有半数患... 详细信息

在过去几十年中,高血压的患病率呈逐年上升趋势。它不但增加左心室肥厚、心绞痛、心肌梗死和心力衰竭等心血管疾病的患病风险,还可能导致卒中(中风)、肾衰竭等相关后遗症。尽管目前有多种降压方案可供选择,但经过药物治疗后,只有半数患者可有效控制血压,这意味着需要进一步了解潜在的致病因素并寻求更有效的治疗方法。然而血压稳态非常复杂,涉及多个系统的综合控制,其中平滑肌收缩力和动脉阻力是重要因素。来自临床前动物模型和全基因组关联研究的有力证据表明,平滑肌收缩和血压稳态受小分子GTP酶RhoA及其下游靶点Rho激酶控制。本文总结了平滑肌细胞中对RhoA活性进行严格控制的信号通路及调节器的相关进展,并讨论了当前针对这些RhoA通路成分的高血压治疗策略。还讨论了RhoA通路中已知的等位基因变异,并介绍了这些遗传多态性对高血压遗传风险的影响及其临床表现。

关键词：血压平滑肌 RhoA Rho激酶鸟嘌呤核苷酸交换因子三磷酸鸟苷酶激活蛋白

烟草Rab5鸟苷酸交换因子GEF的鉴定与分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

烟草Rab5鸟苷酸交换因子GEF的鉴定与分析

K-RAS^(G12C)小分子共价抑制剂的研究进展

第六届全国小麦基因组学及分子育种大会

作者：文柳璎中国农业科学院烟草研究所

蛋白质的分选和运输调控机制是生物学的热点研究领域之一。植物Rab5家族蛋白介导蛋白质从高尔基体向液泡的运输,这一过程有多个因子参与调节Rab5的活性。鸟苷酸交换因子GEF具有激活Rab5蛋白的功能,目前已报道拟南芥体内只有一个蛋白VPS9... 详细信息

蛋白质的分选和运输调控机制是生物学的热点研究领域之一。植物Rab5家族蛋白介导蛋白质从高尔基体向液泡的运输,这一过程有多个因子参与调节Rab5的活性。鸟苷酸交换因子GEF具有激活Rab5蛋白的功能,目前已报道拟南芥体内只有一个蛋白VPS9a可以激活所有Rab5家族成员,但是水稻中有两个Rab5的鸟苷酸交换因子(GLUP6/GEF和Rab5GEF2),全部可以激活OsRab5蛋白并参与谷蛋白运输,并且其生化活性稍有不同。通过对烟草基因组测序结果的生物信息学分析,生物信息学分析烟草中有两个基因(NtVPS9a和NtVPS9b),预测其表达的蛋白含VPS9结构域,分别来源于不同烟草本氏烟草和林烟草。通过从K326叶片cDNA文库中克隆获得NtVPS9a和NtVPS9b全长的cDNA,同时通过DNA编辑技术制作功能缺失的ntvps9a和ntvps9b突变体,本研究结果揭示异源四倍体植物栽培烟草中Rab5的GEF生理功能,并对Rab5参与的囊泡运输机制的解析提供实验依据,为烟草中Rab5及其GEF的互作模式提供分子依据。

关键词：鸟嘌呤核苷酸交换因子 Rab5 烟草

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药物化学杂志 2021年第2期31卷 107-116页

作者：唐家琦成荣洁闫超赖宜生中国药科大学新药研究中心天然药物活性组分与药效国家重点实验室江苏省代谢性疾病药物重点实验室江苏南京210009 南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室江苏南京210093

Ras原癌基因的突变是人类癌症中最常见的激活突变,驱动人类30%肿瘤的发生与发展,因此人们一直希望能够研发出靶向RAS蛋白的抗肿瘤药物,但进展缓慢。直至最近两年,随着首个K-RASG12C共价抑制剂AMG-510进入临床试验,直接靶向RAS蛋白的药... 详细信息

Ras原癌基因的突变是人类癌症中最常见的激活突变,驱动人类30%肿瘤的发生与发展,因此人们一直希望能够研发出靶向RAS蛋白的抗肿瘤药物,但进展缓慢。直至最近两年,随着首个K-RASG12C共价抑制剂AMG-510进入临床试验,直接靶向RAS蛋白的药物研发才逐渐显露出希望的曙光。本文主要介绍K-RASG12C小分子共价抑制剂的研发历程、临床前研究、临床试验以及RAS靶向药物未来的发展方向。

关键词：分子开关鸟嘌呤核苷酸交换因子 GTP酶激活蛋白 K-RASG12C突变共价抑制剂