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鲜人参酶解物研制及其降糖功能食品开发

鲜人参酶解物研制及其降糖功能食品开发

作者：张潮南昌大学

学位级别：硕士

我国是人参的主产国,也是消费大国,因此对人参进行深度研发很有必要。人参作为一种天然的珍贵的中药材,通常是对干燥人参进行研究,对鲜人参进行全利用是食品领域发展方向。本文通过将鲜人参进行酶解处理提取,将得到的人参酶解液(GEH)进... 详细信息

我国是人参的主产国,也是消费大国,因此对人参进行深度研发很有必要。人参作为一种天然的珍贵的中药材,通常是对干燥人参进行研究,对鲜人参进行全利用是食品领域发展方向。本文通过将鲜人参进行酶解处理提取,将得到的人参酶解液(GEH)进行体外抗氧化活性研究;通过酶抑制动力学研究及IR-HepG2细胞模型的建立,研究了其降血糖作用;以GEH为主要原料开发了一款人参黄精枸杞子复合口服液。通过酶解条件单因素的筛选及正交优化,分别研究了不同条件作用下纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶及复合酶对GEH总皂苷得率及残渣干重的影响。根据结果得出,由纤维素酶-果胶酶作为复合酶酶解时,总皂苷得率为1.7451%,残渣干重为0.6943 g,为最优酶解结果,酶解工艺条件为:酶解温度为60℃,加酶量为0.05%,酶解时间为3 h,酶解p H为4.0。对酶解前后的主要有效成分包括总皂苷、单体皂苷Re、Rg1、Rf、Rb1、蛋白质、粗多糖进行对比,发现经处理后的人参有效成分均有不同程度的增加,为鲜人参的充分利用提供了试验依据。为探究GEH是否具备抗氧化活性及降糖功能,对其进行了体外抗氧化能力及其对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制动力学研究,并通过体外模拟消化实验对其抑制能力稳定性进行分析。体外抗氧化结果显示,GEH对DPPH、超氧阴离子、羟基自由基均表现出不同程度的清除能力。通过对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制动力学研究结果显示,GEH对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均有抑制作用,尤其是对α-葡萄糖苷酶的抑制能力远高于阳性对照阿卡波糖,对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制方式分别为混合型抑制和非竞争性抑制,通过荧光猝灭研究显示GEH对两种酶均有明显的猝灭效果,并且分别表现为为静态-动态混合型和静态猝灭。胃肠体外模拟消化实验结果表明,GEH经胃部消化后,对α-淀粉酶的抑制作用保留率较为稳定,经肠液消化后,抑制保留率有所下降;但其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用在经胃肠消化后仍然有较为稳定的保留。通过胰岛素诱导建立IR-HepG2细胞模型,对其降糖活性做深入研究。结果显示,GEH能有效改善IR-HepG2细胞中胰岛素对葡萄糖摄取和利用率,上调了IR-HepG2细胞的葡萄糖消耗量,根据糖原PAS染色结果显示,GEH处理组较模型组颜色变深,结合糖原含量测定结果显示正常组、阳性对照组与GEH处理组的糖原含量对比模型组均有不同程度的增加,说明GEH能有效促进糖原合成。此外,几种生化指标的检测结果显示,GEH能有效调节细胞中HK(己糖激酶)、PK(丙酮酸激酶)、SOD(超氧化物歧化酶)酶活力使其得到明显提高,并能降低细胞中TG(甘油三酯)、MDA(丙二醛)含量,说明GEH能有效调节糖代谢,并防止细胞受到氧化应激损伤,发挥降糖作用。以优化提取的GEH为主要原料,搭配黄精、枸杞子提取液做辅料,开发了一款功能食品。以壳聚糖为澄清剂,配方为GEH、黄精提取液、枸杞子提取液、异抗坏血酸钠、甜菊糖苷、纯净水制得的饮品颜色透亮,状态稳定,口感酸甜。

关键词：鲜人参酶解酶抑制动力学降血糖作用

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鲜人参中2种丙二酰基人参皂苷的分离鉴定

分析化学 2005年第12期33卷 1783-1786页

作者：孙光芝刘志李向高郑毅男王继彦吉林农业大学现代化综合技术研究所 2. 吉林农业大学中药材学院长春中医学院

采用硅胶柱层析方法,流动相分别为氯仿-甲醇-水(65∶35∶10,V/V)、氯仿-甲醇-水(6∶4∶1)和正丁醇-乙酸乙脂-甲醇-水(4∶2∶1∶1)和高效液相(Nuc leosil C18(250 mm×10 mm,5μm)色谱柱;流动相为己腈-水(75∶25);流速为3.0 mL/m in;柱... 详细信息

采用硅胶柱层析方法,流动相分别为氯仿-甲醇-水(65∶35∶10,V/V)、氯仿-甲醇-水(6∶4∶1)和正丁醇-乙酸乙脂-甲醇-水(4∶2∶1∶1)和高效液相(Nuc leosil C18(250 mm×10 mm,5μm)色谱柱;流动相为己腈-水(75∶25);流速为3.0 mL/m in;柱温30℃;检测波长203 nm。从中国鲜人参中分离得到丙二酰基人参皂苷R c和丙二酰基人参皂苷Rb2,并通过其理化性质、红外光谱、质谱和核磁共振谱对化合物的结构进行了鉴定,证明其结构分别为3-O-[6-O-丙二单酰-β-D-葡萄吡喃糖(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖]-20-O-[α-L-阿拉伯呋喃糖(1→6)-β-D-葡萄吡喃糖]-20(S)-原人参二醇和3-O-[6-O-丙二单酰-β-D-葡萄吡喃糖(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖]-20-O-[α-L-阿拉伯吡喃糖(1→6)-β-D-葡萄吡喃糖]-20(S)-原人参二醇;丙二酰基人参皂苷R c为首次从中国鲜人参中分得。

关键词：鲜人参丙二酰基人参皂苷Rc 丙二酰基人参皂苷Rb2

RRLC-Q-TOF MS法分析鲜人参与仙人掌果配伍发酵前后人参皂苷成分的变化

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质谱学报 2018年第5期39卷 532-539页

作者：郑飞张琰韩铭鑫乔梦丹戴雨霖越皓刘淑莹长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130117

采用高分离度快速液相色谱-四极杆飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS)法对鲜人参与仙人掌果配伍发酵过程中的人参皂苷进行定性和定量分析。采用Agilent Zorbax SB-C18柱(2.1m×150mm×3.5μm),以0.1%甲酸和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,在电喷... 详细信息

采用高分离度快速液相色谱-四极杆飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS)法对鲜人参与仙人掌果配伍发酵过程中的人参皂苷进行定性和定量分析。采用Agilent Zorbax SB-C18柱(2.1m×150mm×3.5μm),以0.1%甲酸和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源负离子模式下进行质谱检测。结果表明,在发酵液中共鉴别了27种人参皂苷,通过其总离子流图比较了发酵前后人参皂苷成分的差异,对发酵后含量明显增加的人参皂苷Rh1、Rg2、F2、Rg3、Rh2、CK进行了定量分析,确定其含量分别为6.345 2、20.452 2、6.255 9、27.452 8、55.384 6、30.472 9mg/L。利用该方法能够快速发现人参配伍后产生的新化合物,并依据人参皂苷类化合物的质谱裂解规律对其进行鉴定。

关键词：高分离度快速液相色谱-四极杆飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS) 鲜人参仙人掌果配伍人参皂苷

鲜人参贮藏时间对其加工炮制品皂苷类成分的影响

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时珍国医国药 2021年第3期32卷 592-596页

作者：张娜黄鑫越皓刘淑莹长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130117 中国科学院长春应用化学研究所长春质谱中心吉林长春130022

目的研究鲜人参的贮藏时间对其加工炮制品生晒参和红参中皂苷含量的影响。方法选择同一产地的无病鲜人参,4℃保鲜贮藏,考察贮藏周期0-11周,每间隔1周取出适量鲜人参,其中一部分干燥加工为生晒参,一部分经蒸制为红参。采用超高效液相色谱... 详细信息

目的研究鲜人参的贮藏时间对其加工炮制品生晒参和红参中皂苷含量的影响。方法选择同一产地的无病鲜人参,4℃保鲜贮藏,考察贮藏周期0-11周,每间隔1周取出适量鲜人参,其中一部分干燥加工为生晒参,一部分经蒸制为红参。采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术同时测定生晒参和红参中20种人参皂苷含量,并应用多元统计分析对数据进行处理。结果结合主成分分析和聚类分析,可见皂苷随贮藏时间的变化规律。在鲜人参贮藏2周时,制得的生晒参和红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rd、Re、Noto R1、Rf、Rg2、F3、F2、Rh1、F1、Rg3的含量最高,并且随着贮藏时间的延长生晒参和红参中这13种皂苷含量均有所降低。人参皂苷Rc在第0周生晒参和红参中含量最高;Rk1为红参中特有皂苷,在第2周红参中含量最高。皂苷总含量分析可见,生晒参和红参中总皂苷含量、原人参二醇型皂苷(PPD)和原人参三醇型皂苷(PPT)总含量均在鲜参贮藏2周时达到最大值,且随着贮藏时间的延长皂苷总含量随之降低。贮藏3-4周样品的单体皂苷含量和皂苷总含量均与0-1周样品无显著差异。结论根据鲜人参贮藏时间对其加工炮制品皂苷类成分的影响分析,确定鲜人参4℃贮藏时间不宜超过4周,其中最佳贮藏时间为2周。该研究为人参在加工炮制过程中的品质控制提供依据,为药材更好地发挥药用价值提供参考。

关键词：鲜人参贮藏时间加工炮制人参皂苷

基于指纹图谱及多元统计分析评价鲜人参的质量

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中国药师 2022年第11期25卷 1963-1968页

作者：谭乐俊林林张德馨汪冰林永强山东省食品药品检验研究院国家药监局胶类产品质量评价重点实验室、山东省中药标准创新与质量评价工程实验室济南250101

目的:建立鲜人参药材HPLC指纹图谱方法,结合多元统计分析及多组分含量测定评价鲜人参样品的质量。方法:采用Thermo Hypersil BDS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^(-1),检测波长:2... 详细信息

目的:建立鲜人参药材HPLC指纹图谱方法,结合多元统计分析及多组分含量测定评价鲜人参样品的质量。方法:采用Thermo Hypersil BDS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^(-1),检测波长:203 nm,进样量:10μl;对照品鉴定7个共有峰,并对4个差异标志物进行定量分析;采用SIMCA-P 14.1软件对34批鲜人参样品进行聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)。结果:34批鲜人参样品与对照图谱的相似度均≥0.946,标定了12个共有峰,鉴定7个色谱峰;HCA和PCA将34批鲜人参样品分为2类,筛选出人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd 4个影响分组差异较大的组分。结论:该研究进一步弥补了鲜人参质量评价标准,可为鲜人参的药效物质基础研究提供参考。

关键词：鲜人参指纹图谱多元统计分析含量测定

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人参鲜品中农药残留评价研究

中南药学 2023年第2期21卷 508-514页

作者：谭乐俊林林梅桂雪林永强山东省食品药品检验研究院国家药监局胶类产品质量评价重点实验室山东省中药标准创新与质量评价工程实验室中药配方颗粒共性技术山东省工程研究中心济南250101

目的建立测定鲜人参中63种农药残留的分析方法,检测34批鲜人参药材样品的农药残留量,并对鲜人参的质量安全进行评价。方法采用QuEChERS法进行前处理,结合气相色谱-三重四极杆质谱(GC-MS/MS)、液相色谱-三重四极杆质谱(LC-MS/MS),于多反... 详细信息

目的建立测定鲜人参中63种农药残留的分析方法,检测34批鲜人参药材样品的农药残留量,并对鲜人参的质量安全进行评价。方法采用QuEChERS法进行前处理,结合气相色谱-三重四极杆质谱(GC-MS/MS)、液相色谱-三重四极杆质谱(LC-MS/MS),于多反应检测模式下同时测定34批次鲜人参药材中63种农药的残留量。结果63种农药在相应含量范围内呈现良好的线性关系,相关系数r均>0.995,仪器精密度RSD在0.34%~2.9%,加标回收率在81.2%~118.8%,符合检测要求。34批鲜人参药材中共检出4种禁用农药:有22批样品检出五氯硝基苯(0.01~43.3 mg·kg^(-1)),14批样品检出六氯苯(0.01~1.9 mg·kg^(-1)),2批样品检出α-六六六(0.012~0.016 mg·kg^(-1)),2批样品检出β-六六六(0.010 mg·kg^(-1)),检出率64.7%,不合格率41.2%。不合格批次均来自A公司,五氯硝基苯最高检出批次超出定量限的432倍。六氯苯最高检出批次超出定量限18倍。结论该方法简单、准确、灵敏度高,适合鲜人参中多种农药残留的筛查测定,可为鲜人参的农药残留监控提供参考。

关键词：鲜人参农药残留气相色谱-三重四极杆质谱液相色谱-三重四极杆质谱

鲜人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱研究

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药物分析杂志 2008年第8期28卷 1222-1225页

作者：姜先刚赵雨唐任能张巍马晶赵大庆长春中医药大学中医药与生物工程研发中心长春130117

目的:针对不同产地、不同生长年限的人参,建立人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱,为人参的质量评价提供依据。方法:以中性缓冲液抽提获得人参水提物,以相对分子质量标准蛋白为标准品,以人参主要蛋白(GMP)为对照,OHpak SB-803 ... 详细信息

目的:针对不同产地、不同生长年限的人参,建立人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱,为人参的质量评价提供依据。方法:以中性缓冲液抽提获得人参水提物,以相对分子质量标准蛋白为标准品,以人参主要蛋白(GMP)为对照,OHpak SB-803 HQ(8 mm×300 mm)凝胶排阻液相色谱柱(排阻极限10万),流动相:10 mmol·L^(-1)Tris·HCl(含10 mmol·L^(-1)NaCl,pH 7.4),流速:1.0 mL·min^(-1),柱温:25℃,应用紫外检测器检测,检测波长为280 nm。谱图通过相似度评价系统软件进行分析。结果:人参药材水提物的高效凝胶过滤色谱有6个特征峰,人参药材的相似度在0.9～1.0之间,稳定性、重复性和精密度良好。结论:该色谱图可作为人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱,用于鲜参药材水提取物的质量评价。

关键词：鲜人参水提取物高效凝胶过滤色谱法指纹图谱

人参鲜药干制/复水过程水分状态与化学成分变化规律研究

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中草药 2019年第14期50卷 3302-3312页

作者：郑尧雷蕾艾娇梁帅邓鑫石柳梅之南任永申中南民族大学药学院湖北武汉430074 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所湖北武汉430064

目的研究新鲜人参样品干制(干燥/蒸制)和复水(煎煮)过程中水分状态与含量变化以及有效成分含量变化规律,为优化中药干制/复水条件、科学判定过程终点提供技术支持,为探究中药鲜用/干用/制用差异提供新的科学视角。方法采用低场核磁共振... 详细信息

目的研究新鲜人参样品干制(干燥/蒸制)和复水(煎煮)过程中水分状态与含量变化以及有效成分含量变化规律,为优化中药干制/复水条件、科学判定过程终点提供技术支持,为探究中药鲜用/干用/制用差异提供新的科学视角。方法采用低场核磁共振与成像技术(LF-NMR/MRI)测定不同工艺条件下样品水分随时间的迁移变化规律;采用HPLC法测定不同样品中人参皂苷类主要成分的含量变化。结果水分与化学成分含量测定结果显示,蒸制180 min时鲜参炮制充分,此时水分饱和、人参皂苷类成分变化趋于稳定、总皂苷含量较高;鲜参和新蒸制红参在不同温度下干燥12.5 h时,40℃下均未干燥彻底,50℃下生晒参仍含有3.02%的水分、红参已达干燥终点,60℃下二者均达到干燥终点,且50℃下二者人参总皂苷含量均最高,综合结果表明50℃热风干燥工艺更优;复水(煎煮)过程中,60min饮片水分充分饱和且人参总皂苷含量较高,优于30 min和120 min,为较优煎煮条件;鲜参在蒸制/干燥/煎煮等过程中水分及人参总皂苷含量均低于鲜品,提示鲜用对保存和发挥中药初始药效物质基础状态具有重要意义。结论采用LF-NMR/MRI与HPLC技术,重点关注人参鲜品在干制(干制、炮制)与复水(煎煮)过程中的水分与化学成分含量变化,为中药干制/复水终点判定与工艺条件优化提供了新的技术手段,也为阐释与探究中药鲜用/干用/制用理论提供了新的科学依据。

关键词：中药干制/复水过程水分含量水分状态低场核磁共振技术化学指纹图谱鲜人参生晒参红参

鲜人参及其加工品中腺苷和L-焦谷氨酸含量比较研究

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吉林农业大学学报 2013年第1期35卷 36-39,45页

作者：马东升高飞飞李伟弓晓杰郑毅男吉林农业大学中药材学院长春130118 大连大学医学院大连116622

以六年生鲜人参、生晒参、红参为试验材料,建立腺苷和L-焦谷氨酸的含量测定方法：RP-HPLC法分析样品中腺苷含量,依利特Hypersil ODS2（4.6mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇—水（10∶90）,流速0.8 mL/min,检测波长260 nm,柱温40℃;... 详细信息

以六年生鲜人参、生晒参、红参为试验材料,建立腺苷和L-焦谷氨酸的含量测定方法：RP-HPLC法分析样品中腺苷含量,依利特Hypersil ODS2（4.6mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇—水（10∶90）,流速0.8 mL/min,检测波长260 nm,柱温40℃;RP-HPLC法分析样品中L-焦谷氨酸含量,COSMOSIL 5C18-PAQ（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇—5 mmol/L醋酸钠水溶液（8∶92）,流速0.5 mL/min,检测波长210 nm,柱温40℃。测得鲜人参及其加工品中腺苷含量为0.332~0.457 mg/g,L-焦谷氨酸含量为0.315~1.056 mg/g。结果表明：腺苷和L-焦谷氨酸含量在鲜人参及其加工品中呈规律性变化,鲜人参中腺苷和L-焦谷氨酸含量最高,加工品次之。因此在抗糖尿病活性方面,鲜人参较其加工品应更具研究价值。

关键词：鲜人参生晒参红参腺苷 L-焦谷氨酸