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鱼腥草素钠抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的分子机制初步研究

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鱼腥草素钠抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的分子机制初步研究

作者：史祺云吉林大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S. aureus）是一种在生活空间中广泛存在的条件致病菌，属于人兽共患病原菌，在人类健康和畜禽养殖领域有较大危害。金黄色葡萄球菌可在机体多处引发感染，临床上表现为局部炎症或全身性综合症... 详细信息

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S. aureus）是一种在生活空间中广泛存在的条件致病菌，属于人兽共患病原菌，在人类健康和畜禽养殖领域有较大危害。金黄色葡萄球菌可在机体多处引发感染，临床上表现为局部炎症或全身性综合症状。金黄色葡萄球菌临床感染的治疗多使用抗生素类药物，但近年来，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）引发的感染引起人们广泛关注。该菌感染力强，致病性高，传播范围广，并且具有较高的耐药性，大多数抗生素难以治疗，一旦重度感染就会危及生命。同时，因金黄色葡萄球菌能够在感染部位形成生物被膜，不仅提高了细菌耐药性，同时可以形成反复性感染或潜伏性感染，即加重了患者痛苦，又增加了治疗难度。由此，越来越多的科研学者开始关注并研究金黄色葡萄球菌及生物被膜，其方向包括金黄色葡萄球菌生物被膜的形成机制和调控、耐药性相关分子机制、及抗生物被膜新型药物筛选和开发等各个方面。我国是中草药资源大国，中药使用历史悠久，因而在新型抗生素研究领域有得天独厚的优势。在科学技术的引领下，中药的研究和开发和研究将会为耐药菌治疗提供新思路，新方法和新空间。本研究通过微量稀释法和琼脂平板法测定了鱼腥草素钠（SH）体外作用金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923和临床分离株UAMS-1浮游菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;绘制抑菌曲线;利用细胞培养板进行金黄色葡萄球菌生物被膜体外培养;通过结晶紫鉴定金黄色葡萄球菌临床分离株UAMS-1的形成生物被膜能力，进一步通过激光共聚焦显微镜进行观察;通过琼脂平板法测定鱼腥草素钠作用金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923和临床分离株UAMS-1生物被膜的最低抑膜浓度（MIBC）和最低杀膜浓度（MBBC）;并通过激光共聚焦显微镜考察了鱼腥草素钠作用金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923形成生物被膜不同阶段的生物活性。实验结果显示，鱼腥草素钠有较好的抑制金黄色葡萄球菌生长活性，对于标准株ATCC25923和临床分离株UAMS-1的MIC和MBC分别为16μg/mL和32μg/mL;体外成功培养金黄色葡萄球菌生物被膜，金葡菌标准株ATCC25923和临床分离株UAMS-1均能够形成成熟生物被膜并且结构相似，培养两天的生物被膜结构更加厚实、致密;鱼腥草素钠抑制金葡菌标准株ATCC25923和临床分离株UAMS-1成熟生物被膜能力差，MIBC和MBBC均>1024μg/mL;值得注意的是，8μg/mL鱼腥草素钠药物即可以抑制金葡菌标准株ATCC25923早期阶段生物被膜形成。通过酶谱实验测定了鱼腥草素钠作用金葡菌标准株ATCC25923胞外水解酶活性;制备铁表面调节因子A（IsdA）蛋白多克隆抗体，并进一步通过Westernblot技术检测了鱼腥草素钠对标准株ATCC25923IsdA蛋白及毒力因子α-溶血素、肠毒素A(SEA)和肠毒素B（SEB）表达的影响。结果显示，鱼腥草素钠能够抑制金黄色葡萄球菌胞外水解酶活性;亚抑菌浓度鱼腥草素钠能够抑制金葡菌IsdA及毒力因子α-溶血素、SEA和SEB的表达。本研究初步探讨了鱼腥草素钠抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的分子机制，为鱼腥草素钠治疗金黄色葡萄球菌感染提供了理论依据，同时也为鱼腥草素钠的科学研究和临床应用打下了坚实基础。

关键词：金黄色葡萄球菌生物被膜鱼腥草素钠分子机制

鱼腥草素钠抗类风湿关节炎滑膜增殖作用的实验研究

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鱼腥草素钠抗类风湿关节炎滑膜增殖作用的实验研究

作者：李君蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的鱼腥草素钠(Sodium Houttuyfonate,SH)抗类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)滑膜增殖作用的实验研究及探讨其可能的作用机制。方法1.体外实验:培养RA原代滑膜细胞,将RA滑膜细胞平均分为5组,分别标记为空白对照组、SH 25μg·ml-... 详细信息

目的鱼腥草素钠(Sodium Houttuyfonate,SH)抗类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)滑膜增殖作用的实验研究及探讨其可能的作用机制。方法1.体外实验:培养RA原代滑膜细胞,将RA滑膜细胞平均分为5组,分别标记为空白对照组、SH 25μg·ml-1组、SH 50μg·ml-1组、SH 100μg·ml-1组、SH 200μg·ml-1组。按照上述浓度将SH分别加入到各SH干预组中,同时,用等量的生理盐水加入到空白对照组中,如此连续培养7天后用MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)法检测各组吸光度值,分析SH对于体外RA滑膜细胞增殖的抑制作用。2.体内实验:50只Wistar大鼠随机分成5组:空白对照组、模型组、SH 130mg·kg-1组、SH 260mg·kg-1组、SH 520mg·kg-1组。建立大鼠胶原诱导的类风湿关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)模型,计数方法测定大鼠关节炎指(Arthritis Index,AI),称重法比较大鼠的体重变化,HE染色光学显微镜下观察实验大鼠关节病理形态变化,酶联免疫吸附法(Elisa)检测实验大鼠血清中细胞因子白介素(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、蛋白激酶A(PKA)、c AMP水平及Tunel法检测大鼠滑膜细胞凋亡情况。结果1.体外实验:与空白对照组相比,SH干预组的滑膜细胞增殖率明显降低,在SH 25μg·ml-1组、SH 50μg·ml-1组、SH 100μg·ml-1组及SH 200μg·ml-1组之间呈现出剂量效应关系;本实验中,当200μg·ml-1SH时达到最大抑制率。2.体内实验:与模型组比较,SH干预组实验大鼠的关节炎指数降低,细胞因子水平减低,滑膜细胞凋亡明显增加,且在SH130mg·kg-1组、SH260mg·kg-1组及SH 520mg·kg-1组之间呈现出剂量效应关系;本实验中,当SH浓度为SH520mg·kg-1时达到最大抑制率。结论SH能够抑制体外RA滑膜细胞的增殖作用,呈剂量效应关系。SH可以增加实验大鼠滑膜细胞的凋亡,降低大鼠的关节炎指数及炎性细胞因子的水平。

关键词：鱼腥草素钠类风湿关节炎滑膜增殖

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新鱼腥草素钠的制备

中国医药工业杂志 2006年第2期37卷 79-80页

作者：张存陈再新高凯扬州大学化学化工学院江苏扬州225002 江苏亚邦药物研发有限公司江苏南京210004

Sodium lauroyl-α-hydroxyethyl sulfonate was prepared from ethyl acetoacetate by alkylation and decar-boxylation to give tridecan-2-one, which subjected to condensation with ethyl formate and addition with NaHSO3 in 3... 详细信息

关键词：鱼腥草素钠制备慢性支气管炎亚硫酸氢钠呼吸道感染磺酸钠化学名加成物月桂酰挥发油

鲎试剂法检测新鱼腥草素钠注射液的细菌内毒素

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中国医院药学杂志 2004年第10期24卷 645-646页

作者：王振军张隽周世荣华中科技大学同济医学院附属荆州医院湖北荆州434020

目的 :探讨新鱼腥草素钠注射液的细菌内毒素检测方法。方法 :参照中国药典 2 0 0 0年版细菌内毒素检查法中干扰试验的基本原理及检测方法。结果 :将新鱼腥草素钠注射液稀释 2倍以上可消除干扰作用。结论 :本方法简便、快速、准确 ,可用... 详细信息

目的 :探讨新鱼腥草素钠注射液的细菌内毒素检测方法。方法 :参照中国药典 2 0 0 0年版细菌内毒素检查法中干扰试验的基本原理及检测方法。结果 :将新鱼腥草素钠注射液稀释 2倍以上可消除干扰作用。结论 :本方法简便、快速、准确 ,可用于新鱼腥草素钠注射液的细菌内毒素检查。

关键词：注射液鱼腥草素钠鲎试剂法细菌内毒素检测中国药典2000年版干扰试验细菌内毒素检查结论参照准确

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高效液相色谱法测定芒果止咳片中鱼腥草素钠

中草药 2006年第8期37卷 1179-1180页

作者：田辉陈卫卫蔡毅广西中医学院广西南宁530001

芒果止咳片由芒果叶干浸膏、鱼腥草素钠和马来酸氯苯那敏经适当的加工制成，有宣肺化痰、止咳平喘的功效，用于咳嗽、气喘、多痰等。原质量标准中没有定量测定，为了更好地控制芒果止咳片的质量，本实验建立反相高效液相色谱法测定芒果... 详细信息

芒果止咳片由芒果叶干浸膏、鱼腥草素钠和马来酸氯苯那敏经适当的加工制成，有宣肺化痰、止咳平喘的功效，用于咳嗽、气喘、多痰等。原质量标准中没有定量测定，为了更好地控制芒果止咳片的质量，本实验建立反相高效液相色谱法测定芒果止咳片中鱼腥草素钠，为芒果止咳片质量控制提供科学依据

关键词：反相高效液相色谱法芒果止咳片鱼腥草素钠定量测定马来酸氯苯那敏质量标准质量控制宣肺化痰止咳平喘科学依据

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颗粒包衣工艺提高鱼腥草素钠的稳定性

中国医院药学杂志 2012年第17期32卷 1346-1349页

作者：谭珍媛宋方茗熊万娜梁健钦广西医科大学广西南宁530021 广西卫生职业技术学院广西南宁530021 广西中医药大学广西南宁530001

目的:对鱼腥草素钠(SH)进行颗粒包衣,提高其稳定性。方法:采用羟丙甲基纤维素(HPMC)为包衣材料,用流化床项喷技术对SH颗粒进行包衣,以收率为指标,考察了包衣增重、增塑剂用量、包衣温度、黏合剂等因素对包衣收率的影响,筛选包衣处方及... 详细信息

目的:对鱼腥草素钠(SH)进行颗粒包衣,提高其稳定性。方法:采用羟丙甲基纤维素(HPMC)为包衣材料,用流化床项喷技术对SH颗粒进行包衣,以收率为指标,考察了包衣增重、增塑剂用量、包衣温度、黏合剂等因素对包衣收率的影响,筛选包衣处方及优化制备工艺参数,并通过稳定性考察包衣后鱼腥草素钠的稳定性。结果:优化后的包衣处方是包衣增重为15%,增塑剂用量为5%,包衣温度为60℃。包衣颗粒中SH含量是(86.6±0.4)%(g/g,n=9)。SH包衣颗粒在高温、高湿条件下放置10 d,稳定性很好。结论:SH原料颗粒经过HPMC包衣后能有效提高其稳定性。

关键词：鱼腥草素钠颗粒包衣稳定性

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反相离子对色谱法测定鱼腥草素钠的含量

中成药 2006年第6期28卷 895-896页

作者：张志斌钱卫德杭亚军徐建琴上海汉殷药业有限公司上海200080

由鱼腥草素钠、四季青浸膏组成的复方四季青片，分别从抗病毒、抗感染两方面协同抗呼吸道感染，疗效显著。临床上用于风热感冒，咳嗽痰多，咽喉肿痛。该制剂收载于部颁标准第四册，检验项目中无[含量测定]，使其质量一直不能得到很好控制。

关键词：离子对色谱鱼腥草素钠含量

孟鲁司特钠联合鱼腥草素钠治疗亚急性咳嗽68例疗效观察

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药学服务与研究 2018年第6期18卷 473-475页

作者：沈美珠施心奕周敏许东晴曹睿杰徐丽上海市第六人民医院金山分院呼吸科上海201599 上海市金山区漕泾镇社区卫生服务中心内科上海201507 上海市金山区朱泾镇社区卫生服务中心内科上海201599

咳嗽是我国基层医疗机构每天最常接诊的病症之一,对咳嗽时间持续3~8周的亚急性咳嗽,基层医疗机构的诊断和治疗手段比较单一.社区卫生服务中心往往应用抗菌药加止咳药治疗亚急性咳嗽,除存在抗菌药滥用的隐患外,治疗效果也常常不满意,医... 详细信息

咳嗽是我国基层医疗机构每天最常接诊的病症之一,对咳嗽时间持续3~8周的亚急性咳嗽,基层医疗机构的诊断和治疗手段比较单一.社区卫生服务中心往往应用抗菌药加止咳药治疗亚急性咳嗽,除存在抗菌药滥用的隐患外,治疗效果也常常不满意,医师对迁延不愈的咳嗽甚至束手无策[1].2016年6月-2017年5月,以咳嗽为主诉、符合亚急性咳嗽标准的门诊病人,在上海市第六人民医院金山分院就诊,医师以孟鲁司特钠联合鱼腥草素钠治疗,取得较好临床疗效.这一方法在基层医疗机构有实际应用价值,现报道如下.

关键词：咳嗽,亚急性孟鲁司特钠鱼腥草素钠疗效

不同因素对水溶液中鱼腥草素钠降解速率的影响

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中国医院药学杂志 2018年第22期38卷 2311-2313,2318页

作者：李菲张凤娇杨荟李洪爽段桂运田景振泰山医学院药学院山东泰安271016 山东中医药大学药学院山东济南250355

目的:考察溶液pH、缓冲液浓度、亚硫酸氢钠和温度对水溶液中鱼腥草素钠降解速率的影响。方法:乙腈-0.01mol·L-1四丁基溴化铵溶液-三乙胺(43∶57∶0.3)为流动相,HPLC法测定不同条件下鱼腥草素钠水溶液浓度变化。结果:鱼腥草素钠的降解... 详细信息

目的:考察溶液pH、缓冲液浓度、亚硫酸氢钠和温度对水溶液中鱼腥草素钠降解速率的影响。方法:乙腈-0.01mol·L-1四丁基溴化铵溶液-三乙胺(43∶57∶0.3)为流动相,HPLC法测定不同条件下鱼腥草素钠水溶液浓度变化。结果:鱼腥草素钠的降解反应符合二级动力学方程,pH 7条件下降解速度常数K最大。磷酸盐缓冲液浓度越高,鱼腥草素钠降解速率越快;溶液中加入亚硫酸氢钠和低温储存有利于溶液的稳定。结论:鱼腥草素钠水溶液不稳定,降解速率与溶液pH值、磷酸盐溶液浓度、亚硫酸氢钠和温度等因素均有关。

关键词：鱼腥草素钠降解动力学高效液相色谱法