检索结果-南通市图书馆

鰤鱼诺卡氏菌和无乳链球菌可视化快速检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

鰤鱼诺卡氏菌和无乳链球菌可视化快速检测方法的建立

作者：谭淑芳华中农业大学

学位级别：硕士

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是鱼类重要的细菌性病原,严重危害水产养殖业的健康绿色发展。市场迫切需求能现场快速检测这两种鱼类病原的方法。因此,我们通过重组酶聚合酶扩增(Recombinase p... 详细信息

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是鱼类重要的细菌性病原,严重危害水产养殖业的健康绿色发展。市场迫切需求能现场快速检测这两种鱼类病原的方法。因此,我们通过重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)技术,建立了鰤鱼诺卡氏菌和无乳链球菌的试纸条型RPA(RPA-LFD)和实时荧光RPA可视化快速检测方法。取得的主要结果如下:1.鰤鱼诺卡氏菌RPA-LFD、实时荧光RPA可视化快速检测方法建立我们基于鰤鱼诺卡氏菌16S-23S r RNA ITS的保守序列,建立了鰤鱼诺卡氏菌RPA-LFD、实时荧光RPA可视化快速检测方法。随后,我们对所建立的检测方法进行了最佳反应条件筛选、特异性验证以及灵敏度评估。其中RPA-LFD可以在常温下10 min内实现快速检测,实时荧光型RPA可在20 min内完成检测,两种方法对重组质粒p MD18-ITS的最低检测限为10copies/μL,对鰤鱼诺卡氏菌基因组DNA最低检测浓度为100 pg/μL,灵敏度与PCR一致且具有高度特异性。此外,我们用鰤鱼诺卡氏菌对大口黑鲈(Micropterus salmoides)进行攻毒实验,以监测能检测到病原菌的最早时间点。结果显示,在大口黑鲈发病死亡前7 d,我们所建立的检测方法即可检测到病原菌,可以实现鰤鱼诺卡氏菌病的早期诊断。最后,我们对鰤鱼诺卡氏菌RPA-LFD、实时荧光RPA检测方法进行了临床实用性评估,对临床样品的检测结果与PCR一致,证明了我们所建立的检测方法具有很强的临床实用性。2.无乳链球菌RPA-LFD、实时荧光RPA可视化快速检测方法建立我们基于无乳链球菌的Sip基因序列,建立了无乳链球菌RPA-LFD、实时荧光RPA可视化快速检测方法。同样的,我们对该方法进行了最佳反应条件筛选、灵敏度和特异性检测、早期诊断、临床实用性评估等实验。其中RPA-LFD检测方法可以在常温下15 min内实现快速检测,实时荧光型RPA能够在20 min内完成检测,对重组质粒p MD18-Sip的最低检测限为10copies/μL,对无乳链球菌的基因组DNA最低检测浓度为10 pg/μL,与PCR灵敏度一致。同样的,在罗非鱼(Oreochromis mossambicus)发病死亡前5 d,我们所建立的方法及可检测到病原菌,能够对无乳链球菌病的进行早期诊断。对临床样品检测结果与PCR一致,具有很强的临床实用性强。总而言之,我们针对鱼类鰤鱼诺卡氏菌病及无乳链球菌病的病原菌,建立了方便、灵敏的可视化快速诊断方法,为鰤鱼诺卡氏菌和无乳链球菌这两种病原的现场快速诊断试剂的开发奠定了重要的产品基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌无乳链球菌重组酶聚合酶扩增试纸条型RPA 实时荧光RPA

鰤鱼诺卡氏菌分离、培养及感染对小黄鱼免疫应答初步研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

鰤鱼诺卡氏菌分离、培养及感染对小黄鱼免疫应答初步研究

作者：吴迪浙江海洋大学

学位级别：硕士

小黄鱼(Larimichthyspolyactis)为我国四大海产之一,是重要的经济性鱼类,极具养殖前途。2021年舟山海域网箱养殖小黄鱼暴发的以体表溃疡、眼球溃烂、内脏出现白色结节为主要症状的疾病,造成了大面积死亡,而鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriol... 详细信息

小黄鱼(Larimichthyspolyactis)为我国四大海产之一,是重要的经济性鱼类,极具养殖前途。2021年舟山海域网箱养殖小黄鱼暴发的以体表溃疡、眼球溃烂、内脏出现白色结节为主要症状的疾病,造成了大面积死亡,而鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)感染会引起鱼类内脏白点病发生,发病后会引起较高的死亡率。本研究从患内脏白点病小黄鱼体内分离、纯化到一优势菌株ZHNK2101,鉴定为鰤鱼诺卡氏菌。药敏试验结果显示该菌株对哌拉西林、头孢曲松、丁胺卡那、庆大霉素等16种抗生素敏感。回归感染试验表明该菌株可以感染小黄鱼并引起和自然感染相同的症状,经测定7d半致死浓度LD50为7.28×104CFU/尾。另外,该菌株会引起小黄鱼鳃、肝、肾和脾脏发生病理变化,主要表现为鳃丝紊乱、肝脏、肾脏、脾脏组织细胞纤维化形成病理性结节。为解决菌液浓度测定和提升培养效率,本研究利用超声波作用条件对鰤鱼诺卡氏菌菌膜进行解离试验,发现在频率为1.25-2.5kHz,采用间歇式作用(解离3s、间隔7s)法解离15min条件下,对菌膜解离效果最佳且能保持细菌生理学活性。同时,测定了在2.5kHz频率超声波间接解离15min后,OD600值为1的鰤鱼诺卡氏菌菌液浓度约为2.0 × 108CFU/mL。另外,通过对设计的11种培养基配方进行筛选,认为配方为20g/L BHI培养基、5g/L酵母提取物、10g/L葡萄糖、2.4g/L氯化钠、PH值6.7的优化方案更适合鰤鱼诺卡氏菌菌株ZHNK2101的生长。为进一步探究感染特点,发现鰤鱼诺卡氏菌感染小黄鱼的会引起肝脏和脾脏出现组织学病变,随感染时间推移,肝脏和脾脏会出现病理性结节的白色肉芽肿和大量细胞坏死。另外,鰤鱼诺卡氏菌感染小黄鱼也会引起肝、脾脏组织免疫相关酶活和免疫球蛋白浓度变化。其中,ACP、AKP、SOD和LZM活性和IgM浓度均出现了不同程度的特异性高表达。此外,本实验利用RNA-Seq技术分析鰤鱼诺卡氏菌对小黄鱼肝、脾脏转录组的影响,发现感染鰤鱼诺卡氏菌会影响小黄鱼免疫、细胞凋亡、细胞增殖发育等相关信号通路激活及相关基因特异性表达。综上所述,本研究首先从患内脏白点病的小黄鱼体内分离、纯化得到鰤鱼诺卡氏菌,其次对其培养条件和浓度测定方法进行优化来实现扩大培养,最后从组织学切片、免疫相关酶活及免疫球蛋白浓度和转录组学三个层面详细阐述鰤鱼诺卡氏菌感染小黄鱼的发病规律和特点,旨在提高对鰤鱼诺卡氏菌的认识,为后续感染机制和小黄鱼免疫应答机制的深入研究提供前期研究基础和数据支持,也为小黄鱼养殖过程中应对内脏白点病的早期预防和治疗提供参考价值。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌小黄鱼分离培养免疫应答

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

鰤鱼诺卡氏菌特异性PCR检测方法的建立

基因组学与应用生物学 2021年第7期40卷 2656-2665页

作者：陈国权黄碧艳张子雯莫静怡柯玉涵夏立群广东海洋大学深圳研究院广东省水生动物健康评估工程技术研究中心深圳海水经济动物种苗健康评价公共技术服务平台深圳518120 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088

鱼类诺卡氏菌病(fish nocardiosis)是一种常见的严重危害全球水产养殖业的鱼类疾病。鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原菌之一。本研究对已报道的鰤鱼诺卡氏菌17个不同菌株全基因组数据进行比对分析,筛选获得... 详细信息

鱼类诺卡氏菌病(fish nocardiosis)是一种常见的严重危害全球水产养殖业的鱼类疾病。鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原菌之一。本研究对已报道的鰤鱼诺卡氏菌17个不同菌株全基因组数据进行比对分析,筛选获得种内保守、种间变异的特异性基因组片段,并设计特异性引物,建立鰤鱼诺卡氏菌特异性PCR检测方法。设计的特异性引物仅能扩增获得鰤鱼诺卡氏菌的特异性片段,其他近缘菌和常见菌均无PCR扩增片段,且PCR检测灵敏度核酸浓度达80 pg/μL,菌液浓度达8.6 CFU/μL。用该PCR检测方法检测人工感染鰤鱼诺卡氏菌和阴性对照组杂交鳢各组织,结果显示,只能从感染鰤鱼诺卡氏菌的鱼组织中扩增出阳性片段。本研究基于鰤鱼诺卡氏菌不同菌株全基因组数据比对分析,所建立的PCR检测方法比之前的分子检测方法更具科学性、可靠性。该PCR检测方法可以提供一种快速、准确、灵敏的鰤鱼诺卡氏菌检测方式。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌基因组片段检测方法特异性

鰤鱼诺卡氏菌GapA蛋白的黏附功能及其B细胞表位研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

鰤鱼诺卡氏菌GapA蛋白的黏附功能及其B细胞表位研究

作者：郭佳静安徽农业大学

学位级别：硕士

近年来,由鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)引起的以皮肤溃疡和内脏器官出现结节为主要特征的鱼类疾病严重危害了水产养殖业的健康发展,亟需研制安全有效的疫苗用于该病的防控。细菌黏附是病原菌感染宿主的初始关键环节,以黏附素作为候... 详细信息

近年来,由鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)引起的以皮肤溃疡和内脏器官出现结节为主要特征的鱼类疾病严重危害了水产养殖业的健康发展,亟需研制安全有效的疫苗用于该病的防控。细菌黏附是病原菌感染宿主的初始关键环节,以黏附素作为候选抗原制备疫苗可在感染最初阶段发挥抗菌作用。在我们前期研究中,从患病的加州鲈(Micropterus salmoides)体内分离鉴定到一株致病性鰤鱼诺卡氏菌,并经过全基因组测序与分析,发现该分离株携带高度保守的gap A基因,并预测出该基因编码的3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GapA)可能具有黏附功能,但仍需验证。为此,本课题以GapA蛋白为研究对象,以CIK细胞为黏附模型,探究该蛋白是否具有黏附功能,鉴定其B细胞表位,并确定其具有黏附作用的表位肽,旨在为后期研制该菌黏附素多表位疫苗奠定基础。主要研究内容与结果如下:1、鰤鱼诺卡氏菌GapA蛋白的重组表达本课题中先以鰤鱼诺卡氏菌基因组DNA为模板,PCR扩增gap A基因,构建重组克隆质粒p MD19T-gap A,再采用酶切酶连法构建重组表达质粒p ET32a(+)-gap A。将鉴定正确的重组菌BL21/p ET32a(+)-gap A经IPTG诱导表达,表达产物经变性、复性、纯化及浓缩,得到了纯度为93%、浓度为1.14 mg/m L的r GapA蛋白。2、兔抗r GapA抗体和兔抗全菌抗体的制备本课题中先将r GapA蛋白、油佐剂和免疫增强剂混匀并乳化为免疫原,再免疫新西兰大白兔以制备兔抗r GapA蛋白抗体,结果显示,兔抗r GapA蛋白抗体的琼扩效价为1:32,能够特异性识别GapA蛋白。此外,以灭活的鰤鱼诺卡氏菌与上述佐剂混合制成免疫原,制备了凝集效价为1:1 024的兔抗鰤鱼诺卡氏菌抗体,这两种抗体可用于后续检测。3、鰤鱼诺卡氏菌GapA蛋白的黏附功能研究本课题中以CIK细胞为黏附模型,利用免疫荧光技术、Western blot和抗体抑制细菌黏附试验检测r GapA蛋白对CIK细胞的黏附情况。结果显示,r GapA蛋白与细胞孵育后细胞膜表面出现绿色荧光,而用r GapA抗体处理的r GapA蛋白孵育细胞后无绿色荧光出现;r GapA蛋白处理后提取的细胞膜蛋白能与抗r GapA抗体发生结合反应,在53.6 k Da处有一条反应条带;细菌黏附对照组、抗菌抗体处理组和抗r GapA抗体处理组的CIK细胞四周平均黏附菌数分别为21.6±5.7、0和5.6±0.49,r GapA抗体的黏附抑制率为74.1%。结果表明,r GapA蛋白对CIK细胞具有黏附作用。4、GapA蛋白B细胞表位鉴定和黏附表位肽的确定本课题中先利用DNAStar Protean和Pymol软件预测GapA蛋白的优势B细胞表位,并采用肽ELISA与Western blot加以验证。结果鉴定到该蛋白的4个B细胞表位,分别为Ep(RLPQDVSLDGDY)、Ep(GVNDDKYDGSQN)、Ep(YTQDQNLQDAPH)和Ep(DNEWGYSNRLAD)。然后,人工合成FITC标记的上述表位肽和无关对照肽,利用流式细胞术检测各标记肽与CIK细胞黏附情况。结果显示,经各标记肽孵育后,荧光标记阳性细胞数百分比依次为1.09±0.07%(Ep)、97.4±0.57%(Ep)、98.1±0.49%(Ep)、86.3±1.71%(Ep)和1.12±0.07%(无关肽),对应的平均荧光强度依次为2.73±0.35、57.08±4.12、38.82±1.62、39.49±0.82和2.35±0.20。表明Ep、Ep和Ep是具有黏附作用的表位肽。综上所述,本课题在成功制备了兔抗r GapA蛋白抗体的基础上,证实GapA蛋白是鰤鱼诺卡氏菌的黏附素,首次鉴定到该黏附素蛋白的4个B细胞表位,确定Ep、Ep和Ep是具有黏附作用的表位肽。研究结果为后期研发基于多表位的鰤鱼诺卡氏菌黏附素疫苗提供了良好基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌 GapA蛋白黏附功能 B细胞表位黏附肽

鰤鱼诺卡氏菌SOD基因克隆与表达及其酶活性质测定

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基因组学与应用生物学 2019年第11期38卷 4894-4901页

作者：侯素莹黄嘉慧陈建林王文基鲁义善夏立群广东海洋大学深圳研究院深圳518108 广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水生动物健康评估工程技术研究中心深圳518108 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088

鱼类的诺卡氏菌病主要由鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)引起。为探讨鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子及其感染致病机制,本研究通过对鰤鱼诺卡氏菌全基因组序列的分析,发现了一个编码超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的基因。生物信... 详细信息

鱼类的诺卡氏菌病主要由鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)引起。为探讨鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子及其感染致病机制,本研究通过对鰤鱼诺卡氏菌全基因组序列的分析,发现了一个编码超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的基因。生物信息学分析显示该基因编码一个分泌蛋白,可能是鰤鱼诺卡氏菌潜在的毒力因子。本研究通过基因克隆获取了鰤鱼诺卡氏菌SOD基因(NsSOD),其长度为624 bp。利用双酶切技术在含有GST标签的原核表达载体pGEX-6P-1中插入NsOD基因片段,成功构建了其重组表达载体并命名为pGEX-SOD。将pGEX-SOD导入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得了原核表达菌株BL21/pGEXSOD并对其诱导表达条件进行了摸索,确定25℃、IPTG(1 mmol/L)诱导14 h,可成功获得具有生物活性的可溶性NsSOD重组蛋白。随后利用GST标签亲和柱纯化NsSOD重组蛋白,并进行酶活性质测定,确定NsSOD重组蛋白的活性为2.76酶活力单位。通过对NsSOD进行基因克隆、原核表达、重组蛋白纯化及体外酶活性质测定,为进一步研究NsSOD的功能和深入了解鰤鱼诺卡氏菌的致病机理奠定了基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌超氧化物歧化酶原核表达蛋白纯化酶活性质测定

鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的组织病理学研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基因组学与应用生物学 2019年第10期38卷 4439-4446页

作者：王文基陈建林侯素莹鲁义善夏立群广东海洋大学深圳研究院深圳518108 广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省水生动物健康评估工程技术研究中心深圳51808

人工养殖乌斑杂交鳢(Channa maculate♀×C.argus♂)受鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)侵害日益严重,为深入研究该菌的致病机理,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的感染模型亟待建立。本研究通过对菌液浓度与吸光值、半致死剂量、组织病理... 详细信息

人工养殖乌斑杂交鳢(Channa maculate♀×C.argus♂)受鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)侵害日益严重,为深入研究该菌的致病机理,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的感染模型亟待建立。本研究通过对菌液浓度与吸光值、半致死剂量、组织病理学和病理组织切片等方面进行研究。结果表明菌液浓度为4.75×10^4~4.75×10^7 cfu/mL范围时与其吸光值呈线性关系。通过人工感染实验,确定鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的半致死剂量(LD50)为1.52×10^5 cfu/尾。组织病理学分析发现,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢会引起皮肤溃烂、内脏器官肿大,形成白色结节。病理组织切片显示,结节中心呈干酪样坏死,周围有大量细胞浸润。研究结果为建立鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的动物模型及研究鰤鱼诺卡氏菌致病机制提供科学依据。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌乌斑杂交鳢人工感染 LD50病理切片

鰤鱼诺卡氏菌HYD基因的克隆及亚细胞定位研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方水产科学 2018年第1期14卷 35-42页

作者：陈建林苏泽杰鲁义善徐亮张红莲夏立群广东海洋大学深圳研究院广东深圳518108 广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原。鰤鱼诺卡氏菌水解酶(hydrolase,HYD)可能是鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子。研究结果表明鰤鱼诺卡氏菌HYD的肽段不是分泌蛋白。亚细胞定位研究发现HYD-GFP融合蛋白均匀地分布在胖... 详细信息

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原。鰤鱼诺卡氏菌水解酶(hydrolase,HYD)可能是鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子。研究结果表明鰤鱼诺卡氏菌HYD的肽段不是分泌蛋白。亚细胞定位研究发现HYD-GFP融合蛋白均匀地分布在胖头鲤(FHM)细胞的细胞质中。亚细胞定位和过表达研究都显示HYD蛋白在FHM细胞中表达后,细胞核出现固缩浓染、凋亡小体等细胞凋亡特征,但Caspase-3活性检测表明HYD并未显著增加细胞凋亡水平。研究为进一步了解鰤鱼诺卡氏菌的致病机理奠定了基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌水解酶亚细胞定位 Caspase-3活性检测

基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

水生生物学报 2023年第10期47卷 1553-1560页

作者：周可欣潘晓艺蔺凌云黄雷穆雪姣王丛旭姚嘉赟劳顺健沈锦玉上海海洋大学水产与生命学院上海201200 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001 湖州市农业科技发展中心湖州313000

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法... 详细信息

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×1010—9.85×100copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法灵敏性高、特异性强、重复性好,可用于对鰤鱼诺卡氏菌病的早期诊断和定量检测,为诺卡氏菌病的早诊断早治疗提供了有效手段。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌 qPCR 诺卡氏菌病大口黑鲈

鰤鱼诺卡氏菌DmpA基因的克隆及亚细胞定位研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术通报 2017年第5期33卷 219-226页

作者：夏立群陈锐敏廖保山徐亮苏泽杰童邦卓广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,为兼性胞内菌。生物信息学分析显示鰤鱼诺卡氏菌DmpA基因的表达产物为分泌蛋白,且可能定位于宿主细胞的线粒体上。通过构建重组质粒p EGFP-DmpA和pc DNA-DmpA、鰤鱼诺卡氏... 详细信息

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,为兼性胞内菌。生物信息学分析显示鰤鱼诺卡氏菌DmpA基因的表达产物为分泌蛋白,且可能定位于宿主细胞的线粒体上。通过构建重组质粒p EGFP-DmpA和pc DNA-DmpA、鰤鱼诺卡氏菌胞外产物鉴定、亚细胞定位、过表达等方法,对鰤鱼诺卡氏菌DmpA基因进行了克隆、亚细胞定位及初步功能研究。结果表明在鰤鱼诺卡氏菌胞外产物中鉴定到了DmpA蛋白,证实其为分泌蛋白。亚细胞定位研究发现DmpA-GFP融合蛋白均匀地分布在FHM细胞中,与线粒体分布不重合,说明DmpA蛋白并不定位在线粒体上。DmpA-GFP融合蛋白的表达会改变FHM细胞线粒体的分布为团块状。DmpA在细胞中的过量表达对细胞核无明显影响,表明该基因无诱导细胞凋亡的功能。通过对鰤鱼诺卡氏菌DmpA的克隆、亚细胞定位和过表达研究,为进一步研究该基因的功能和深入了解鰤鱼诺卡氏菌的致病机理奠定了基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌 DmpA基因分泌蛋白亚细胞定位