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鬼臼毒素衍生物CIP-36诱导KBV200细胞凋亡

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中国药理学通报 2010年第5期26卷 607-610页

作者：吕晶晶张予阳陈虹曹波张元陆艳玲沈阳药科大学药理学教研室辽宁沈阳110016 天津职业病与环境危害生物标记重点实验室天津300162

目的研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对多药耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制。方法MTT法考察CIP-36对KBV200体外增殖的抑制作用;Giemsa染色、DNAladder和流式细胞仪等方法进行细胞凋亡检测;免疫荧光法观察CIP-36对细... 详细信息

目的研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对多药耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制。方法MTT法考察CIP-36对KBV200体外增殖的抑制作用;Giemsa染色、DNAladder和流式细胞仪等方法进行细胞凋亡检测;免疫荧光法观察CIP-36对细胞骨架的作用;West-ernblot法检测CIP-36对KBV200细胞P-glycoprotein表达的影响。结果CIP-36对KBV200细胞有明显的抑制作用,IC50值为(2.06±0.38)μmol.L-1,能够诱导细胞产生凋亡小体和DNAladder。流式细胞检测到了细胞凋亡峰,并观察到细胞周期出现S/G2+M期阻滞。Westernblot结果显示P-gp表达降低,并且观察到CIP-36可破坏KBV200细胞的细胞骨架。结论CIP-36可能通过降低P-gp的表达,破坏细胞骨架等多靶点克服KBV200细胞株的多药耐药性。

关键词： CIP-36 鬼臼毒素衍生物细胞周期多药耐药 P糖蛋白微管

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鬼臼毒素衍生物的EIMS谱分析研究

分析测试学报 2001年第z1期20卷 55-56页

作者：李前荣李碧琳杨晓华张廷虎中国科技大学理化科学中心安徽合肥230026 中国科技大学理化科学中心安徽合肥230026 中国科技大学理化科学中心安徽合肥230026 中国科技大学理化科学中心安徽合肥230026

鬼臼毒素及其衍生物由于具有抗肿瘤活性而引起人们对其结构、性能及合成产生的极大兴趣[1],它们的质谱研究也曾有报道[2,3].本文报道4种衍生物的EIMS谱的分析结果,它们的结构如下:……

关键词：鬼臼毒素衍生物谱分析鬼臼毒素及其衍生物抗肿瘤活性质谱研究结构性能兴趣合成

鬼臼毒素衍生物GP-14对HL-60细胞凋亡及端粒酶活性的影响

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中国公共卫生 2002年第12期18卷 1425-1427页

作者：梁亚玲尹少甫赵进昌田瑄兰州医学院微生物免疫教研室兰州730000 兰州大学化学系国家重点实验室

目的　观察自旋标记鬼臼毒素衍生物 4 β -N -〔4″- (2″,2″ ,6″ ,6″ -四甲基 - 1″ ,2″ ,5″,6″ -四氢吡啶 - 1″ -氮氧自由基 ) -酰胺基〕 - 4′ -去甲基表鬼臼毒素 (GP - 14 )对人白血病细胞系HL - 6 0的作用及对端粒酶活性的... 详细信息

目的　观察自旋标记鬼臼毒素衍生物 4 β -N -〔4″- (2″,2″ ,6″ ,6″ -四甲基 - 1″ ,2″ ,5″,6″ -四氢吡啶 - 1″ -氮氧自由基 ) -酰胺基〕 - 4′ -去甲基表鬼臼毒素 (GP - 14 )对人白血病细胞系HL - 6 0的作用及对端粒酶活性的影响。方法　采用MTT法、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测GP - 14对HL - 6 0细胞的作用 ;TRAP -ELISA法测定端粒酶活性。结果　GP - 14可明显抑制HL - 6 0细胞增殖。在一定剂量和时间范围内 ,GP - 14主要诱导HL - 6 0细胞凋亡 ,5 0 μmol/L处理 4 8小时凋亡率为 4 3 8% ;并可使端粒酶活性下降。结论　GP - 14能特异地诱导HL - 6 0细胞凋亡 ,抑制细胞端粒酶活性 ,对端粒酶活性的抑制作用比同等浓度的VP - 16强。为进一步开发其临床价值提供了依据。

关键词：鬼臼毒素衍生物 GP-14 自由基细胞凋亡 HL-60细胞端粒酶

鬼臼毒素衍生物QW-83对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其机制研究

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中国药房 2016年第7期27卷 892-895页

作者：冷玲高晨光陈虹牛聪曹波武警北京总队第三医院内一科北京100141 武警后勤学院救援医学系天津300309 武警总医院药剂科北京100039

目的：研究鬼臼毒素衍生物QW-83对人宫颈癌He La细胞凋亡的影响及其机制。方法：以0（阴性对照）、0.01、0.1、1、10μmol/L QW-83和阳性药物依托泊苷（VP-16）分别培养人宫颈癌He La细胞48 h后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制率和半数抑... 详细信息

目的：研究鬼臼毒素衍生物QW-83对人宫颈癌He La细胞凋亡的影响及其机制。方法：以0（阴性对照）、0.01、0.1、1、10μmol/L QW-83和阳性药物依托泊苷（VP-16）分别培养人宫颈癌He La细胞48 h后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制率和半数抑制浓度（IC50）;以0（阴性对照）、2.5、5、10μmol/L QW-83培养细胞48 h后,采用Hochest 33342染色观察细胞形态,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞中凋亡相关基因P53、Bax、Casepase-3、Casepase-8、Casepase-9和Bcl-2 m RNA的表达。结果：与阴性对照比较,1、10μmol/L VP-16和QW-83对He La细胞增殖有明显的抑制作用（P〈0.05或P〈0.01）,IC50值分别为（5.11±0.43）、（4.96±0.54）μmol/L;染色结果显示,QW-83作用后细胞凋亡明显,细胞固缩;流式细胞检测结果显示,QW-83作用后细胞凋亡率呈浓度依赖性升高,为16.89%~62.56%;RT-PCR结果显示,QW-83作用后细胞中P53、Bax、Casepase-3、Casepase-8、Casepase-9 m RNA的表达增强,Bcl-2 m RNA的表达减弱,Bax/Bcl-2比例升高（P〈0.05）。结论：鬼臼毒素衍生物QW-83能诱导人宫颈癌He La细胞的凋亡,其机制可能与调控凋亡相关基因m RNA的表达有关。

关键词：鬼臼毒素衍生物 QW-83 人宫颈癌He La细胞抗肿瘤活性凋亡相关基因依托泊苷

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鬼臼毒素衍生物的研究进展

沈阳药科大学学报 2012年第12期29卷 988-994页

作者：孙彦君陈虹华会明河南中医学院药学院河南郑州450046 沈阳药科大学基于靶点的药物设计与研究教育部重点实验室辽宁沈阳110016 武警医学院生药教研室天津300162

目的对鬼臼毒素衍生物的研究概况进行综述,为鬼臼毒素衍生物的深入研究提供依据。方法通过阅读近5年来29篇相关文献报道,从鬼臼毒素衍生物的抗癌作用机制、合成、构效关系等方面对其目前的研究概况进行综述。结果鬼臼毒素衍生物的合成... 详细信息

目的对鬼臼毒素衍生物的研究概况进行综述,为鬼臼毒素衍生物的深入研究提供依据。方法通过阅读近5年来29篇相关文献报道,从鬼臼毒素衍生物的抗癌作用机制、合成、构效关系等方面对其目前的研究概况进行综述。结果鬼臼毒素衍生物的合成目前仍以鬼臼毒素C4位修饰为主,最新的文献研究表明与C4位有含氧取代基的鬼臼毒素衍生物相比,相应位置没有取代基的鬼臼毒素类似物细胞毒活性更强。结论为鬼臼毒素衍生物的合成提供参考数据。

关键词：鬼臼毒素衍生物抗肿瘤作用机制合成构效关系

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鬼臼毒素衍生物的合成及其抗肿瘤活性的研究

鬼臼毒素衍生物的合成及其抗肿瘤活性的研究

作者：左松天津医科大学

学位级别：硕士

鬼臼毒素是一种具有显著的抗肿瘤作用和抗病毒作用的芳基四氢萘木脂素。因其具有毒副作用,自二十世纪五十年代起人们对鬼臼毒素进行了大量的结构修饰工作,其衍生物NK611、NPF、GL331和TOP53作为抗肿瘤新药已进入临床研究,而VP-16, VM-2... 详细信息

鬼臼毒素是一种具有显著的抗肿瘤作用和抗病毒作用的芳基四氢萘木脂素。因其具有毒副作用,自二十世纪五十年代起人们对鬼臼毒素进行了大量的结构修饰工作,其衍生物NK611、NPF、GL331和TOP53作为抗肿瘤新药已进入临床研究,而VP-16, VM-26已经进入了临床试用阶段。此外,Indibulin（D-24851）是德国ASTA公司开发的具有促进微管蛋白解聚作用的新型小分子微管蛋白抑制剂,在体内及体外实验中均显示出较强的抗肿瘤活性,在基于小鼠的体内实验中未见其显示出系统毒性,它还具有结构简单、易于合成、口服易吸收、对多药耐药肿瘤有效的优点,现已进入临床试验阶段。本文在分析了鬼臼毒素类化合物的构效关系的基础上,为了获得更为高活性且具有抗多药耐药活性的抗肿瘤新药,应用药物设计的“拼合”原理,合成了一系列新的4β-氮取代鬼臼毒素衍生物：将4β-氨基-4-脱氧鬼臼毒素与取代的吲哚分子以草酰基为桥连接合成了25个吲哚3-草酰胺基鬼臼毒素类衍生物,将4β-叠氮-4-脱氧鬼臼毒素与炔烃类化合物反应合成了11个含有1,2,3-三氮唑的鬼臼毒素衍生物。本文合成的某些衍生物的体外抗肿瘤活性高于依托泊苷,某些衍生物的体外抗多药耐药活性高于依托泊苷,尤其是4-三氮唑类衍生物具有结构新颖、分子质量较小、体外活性高等优良特点,具有广阔的深入研究前景。

关键词：鬼臼毒素衍生物 D-24851 1,2,3-三氮唑抗肿瘤多药耐药

鬼臼毒素衍生物CWH-2诱导多药耐药细胞株K562/A02凋亡及其作用机制研究

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鬼臼毒素衍生物CWH-2诱导多药耐药细胞株K562/A02凋亡及其作用机...

作者：张实河北医科大学

学位级别：硕士

目的:本文研究新型鬼臼类衍生物CWH-2对K562/A02细胞抗多药耐药作用,探究其作用机制,为鬼臼毒素衍生物结构优化奠定实验基础。方法:1 MTT法检测CWH-2体外抗肿瘤活性。MTT法检测正常细胞(Hacat、FB)及多种肿瘤细胞(A549、Hela、SKOV3、SH... 详细信息

目的:本文研究新型鬼臼类衍生物CWH-2对K562/A02细胞抗多药耐药作用,探究其作用机制,为鬼臼毒素衍生物结构优化奠定实验基础。方法:1 MTT法检测CWH-2体外抗肿瘤活性。MTT法检测正常细胞(Hacat、FB)及多种肿瘤细胞(A549、Hela、SKOV3、SH-SY5Y、MCF-7、Hep G-2、K562、K562/A02)的IC50值,分析CWH-2对K562/A02细胞的耐药程度并绘制K562及K562/A02细胞的生长曲线。2 Giemsa染色法及Hoechst33342荧光染色法观察细胞结构的变化,初步探讨CWH-2促凋亡作用及其机制。3琼脂糖凝胶电泳法分析CWH-2诱导K562/A02细胞DNA断裂的变化。4流式细胞术分析不同剂量CWH-2对K562及K562/A02细胞周期及凋亡率的影响。5 RT-PCR检测VP-16和不同浓度CWH-2对K562及K562/A02细胞mdr-1、p53、Bax、caspase-3、PCNA、TopoⅡαm RNA表达的影响。6通过抑瘤率的计算研究不同剂量CWH-2治疗动物移植肿瘤模型的效果。结果:1 CWH-2体外抗肿瘤的活性通过MTT法检测发现CWH-2体外抗多种肿瘤细胞效果显著,IC50值的范围在0.39～8.63μmol/L之间,明显高于已经上市的临床抗肿瘤药物VP-16(3.74～67.44μmol/L)的抗肿瘤活性。通过对亲本白血病细胞株和其耐药株的测定,CWH-2显示出抗多药耐药的潜能。CWH-2对人源正常细胞Hacat和Fb的杀伤作用明显减弱,其IC50分别为224.38±3.83μmol/L和60.93±1.05μmol/L,说明CWH-2对细胞的杀伤具有一定的特异甄别性。MTT结果显示:耐药株K562/A02对ADM的耐药倍数为41.14(亲本K562细胞IC50=0.53±0.04μmol/L;其耐药株K562/A02细胞IC50=21.81±0.92μmol/L),而通过对不同浓度CWH-2作用于K562和K562/A02后绘制生长曲线,结果显示:相同药物浓度的CWH-2和VP-16对同种细胞的抑制程度有明显差异,CWH-2具有起效快,药效持续,且具有剂量依赖性特点。2 CWH-2体内抗肿瘤作用将CWH-2(20mg/kg/d、30mg/kg/d)连续腹腔注射6天,S180鼠肉瘤细胞的体内生长抑制率(58.39%和64.48%)与阴性对照组比较差异显著(P0.05)。VP-16组抑瘤率为72.63%,死亡率明显高于其它组,且体重比与阴性对照组比较有明显差异(P<0.01)。结果说明:CWH-2在体内抑制肿瘤作用明显,且毒性小于VP-16。3 CWH-2诱导耐药株细胞凋亡的研究不同浓度CWH-2(3,8,12μmol/L)作用K562/A02细胞24h后,光学显微镜(10×)下显示:随着药物浓度的增加,细胞碎裂的程度增大,且药效较VP-16明显。进一步观察发现:未加药组的肿瘤细胞染色均匀,形态饱满,结构完整;给药组则出现明显的细胞核皱缩现象,随着浓度增加细胞膜破碎,并在高浓度组出现细胞核固缩成均一致密物,进而发生分裂,内部结构发生巨大改变,形成大小不一的凋亡小体排出膜外。在荧光显微镜下观察凋亡的特征更加突出,发生裂变的细胞呈亮蓝色,高浓度组的凋亡小体数量最多。通过琼脂糖凝胶电泳试验,试验结果显示:经过药物作用后的细胞,其核小体已断裂形成DNA片断,经过提取和纯化后在凝胶电泳上产生n条带,形成了典型的“DNA ladder”图谱。分析流式细胞术检测药物作用后的细胞凋亡率的结果,从整体来看,无论是24h,还是时间达至48h,细胞的凋亡率随药物剂量的增大而增大,且浓度越高增涨幅度越大。并且,从凋亡率来看,在48h时三种剂量的CWH-2均高于VP-16。K562/A02细胞在药物CWH-2作用下的凋亡率具有时间及剂量依赖性的特点。以上从形态学、琼脂糖凝胶电泳试验、流式细胞术三个实验的结果证实CWH-2对白血病耐药株K562/A02具有促使其凋亡的作用。4 CWH-2对白血病耐药株K562/A02生长周期的影响不同浓度CWH-2(3,8,12μmol/L)作用于K562/A02细胞24h、48h,结果显示:24h和48h细胞周期被阻断于S期。***-2对K562/A02和(或)K562多种基因mdr-1、TopoⅡα,p53、Bax、caspase-3、PCNA的m RNA表达影响。不同浓度CWH-2(K562:2,4,8μmol/L;K562/A02:3,8,12μmol/L)作用于K562和(或)K562/A02细胞24小时后,RT-PCR结果显示:CWH-2可下调K562细胞PCNA m RN

关键词：鬼臼毒素衍生物抗多药耐药细胞凋亡细胞周期

鬼臼毒素衍生物P100抗肿瘤多药耐药作用及机制研究

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鬼臼毒素衍生物P100抗肿瘤多药耐药作用及机制研究

作者：高晨光河北医科大学

学位级别：硕士

目的:本文以多种肿瘤细胞和小鼠H22肝癌移植瘤为实验对象,研究鬼臼毒素衍生物P100的抗肿瘤作用,同时以K562细胞及多药耐药K562/A02细胞为实验对象研究肿瘤多药耐药机制以及P100抗多药耐药的机制。方法:1通过MTT法检测K562/A02细胞的多... 详细信息

目的:本文以多种肿瘤细胞和小鼠H22肝癌移植瘤为实验对象,研究鬼臼毒素衍生物P100的抗肿瘤作用,同时以K562细胞及多药耐药K562/A02细胞为实验对象研究肿瘤多药耐药机制以及P100抗多药耐药的机制。方法:1通过MTT法检测K562/A02细胞的多药耐药性及P100对多种肿瘤细胞的抑制效果。2建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,通过尾静脉一次注射P100(5,10,20mg/kg’weight)药液评价体内抗肿瘤作用。3通过Hoechst33342、PI染色法观察P100诱导K562细胞及K562/A02细胞的凋亡形态;DAPI染色法观察P100诱导K562/A02细胞的凋亡形态。4流式细胞术检测P100诱导K562细胞及K562/A02细胞凋亡的凋亡率5实时荧光定量PCR法检测K562细胞及P100作用K562/A02细胞后PI3K基因、Akt基因、NF-κB基因、MDR-1基因、MRP基因、Caspase3基因、Caspase9基因mRNA表达的影响6 Western Blot法检测K562细胞及P100作用K562/A02细胞后PI3K p110α蛋白、Akt1蛋白、Phospho-Akt1蛋白、IκBα蛋白、Phospho-IκBα蛋白、NF-κB p65蛋白、Phospho-NF-κB p65蛋白、P糖蛋白、Caspase3蛋白、Cleaved Caspase3蛋白、Caspase9蛋白、Cleaved Caspase9蛋白、Caspase8蛋白及Cleaved Caspase8蛋白表达的影响7通过RNAi技术干扰K562A/02细胞中MDR-1基因、NF-κB P65基因、Akt1基因的表达,检测K562A/02细胞对阿霉素的耐药性及相关蛋白表达的变化。结果:1 MTT法检测结果发现K562A/02细胞对多种作用机制不同的抗肿瘤药物均有明显耐药性;P100对H4细胞、Hela细胞、A549细胞、MCF-7细胞、k562细胞、k562/a02细胞均有较好的抑制活性(ic50值范围:0.06μmol/l.6μmol/l),而且抑制活性普遍高于阳性药物vp-16,尤其对多药耐药细胞k562/a02,阳性对照药vp-16的抑制效果较差(ic50值:21.83±4.78μmol/l),而p100能有效抑制k562a/02细胞生长(ic50值:4.90±0.86μmol/l)。另外,p100对人正常血管内皮细胞926、心肌细胞h9c2均无明显毒性。2小鼠h22移植瘤实验结果显示:不同浓度的p100(5,10,20mg/kg’weight)对小鼠肝癌移植瘤生长有明显的抑制,抑制率分别达到31.3%、50.6%、70.0%。阳性对照药vp-16(20mg/kg’weight)抑制率为51.3%。3hoechst33342、pi染色结果显示k562细胞及k562a/02细胞形态完整,随着不同浓度p100作用,细胞开始出现不规则形态,细胞发生皱缩、碎裂,有凋亡小体产生。随药物浓度增加凋亡越明显;dapi染色结果显示随着不同浓度p100作用,k562/a02细胞开始皱缩,部分细胞胞核固缩。4流式细胞术检测结果显示不同浓度的p100(1μmol/l、2μmol/l、4μmol/l)诱导k562细胞发生凋亡,凋亡比例分别为23.92±2.15%、54.37±4.97%、65.09±5.63%,vp-16(4μmol/l)组的凋亡比例为43.46±2.30%。p100(2.5μmol/l、5μmol/l、10μmol/l)诱导k562/a02细胞发生凋亡,凋亡比例分别为16.06±1.23%、27.29±3.36%、55.56±2.69%,阳性对照药vp-16(10μmol/l)组的凋亡比例为21.08±3.76%。可见p100诱导k562及k562/a02细胞凋亡能的力明显强于vp-16。5实时荧光定量pcr结果显示k562a/02细胞比k562细胞中pi3k基因、akt1基因、nf-κb基因、mdr-1基因、mrp基因mrna表达升高,不同浓度p100(2.5μmol/l、5μmol/l、10μmol/l)作用后可下调k562a/02细胞pi3k基因、akt基因、nf-κb基因、mdr-1基因、mrp基因mrna表达,并上调caspase9基因、caspase3基因mrna表达。6westernblot检测结果显示k562a/02细胞比k562细胞中pi3kp110α蛋白、phospho-akt1蛋白、phospho-iκbα蛋白、nf-κbp65蛋白、phospho-nf-κbp65蛋白、p糖蛋白表达升高。不同浓度p100(2.5μmol/l、5μmol/l、10μmol/l)作用k562a/02细胞后,可下调pi3kp110α蛋白、P

关键词：鬼臼毒素衍生物 P糖蛋白多药耐药核因子-κB 多药耐药基因1 抗肿瘤活性细胞凋亡

鬼臼毒素衍生物ZM-16抗肿瘤多药耐药作用及其作用机制研究

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鬼臼毒素衍生物ZM-16抗肿瘤多药耐药作用及其作用机制研究

作者：杨再鑫河北医科大学

学位级别：硕士

目的:研究新鬼臼毒素衍生物ZM-16体外抗人源肿瘤细胞多药耐药作用及其诱导耐药肿瘤细胞凋亡的作用,初步探讨ZM-16抗肿瘤多药耐药作用机制,为抗肿瘤新药开发、研制提供理论基础。方法:1 MTT法和SRB法分别检测ZM-16对Hela、Skov3、Lovo... 详细信息

目的:研究新鬼臼毒素衍生物ZM-16体外抗人源肿瘤细胞多药耐药作用及其诱导耐药肿瘤细胞凋亡的作用,初步探讨ZM-16抗肿瘤多药耐药作用机制,为抗肿瘤新药开发、研制提供理论基础。方法:1 MTT法和SRB法分别检测ZM-16对Hela、Skov3、Lovo、KB、KBv200、K562和K562/A02细胞生长的抑制活性。2以K562/A02和KBv200为研究对象,采用Giemsa染色技术、Hoechst33342/PI荧光双染技术、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞技术观察了ZM-16诱导K562/A02和KBv200细胞凋亡与作用效果。3 RT-PCR法检测不同浓度ZM-16(1μM、4μM)对K562/A02细胞p53、p21、caspase-3、bcl-2、bax等凋亡相关基因以及mdr-1、topoⅡα、topoⅡβ耐药相关基因的mRNA表达的影响。4 Western-blot法和免疫细胞化学法检测不同浓度ZM-16(1μM、4μM)对K562/A02细胞P-gp表达的影响,初步分析了ZM-16抗肿瘤多药耐药的机制。5激光共聚焦检测不同浓度ZM-16(1μM、4μM)对KBv200细胞微管蛋白的影响。结果:1 MTT实验发现ZM-16对多种贴壁肿瘤细胞均有较强的抑制作用,IC50为0.43～20.95μM。从SRB结果可看出:ZM-16对人红白血病细胞(K562)及阿霉素诱导的多药耐药株(K562/A02)均有抑制作用,GI50分别为:4.39μM和2.28μM。通过对K562/A02细胞生长曲线的观察,发现不同浓度的ZM-16对K562/A02细胞的生长有明显的抑制作用,并且具有显著的量效关系。 2 ZM-16能够诱导K562/A02和KBv200细胞凋亡。不同浓度的ZM-16 (1μM、4μM)作用于K562/A02细胞24h后,分别用Giemsa染液和荧光染料Hoechst 33342/PI对细胞进行染色,前者将细胞核染成粉红色,胞浆染成蓝紫色。未加药组的细胞核染色均一、结构完整、核浆比值大;给药组细胞呈现核膜皱缩,核固缩、边集、碎裂。经荧光双染后的细胞在紫外光激发下发蓝色和红色荧光,ZM-16可使细胞核染色质发生聚集、碎裂,细胞膜不断出芽、脱落,细胞变成数个大小不等的凋亡小体,并且随着ZM-16浓度的加大,镜下具有这种细胞形态变化的细胞数量愈加明显,凋亡细胞的比例逐渐增加。在DNA凝胶电泳实验中,用不同浓度的ZM-16分别作用于KBv200细胞24h,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,可呈现典型的“DNA梯子样”图谱。应用流式细胞仪进行肿瘤细胞凋亡率测定,可见经不同浓度的ZM-16(1μM、4μM)作用于K562/A02细胞24h后,出现一个明显“亚二倍体峰”,即凋亡峰,且凋亡细胞的比例随着ZM-16浓度的升高而增加,呈一定的剂量依赖性。 3用不同浓度的ZM-16分别作用于K562/A02细胞6h和24h,短时间低剂量可使细胞周期阻断在S期,延长作用时间及增加给药浓度细胞被阻滞于G2/M期。 4 RT-PCR结果显示1μM、4μM ZM-16能升高p53、p21、caspase-3 mRNA的水平,同时降低bcl-2、mdr-1 mRNA的水平,与对照组相比差异有统计学意义,但对bax、topoⅡα、topoⅡβ作用不明显。 5经不同浓度的ZM-16(1μM、4μM)作用于K562/A02细胞48h,Western-blot及免疫细胞化学结果显示ZM-16可下调P-gp表达,且呈一定的剂量依赖性,Western-blot结果中高剂量组与阴性对照组相比P鬼臼毒素(1μM)处理后的细胞微管不再成束,呈现更明显的点状不规则荧光。高剂量ZM-16处理后的细胞微管形态变化与鬼臼毒素处理后结果相似。结论: ZM-16结构新颖、体外抑瘤效果明显,而且对多药耐药肿瘤细胞也有明显抑制作用;能将肿瘤细胞生长周期阻断在G2/M期,同时通过影响p53、p21、caspase-3、bcl-2、mdr-1 mRNA及P-gp蛋白水平,抑制细胞微管聚合,影响纺锤体形成来阻止细胞有丝分裂,从而诱导耐药肿瘤细胞的凋亡。因此,ZM-16有望成为一个有自主知识产权的新型抗肿瘤多药耐药化合物。

关键词：鬼臼毒素衍生物抗多药耐药细胞周期凋亡微管