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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 343-346页

作者：娄淑杰王晨光黄秀英陈宜张第二军医大学基础医学部生理学教研室

目的：分析高钾离子（Ｋ＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌＩｍａｇｅＳｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ２＋］ｉ，Ｃａ２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣｌ浓... 详细信息

目的：分析高钾离子（Ｋ＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌＩｍａｇｅＳｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ２＋］ｉ，Ｃａ２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣｌ浓度为３０～１００ｍｍｏｌ／Ｌ时，可剂量依赖性地诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高；（２）在细胞外无Ｃａ２＋时，高Ｋ＋对ＰＣ１２细胞［Ｃａ２＋］ｉ无影响；（３）Ｌ－型电压门控钙通道阻滞剂维拉帕米、地尔硫和硝苯地平的浓度分别为５×１０－５，１×１０－４和５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ时，可完全阻断高Ｋ＋诱导的ＰＣ１２细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高，但Ｎ－型电压门控钙通道阻滞剂ω－ｃｏｎｏｔｏｘｉｎＧＶＩＡ在浓度为１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ时，对高Ｋ＋诱导的ＰＣ１２细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高没有影响；（４）５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ维拉帕米对细胞外由无Ｃａ２＋到有Ｃａ２＋过程引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高无抑制作用。结论：高Ｋ＋引起ＰＣ１２细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高以细胞质膜上Ｌ－型电压门控Ｃａ２＋通道开放为基础。

关键词： PC12细胞高钾离子钙离子浓度

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糖皮质激素快速抑制高钾离子诱导嗜铬细胞瘤细胞内游离钙浓度升高的作用及其特征

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生理学报 1998年第5期50卷 563-569页

作者：娄淑杰王晨光黄秀英陈宜张第二军医大学生理学教研室神经科学研究所上海200433 中国科学院发育生物学研究所开放实验室北京100081

本研究应用钙离子特异荧光指示剂Fura－2／AM，使用Miracal影像系统（MiracalImageSystem）检测了糖皮质激素对高钾离子升高嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）内游离钙浓度（[Ca2+]i）作用的影响。结果表明：（1）皮质酮抑制高钾离子诱导PC12... 详细信息

本研究应用钙离子特异荧光指示剂Fura－2／AM，使用Miracal影像系统（MiracalImageSystem）检测了糖皮质激素对高钾离子升高嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）内游离钙浓度（[Ca2+]i）作用的影响。结果表明：（1）皮质酮抑制高钾离子诱导PC12细胞[Ca2+]i升高与其预处理细胞时间的长短有关，预处理3min时，皮质酮开始产生抑制作用；预处理5min时，其呈现的抑制作用最强；预处理25min时，抑制作用基本消失。（2）皮质酮在10－8～10－5mol／L范围内时可呈剂量-效应关系，抑制高钾离子诱导的PC12细胞[Ca2+]i升高，皮质团浓度为10－5mol／L时，其产生的抑制作用最大；在10－9mol／L时抑制作用不明显。（3）其它自体激素如皮质醇。地塞米松、孕酮、雌二醇、睾酮、醛固酮在浓度为10－5mol／L时，也能抑制高钾离子引起的PC12细胞[Ca2+]i升高，但在同一浓度时作用强度有所不同。胆固醇浓度为10－5mol／L时，对高钾离子诱导PC12细胞钙浓度升高没有抑制作用。在同一浓度时它们的作用强度顺序大致为：孕酮＝皮质醇＞地塞米松＞睾酮＞醛固酮＝雌二醇＞＞胆固醇。（4）在皮质酮浓度为10－5mol／L时不能抑制由细胞外无钙到有钙过程引起的PC12细胞[Ca2+]i升高。

关键词：糖皮质激素 PC12细胞高钾离子 Fura-2/AM

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肿瘤高钾微环境通过抑制PERK/ATF3通路诱导铁死亡抵抗

肿瘤高钾微环境通过抑制PERK/ATF3通路诱导铁死亡抵抗

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作者：浦旭锋江苏大学

学位级别：硕士

研究目的:本研究主要探究肿瘤高钾微环境下对肿瘤细胞铁死亡的影响,阐明可能的分子机制,为肿瘤微环境治疗提供潜在的靶点。研究方法:首先配置高渗高钾培养基,在DMEM培养基中加入不同浓度的氯化钾;同时又配置相同浓度的等渗培养基以排除... 详细信息

研究目的:本研究主要探究肿瘤高钾微环境下对肿瘤细胞铁死亡的影响,阐明可能的分子机制,为肿瘤微环境治疗提供潜在的靶点。研究方法:首先配置高渗高钾培养基,在DMEM培养基中加入不同浓度的氯化钾;同时又配置相同浓度的等渗培养基以排除单纯加氯化钾引起渗透压改变的影响。不同浓度的高钾培养基联合铁死亡诱导剂(Erastin;RSL3)为实验组,常规钾离子浓度的培养基联合铁死亡诱导剂为对照组;CCK-8法、细胞克隆及Edu增殖实验法检测高浓度钾对肿瘤细胞铁死亡的影响;RNA测序技术筛选高钾导致铁死亡抵抗的潜在通路;全波长酶标仪检测高钾及GSK2606414处理后的细胞内GSH、MDA相对含量;流式细胞仪检测肿瘤细胞内ROS及钙离子相对水平;WB分析ATF3、PERK、IRE1及ATF6α的蛋白表达;构建ATF3敲除质粒检测ATF3对铁死亡的影响;将高钾预处理一周的细胞植入小鼠皮下,体内验证高钾对铁死亡的影响;免疫组化验证高浓度钾对ATF3及铁死亡指标COX2表达的影响。结果:1、CCK-8结果显示高钾可以显著挽救Erastin引起的铁死亡,当钾离子浓度达35mM时效果最甚(P值高钾处理组细胞依旧有增殖能力。3、RNA测序结果揭示,Erastin处理后细胞内质网相关基因显著上调,而高钾联合Erastin处理组内质网并没有显著上调,提示高钾可能通过内质网影响铁死亡。4、使用不同内质网抑制剂并联合Erastin处理,发现抑制内质网PERK相关通路可显著挽救Erastin引起的铁死亡(P值高钾可能通过内质网相关蛋白ATF3来影响铁死亡。Western blot结果显示,使用Erastin后,细胞内ATF3水平显著升高,联合高浓度钾后则显著下调。6、敲除ATF3后显著提高细胞对铁死亡的耐性(P值高钾预处理细胞可显著挽救PE引起的铁死亡(P值高钾预处理组能显著降低PE引起COX2及ATF3的表达。研究结论:高浓度钾离子通过抑制ATF3表达抑制肿瘤细胞铁死亡

关键词：高钾离子铁死亡 ATF3 内质网应激

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钾离子抑制胰腺癌的铁死亡及其机制

钾离子抑制胰腺癌的铁死亡及其机制

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作者：高钦玥江苏大学

学位级别：硕士

目的:肿瘤微环境在胰腺癌的发生发展及治疗抵抗中起着至关重要的作用。本研究目的在于探讨肿瘤微环境中高钾离子对胰腺癌的铁死亡的作用及其具体机制,为进一步完善针对肿瘤微环境的治疗提供理论基础。方法:根据文献报道的方法,构建细胞... 详细信息

目的:肿瘤微环境在胰腺癌的发生发展及治疗抵抗中起着至关重要的作用。本研究目的在于探讨肿瘤微环境中高钾离子对胰腺癌的铁死亡的作用及其具体机制,为进一步完善针对肿瘤微环境的治疗提供理论基础。方法:根据文献报道的方法,构建细胞高钾培养基模拟肿瘤微环境中的高钾微环境。高钾培养基联合铁死亡诱导剂Erastin设为实验组,常规培养基联合Erastin设为对照组;CCK-8法检测高浓度钾离子对胰腺癌细胞铁死亡的影响,SYTOX Green死细胞染色检测高钾离子对铁死亡的细胞形态影响;全波长酶标仪检测胰腺癌细胞内的还原型谷胱甘肽和脂质过氧化物丙二醛的相对含量;荧光定量PCR实验和Western blot实验检测KCNN4,AKT,GPX4等基因的m RNA和蛋白表达。分析TCGA数据库中KCNN4和铁死亡相关指标表达量的关系和KCNNA在胰腺癌中的含量;采用KCNN4抑制剂和KCNN4干扰质粒检测KCNN4对胰腺癌铁死亡的影响。结果:Erastin试剂可以诱导胰腺癌铁死亡,高钾可以抑制胰腺癌细胞铁死亡。荧光倒置显微镜观察高钾联合Erastin正常细胞形态的数量多于Erastin处理组。高钾联合Erastin组的胰腺癌细胞内的还原型谷胱甘肽相对水平高于Erastin对照组细胞,而脂质过氧化物相对水平则低于对照组。Western blot检测结果显示,高钾联合铁死亡诱导剂组的胰腺癌细胞内GPX4,AKT水平高于对照组,而ACLY蛋白水平则低于对照组。RT-q PCR的结果显示GPX4的表达水平与蛋白水平一致。使用GEPIA工具网站分析KCNN4与铁死亡膜蛋白SLC7A11,SLC3A2,SLC40A1等基因的相关性,结果显示KCNN4与上述基因都有较强的相关性。Oncomine分析结果显示KCNN4在胰腺癌组织中的表达水平高于正常胰腺组织;TCGA数据做基因热图分析KCNN4与铁死亡相关信号通路,如脂质代谢,铁代谢以及抗氧化通路相关指标有一定的联系。高钾联合Erastin组的胰腺癌细胞内的KCNN4蛋白表达水平低于Erastin对照组细胞,KCNN4抑制剂联合Erastin试剂组的胰腺癌细胞铁死亡率降低,差异具有统计学意义。sh-KCNN4 BXPC3细胞在Erastin试剂处理后,其细胞活性高于对照组细胞,差异具有统计学意义。Erastin处理后的sh-KCNN4 BXPC3细胞内的还原型谷胱甘肽的相对水平高于Erastin处理后的sh-EGFP BXPC3细胞,差异具有统计学意义。结论:高钾离子通过调控KCNN4基因抑制胰腺癌的铁死亡。

关键词：胰腺癌铁死亡高钾离子 KCNN4

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