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高车前苷改善棕榈酸所致的血管内皮细胞凋亡

中药药理与临床 2014年第3期30卷 39-42页

作者：王辉何柏球王立英梁敬钰吴斐华中国药科大学中药药理教研室南京211198 中国药科大学天然药物化学教研室南京211198

目的:探讨高车前苷对棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:建立棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡模型,荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,以Annexin V-FITC染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用荧光显微镜检测细胞... 详细信息

目的:探讨高车前苷对棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:建立棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡模型,荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,以Annexin V-FITC染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用荧光显微镜检测细胞内活性氧和一氧化氮的水平。结果:高车前苷(1,10μmol/L)明显抑制由棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡,降低内皮细胞内活性氧的水平和增加细胞内一氧化氮的生成。结论:高车前苷对棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡具有保护作用,其作用机制与抗氧化应激有关。

关键词：高车前苷棕榈酸血管内皮细胞凋亡活性氧

高车前苷用于金黄色葡萄球菌皮肤感染创口的治疗研究

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高车前苷用于金黄色葡萄球菌皮肤感染创口的治疗研究

作者：王笑凡中南大学

学位级别：硕士

目的:1.观察高车前苷对金黄色葡萄球菌的抗菌作用,并对相关机制进行初步探讨。2.评估高车前苷维持氧化应激平衡和局部抗炎能力;并评价其用于金黄色葡萄球菌感染的皮肤创口的治疗效果。方法:1.采用微量肉汤稀释法确认不同浓度高车前苷对... 详细信息

目的:1.观察高车前苷对金黄色葡萄球菌的抗菌作用,并对相关机制进行初步探讨。2.评估高车前苷维持氧化应激平衡和局部抗炎能力;并评价其用于金黄色葡萄球菌感染的皮肤创口的治疗效果。方法:1.采用微量肉汤稀释法确认不同浓度高车前苷对浮游金黄色葡萄球菌的抗菌效果,棋盘稀释法寻找与高车前苷产生协同效应的抗生素,应用时间杀伤实验评价其持续杀菌效果。进一步利用结晶紫染色法、银染法观察高车前苷以及与抗生素联用对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制和分散能力,并通过激光共聚焦显微观察对膜内菌的杀伤作用。2.通过DCPH-DA、SYTO Green、PI和Di BAC4(3)荧光实验、ATP测定、透射电镜及DNA电泳探讨高车前苷联用抗生素的抗菌机制;RT-q PCR法检测金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因转录水平。3.通过红细胞溶血试验和CCK-8实验分别检测高车前苷对血细胞破坏力及对细胞活力的影响。ICR雄鼠尾静脉注射不同剂量高车前苷以观测其对血液、生化指标和主要脏器的影响。4.通过ROS和MDA测定、划痕实验观察高车前苷的体外抗氧化和促迁移潜力;构建小鼠全皮层皮肤伤口模型,观察14天伤口愈合率、第3、7、14天伤口组织病理表征,测定血清SOD、MDA和GSH水平、局部炎症因子和生长因子表达量,评估高车前苷的创伤修复效果。5.构建小鼠MRSA皮肤感染模型,采用皮肤涂抹的方式给药,通过创面细菌计数、血液学感染指标、血清SOD和GSH水平、创面病理分析及IL-6和TNF-α免疫荧光染色等评价高车前苷以及与抗生素联用治疗感染伤口的体内疗效。结果:1.0.5μg/m L至64μg/m L浓度的高车前苷可以抑制金黄色葡萄球菌且没有浓度依赖性。最低浓度0.5μg/m L的高车前苷对20株金黄色葡萄球菌(4株标准菌株和16株临床菌株)的抑制率范围为22.49%～57.41%。高车前苷与阿米卡星(Amikacin,AMK)联用后产生了协同效应:对ATCC 29213(MSSA)和ATCC 43300(MRSA)的FICI分别为高车前苷与AMK联用表现出对金黄色葡萄球菌生物膜较强的抑制和根除能力。4μg/m L高车前苷和0.5μg/m L AMK联合对ATCC 29213的生物膜分散率为61.11%,4μg/m L高车前苷和5μg/m L AMK联合对ATCC 43300的生物膜分散率达到72.16%,并使生物膜内部细菌失去活性。2.4μg/m L高车前苷与5μg/m L AMK联合通过升高细菌膜电位、胞内ATP累积和DNA损伤等综合机制杀灭MRSA。药物联用可能通过提高fib和ebps基因表达,并降低fnb A、cid A和ica A的表达,从而发挥抑制和根除金黄色葡萄球菌生物膜的效能。3.高车前苷具有较好的体外和体内生物安全性。高达256μg/m L的高车前苷对He La和HSF细胞形态和活力无显著影响;连续3天高剂量(60 mg/kg/天)的尾静脉注射给药几乎不改变ICR雄鼠的体重、7天存活率及重要脏器结构和功能。4.1、50、100μg/m L的高车前苷在体外对He La细胞的48 h迁移率分别较对照组提高了16.15%、24.31%及32.22%。在皮肤创口模型中,高车前苷通过增强SOD和MDA活性、降低MDA水平、抑制创面炎症细胞因子IL-6和IL-8的表达、促进VEGF、PDGF和TGF-β1的表达,加速皮肤创面的修复。14天后创伤愈合率高达93.49%(0.25%,w/w)和97.83%(0.5%,w/w)。5.在MRSA感染的皮肤伤口模型中,高车前苷联合AMK给药减少了1.12×10 CFU/伤口的细菌载量,降低了WBC、NEU和CRP水平,在降低炎症反应、平衡氧化应激方面优于一线药物万古霉素。结论:高车前苷与AMK联用后在体内外展示出较强的抗金黄色葡萄球菌活性,并具有加速皮肤创伤愈合的功效,有潜力作为一种新型生物制剂用于治疗包括MRSA在内的金黄色葡萄球菌引起的感染性皮肤伤口。图33幅,表19个,参考文献166篇

关键词：高车前苷耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌生物膜皮肤伤口氧化应激炎症

HPLC法同时测定大鼠血浆中高车前苷和高车前素的浓度

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中药新药与临床药理 2015年第2期26卷 210-213页

作者：吴松陆姗姗王蓉丛友权韩晶晶方芸陈军南京中医药大学中西医结合鼓楼临床医学院江苏南京210008 南京中医药大学药学院药物制剂研究室江苏南京210023 南京大学医学院附属鼓楼医院江苏南京210008

目的建立HPLC法同时测定大鼠血浆中高车前苷、高车前素浓度的方法,初步探索高车前苷口服吸收规律。方法以大豆苷元为内标,采用液-液2次萃取处理大鼠血浆样品。采用AgilentCT-C18（250mm×4.6mm,5μm）和汉邦C18预柱（10mm×4.6mm,5μm）... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定大鼠血浆中高车前苷、高车前素浓度的方法,初步探索高车前苷口服吸收规律。方法以大豆苷元为内标,采用液-液2次萃取处理大鼠血浆样品。采用AgilentCT-C18（250mm×4.6mm,5μm）和汉邦C18预柱（10mm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（25∶75）;检测波长：335nm;流速：1.0mL·min^-1;柱温：30℃。以150mg·kg^-1剂量灌胃给药高车前苷,测定不同时间点大鼠体内高车前苷、高车前素的血药浓度。结果内源性杂质对样品测定无干扰。高车前苷在0.0433-2.163nmol·mL^-1,高车前素在0.333-16.65nmol·mL^-1范围内线性关系良好。血浆中高车前苷和高车前素的绝对回收率分别为82.41%-84.27%、91.00%-93.41%,方法回收率分别为97.58%-104.46%和95.41%-97.60%,日内精密度（RSD）均小于5.18%,日间精密度（RSD）均小于7.84%。样品冻融稳定性良好。灌胃给药高车前苷后,药物主要以高车前素的形式被吸收,高车前素的曲线下面积（AUC）为高车前苷的5.4倍。结论该法快速、灵敏、准确,可用于同时测定大鼠血浆中高车前苷、高车前素的含量。口服给药高车前苷,主要以高车前素的形式被吸收。

关键词：高车前苷高车前素高效液相色谱法药物动力学

高效液相色谱法测定复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量

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药物分析杂志 2000年第6期20卷 388-389页

作者：吴正红裴云萍方芸陈志一南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008

目的 :建立测定复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量的高效液相色谱法。方法 :以KF -C18(2 5 0mm× 4 6mm ,10 μm)为分析柱 ,流动相为甲醇 -水 -pH 3 5的 1 0mol·L-1磷酸盐缓冲液 (4 0∶5 5∶5 ) ;柱温为 45℃ ;检测波长为 335nm ;流速为 ... 详细信息

目的 :建立测定复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量的高效液相色谱法。方法 :以KF -C18(2 5 0mm× 4 6mm ,10 μm)为分析柱 ,流动相为甲醇 -水 -pH 3 5的 1 0mol·L-1磷酸盐缓冲液 (4 0∶5 5∶5 ) ;柱温为 45℃ ;检测波长为 335nm ;流速为 1 0mL·min-1,采用面积外标法。结果 :线性范围 3 12× 10 -3 ～ 0 2 0 μg ,平均回收率为 96 96 %～ 10 1 5 % ,RSD 高车前苷的含量和质量标准的控制。

关键词：高车前苷复方荔枝草颗粒剂高效液相色谱法

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荔枝草中高车前苷的提取与分析

江苏农业科学 2014年第12期42卷 304-306页

作者：孔庆新李思阳刘凯钦山清顾启明周红升江苏食品药品职业技术学院江苏淮安223003

对荔枝草中高车前苷的提取工艺进行了研究,并对提取物进行了红外光谱和HPLC纯度分析,还对其清除DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)的活性进行了检测。结果表明:在以60%乙醇为提取剂、浸提温度60℃、浸提时间2 h、提取2次、料液比1 g∶12 m ... 详细信息

对荔枝草中高车前苷的提取工艺进行了研究,并对提取物进行了红外光谱和HPLC纯度分析,还对其清除DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)的活性进行了检测。结果表明:在以60%乙醇为提取剂、浸提温度60℃、浸提时间2 h、提取2次、料液比1 g∶12 m L的提取工艺条件下,荔枝草中高车前苷提取量为1.41 g/kg。红外光谱分析显示荔枝草提取物是高车前苷,纯度为98.2%。荔枝草提取物高车前苷对DPPH的EC50=3.07 mg/L,对DPPH的清除率可达到90%以上,具有较强的抗氧化活性。

关键词：荔枝草高车前苷提取正交试验抗氧化

雪荔复方中高车前苷在大鼠各组织中的分布研究

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中国实验方剂学杂志 2013年第10期19卷 156-160页

作者：胡巍方芸彭苗苗南京大学医学院附属鼓楼医院南京210008

目的:研究雪荔复方灌胃给药后在大鼠体内的组织分布特点,为其临床应用提供理论依据。方法:采用HPLC法,Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(55∶45),流速0.8 ***-1,组织样本采用机械匀浆,乙腈沉淀处理供测定。结果:... 详细信息

目的:研究雪荔复方灌胃给药后在大鼠体内的组织分布特点,为其临床应用提供理论依据。方法:采用HPLC法,Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(55∶45),流速0.8 ***-1,组织样本采用机械匀浆,乙腈沉淀处理供测定。结果:大鼠灌胃给药后的组织分布实验表明,胃中高车前苷含量最高,1 h时高车前苷浓度最高为(7.496±0.636)μg.g-1,4 h降低至(5.237±0.373)μg.g-1,7 h降低至(1.763±0.157)μg.g-1,其次为肾,小肠组织,心、脾、肺中含量相对较低。结论:大鼠灌胃给药后高车前苷在各组织中均有分布,其在肾脏的高分布是雪荔复方治疗尿路感染的主要原因。

关键词：雪荔复方高车前苷组织分布

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HPLC测定荔枝草提取物中高车前苷的含量

中国实验方剂学杂志 2012年第23期18卷 59-61页

作者：葛婷婷程建明南京中医药大学南京210029

目的:建立荔枝草提取物中高车前苷含量的高效液相(HPLC)测定方法。方法:Hedera ODS-2色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(50∶50),柱温30℃,流速1 mL·min-1,检测波长335 nm。结果:高车前苷在0.20～2.01μg呈良好... 详细信息

目的:建立荔枝草提取物中高车前苷含量的高效液相(HPLC)测定方法。方法:Hedera ODS-2色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(50∶50),柱温30℃,流速1 mL·min-1,检测波长335 nm。结果:高车前苷在0.20～2.01μg呈良好的线性关系,平均回收率101.70%,RSD 1.84%。结论:该方法简便、准确、专属性强,可以作为荔枝草提取物中高车前苷含量测定的一种有效方法。

关键词：荔枝草提取物 HPLC 高车前苷含量测定

土壤水分对中药荔枝草生长和高车前苷含量的影响

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现代中药研究与实践 2010年第4期24卷 16-19页

作者：石莹莹张强华熊清平张丹雁淮阴工学院生化学院江苏省凹土资源利用重点试验室江苏淮安223003 广州中医药大学广东广州510405

目的探索土壤水分对荔枝草生长和高车前苷含量的影响。方法通过人工浇水方式控制土壤含水量,定时采样,测定荔枝草生物量和高车前苷含量,分析其对土壤水分的响应。结果在土壤含水率45～55%的正常湿润条件下,荔枝草的生物量和全株高车前... 详细信息

目的探索土壤水分对荔枝草生长和高车前苷含量的影响。方法通过人工浇水方式控制土壤含水量,定时采样,测定荔枝草生物量和高车前苷含量,分析其对土壤水分的响应。结果在土壤含水率45～55%的正常湿润条件下,荔枝草的生物量和全株高车前苷总含量均较高。结论湿润环境有利于荔枝草的生长和总高车前苷的积累。

关键词：土壤水分荔枝草生物量高车前苷

荔枝草中高车前苷的提取分离和光谱色谱特征图谱的建立

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现代中药研究与实践 2010年第2期24卷 31-33页

作者：彭苗苗方芸胡巍南京中医药大学中西结合临床医学院江苏南京210029 南京大学医学院附属鼓楼医院江苏南京210008

目的对荔枝草中高车前苷提取分离,并对其进行纯度测定及结构鉴定。方法利用硅胶柱色谱方法分离纯化样品并用高效液相色谱测定样品纯度,用理化性质及光谱学方法对其进行结构鉴定。结果荔枝草体积分数70%乙醇提取物用乙酸乙酯萃取并经硅... 详细信息

目的对荔枝草中高车前苷提取分离,并对其进行纯度测定及结构鉴定。方法利用硅胶柱色谱方法分离纯化样品并用高效液相色谱测定样品纯度,用理化性质及光谱学方法对其进行结构鉴定。结果荔枝草体积分数70%乙醇提取物用乙酸乙酯萃取并经硅胶柱色谱分离纯化,得到跟高车前苷Rf值相同的化合物,其纯度达98.2%,经红外光谱、核磁共振波谱、氢谱、质谱鉴定为5,4′-二羟基-6-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,即高车前苷(homoplantaginin)。结论本文建立了分离纯化高车前苷的方法,并建立了完整的高车前苷理化鉴别方法及光谱色谱特征图谱。

关键词：高车前苷分离光谱色谱