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建立快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株RT-PCR方法的研究

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黑龙江畜牧兽医 2018年第5期 1-4,10页

作者：曾繁文刘向楠饶丹丛锋郭鹏举陈梅丽罗满林华南农业大学兽医学院广州510642 广东省实验动物监测所广州510663 广东省实验动物重点实验室广州510663

为了快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,试验通过建立的RT-PCR方法获得电泳条带大小不同的PCR产物,以此区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,并用RT-PCR方法检测... 详细信息

为了快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,试验通过建立的RT-PCR方法获得电泳条带大小不同的PCR产物,以此区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,并用RT-PCR方法检测实验室保存的12份临床阳性样品。结果表明：可以通过RT-PCR方法区分经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株,并且与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型等猪常见病毒无交叉反应;临床样品检测试验显示,1份为经典毒株、5份为高致病性毒株、5份为天津疫苗株,与测序结果相符。说明试验成功建立了同时区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株的RT-PCR方法,且特异性强、灵敏度较高、重复性好、操作简单。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株高致病性毒株天津疫苗株鉴别诊断

一例猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与链球菌混合感染的实验室诊断

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中国兽药杂志 2023年第4期57卷 11-17页

作者：韩相敏马晶晶吴汉宇奉中花贾济宇孔维苏盘金华高俊锋赖志上海创宏生物科技有限公司上海201619 龙阔(苏州)生物工程有限公司江苏太仓215421

某规模化自繁自养猪场产房母猪出现流产,保育猪关节肿胀、倒地不起、大量死亡,为研究发病原因,采集流产胎儿、死亡仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结和关节液,进行分子生物学检测,病毒和细菌分离鉴定,并检测不同胎龄母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒... 详细信息

某规模化自繁自养猪场产房母猪出现流产,保育猪关节肿胀、倒地不起、大量死亡,为研究发病原因,采集流产胎儿、死亡仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结和关节液,进行分子生物学检测,病毒和细菌分离鉴定,并检测不同胎龄母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体,结果显示猪繁殖与呼吸综合征病毒检测为阳性,使用PAM分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经序列鉴定为高致病性毒株;抗体结果表明四胎及以上母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率异常升高;病料分离的细菌经鉴定为猪链球菌,经实验室诊断确定猪场发病的原因为猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与猪链球菌混合感染。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株猪链球菌诊断

猪繁殖与呼吸综合征经典型与高致病性毒株RT-PCR检测方法的建立

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猪繁殖与呼吸综合征经典型与高致病性毒株RT-PCR检测方法的建立

快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株RT-PCR检测方法的建立和应用

中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：赵泽坤王娇王金凤张岭岭孙继国河北农业大学动物科技学院

＜正＞引言PRRSV可引起怀孕母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状。PRRSV自1987年在美国被发现以来,已迅速传播到世界各个养猪业发达的国家和地区。PRRSV各分离株变异较大,2006年常出现的高致病性毒株NSP2基因有30个氨基酸的缺失。本实验根据... 详细信息

＜正＞引言PRRSV可引起怀孕母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状。PRRSV自1987年在美国被发现以来,已迅速传播到世界各个养猪业发达的国家和地区。PRRSV各分离株变异较大,2006年常出现的高致病性毒株NSP2基因有30个氨基酸的缺失。本实验根据已发表的PRRSV序列,针对经典毒型株与高致病性毒株设计一对包含缺失区在内的特异性引

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株 RT-PCR检测

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快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株、天津疫...

鉴别PRRSV经典、高致病性和类NADC30毒株PCR方法的建立及初步应用

第十三届中国实验动物科学年会

作者：曾繁文刘向楠饶丹丛锋郭鹏举罗满林陈梅丽广东省实验动物监测所华南农业大学兽医学院广东省实验动物重点实验室

前言1猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),俗称蓝耳病,该病的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要引起免疫抑制、母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道疾病。2006年,我国暴发了以高发病率和高死亡率为特征的高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS),给养猪... 详细信息

前言1猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),俗称蓝耳病,该病的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要引起免疫抑制、母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道疾病。2006年,我国暴发了以高发病率和高死亡率为特征的高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS),给养猪业造成了巨大的打击。所以应建立一种快速区分PRRSV经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株且灵敏性高的检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株高致病性毒株疫苗株聚合酶链式扩增检测

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中国兽医学报 2021年第3期41卷 445-450页

作者：商佳亮腾召剑陈立功倪福太宋勤叶周双海河北农业大学动物医学院河北保定071000 吉林师范大学生命科学学院吉林四平136000 北京农学院动物科学技术学院北京102206

为了建立鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory virus,PRRSV)经典毒株、高致病性毒株与类NADC30毒株的快速检测方法,根据不同毒株的ORF1a核苷酸序列,设计并合成PRRSV特异性引物。经过引物筛选以及对退火温... 详细信息

为了建立鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory virus,PRRSV)经典毒株、高致病性毒株与类NADC30毒株的快速检测方法,根据不同毒株的ORF1a核苷酸序列,设计并合成PRRSV特异性引物。经过引物筛选以及对退火温度、引物浓度的优化,建立了应用1对引物鉴别检测经典、高致病性及类NADC30 PRRSV毒株的PCR方法。该方法的反应体系为20μL,退火温度为58°C,引物含量为10 pmol,对经典毒株、高致病毒株和类NADC30毒株cDNA的最低检出量分别为12.16、138.70和59.30 pg;对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型等的检测均为阴性。进而用建立的PCR方法检测2017-2019年采集的38份PRRSV阳性组织病料,结果PRRSV总检出率为100%,其中类NADC30毒株、高致病性毒株与经典毒株的检出率分别为89.5%(34/38)、26.3%(10/38)和7.9%(3/38),并检测到2种或3种不同PRRSV毒株混合感染样本。该检测结果表明,建立的PCR方法可以用于PRRSV感染临床病例的检测,提示当前河北省部分地区猪场类NADC30毒株已成为优势流行毒株,不同PRRSV毒株的混合感染状态复杂多样。

关键词： PRRSV PRRSV经典毒株高致病性毒株类NADC30毒株 PCR ORFla

高致病性猪蓝耳病自然病例与美洲株(VR-2332)人工感染猪的比较病理学

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中国兽医学报 2009年第4期29卷 451-455页

作者：高晓磊刘思当娄忠子王天户山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株与我国当今流行的高致病性毒株在致病性上的差异,对高致病性PRRSV自然感染病例和美洲株VR-2332人工感染猪进行比较病理学研究,探讨PRRSV高致病性毒株的致病特点及发病机制。结果显示,高致病性... 详细信息

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株与我国当今流行的高致病性毒株在致病性上的差异,对高致病性PRRSV自然感染病例和美洲株VR-2332人工感染猪进行比较病理学研究,探讨PRRSV高致病性毒株的致病特点及发病机制。结果显示,高致病性PRRSV会引起发病猪耳和四肢末端迅速发绀、皮肤点状出血、急性肺实变、全身出血性坏死性淋巴结炎、急性炎性脾肿、部分病例脾边缘出血性梗死灶、肾点状出血和胃肠黏膜出血等剖检病变,死亡病猪具有急性出血性败血症的剖检病变特征。全身性淋巴组织急性坏死、重度病毒性脑炎、实质器官变性坏死及肺继发感染为高致病性PRRSV自然感染病例的组织病变特征,这是导致病猪急性死亡和多继发感染的的主要原因。两病毒感染猪的肺和扁桃体免疫组化染色阳性细胞以及肺和脾电镜下病毒颗粒的分布、形态基本相同。

关键词：猪蓝耳病美洲株高致病性毒株比较病理学

一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株方法的建立与应用

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一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株...

作者：张媛媛扬州大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是 1987年首次在美国被确认,主要特征是仔猪发生呼吸道症状,母猪发生繁殖障碍,包括流产、产死胎和木乃伊胎。PRRS给养猪业造成了巨大的经济损失,被认为是世界... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是 1987年首次在美国被确认,主要特征是仔猪发生呼吸道症状,母猪发生繁殖障碍,包括流产、产死胎和木乃伊胎。PRRS给养猪业造成了巨大的经济损失,被认为是世界上最重要的猪传染性疾病之一。该病病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。根据抗原性差异,目前有两种公认的PRRSV基因型:以Lelystad virus(LV株)为代表的欧洲型和以ATCC VR-2332(VR株)毒株为代表的美洲型。我国于1996年由郭宝清等首次在爆发流产的胎儿中分离到PRRSV,2006年我国南方猪群爆发高致病性毒株(HP-PRRSV)。目前,我国防控PRRSV的主要措施仍是接种改良弱毒疫苗(MLV),疫苗的种类主要有JXA1-R、TJM-F92、Ingelvac。临床上,由于PRRSV高致病性株、经典株及疫苗株普遍存在,给病原学检测和诊断带来很大的困难。目前PRRSV检测方法主要有病原学、血清学和分子生物学诊断技术。其中病原学方法耗时费力;血清学方法特异性较低,容易出现交叉反应:分子生物学诊断技术敏感性和特异性较强,但不能同时检测和区分多种PRRSV毒株。因此,本研究主要是建立一种快速灵敏、可同时检测并区分我国5种常见PRRSV毒株的方法,并且成功地应用于我国养殖场、屠宰场PRRSV的检测。一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性毒株、经典株和疫苗株方法的建立本研究主要是基于Nsp2基因,设计特异性引物和探针,建立一种一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株的方法(PCR产物197 bp)。应用本研究建立的方法对PRRSV病毒株制备的标准品进行检测,表明其灵敏度达到单拷贝/反应体系。此外,本试验选择高致病性株(HP-BB)和疫苗株(JXA1-R),稀释成不同浓度与SPF猪的血液样品混合,进行Spiking试验验证该方法灵敏度,结果表明,本研究所建立的一步反转录FRET-qPCR方法具有高灵敏度。通过对5种PRRSV毒株的熔解曲线进行分析发现PRRSV毒之间Tm值存在差异,具体可以分为5组,说明该方法具有高特异性。综上所述,本研究建立的方法具有高灵敏度、高特异性可同时检测和区分出我国5种常见PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株。一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性毒株、经典株和疫苗株方法的应用应用本研究所建立的一步反转录FRET-qPCR方法进行PRRSV的检测和鉴定,研究表明,来自中国10个省的健康猪群的血液样品、肺、眼结膜、鼻腔及粪便拭子中PRRSV的总阳性率为3.3%(28/846),在5个省份7个地区的临床样品中检测到阳性PRRSV,其中肺的阳性最高。疫苗株和高致病性株阳性率高,且同时存在疫苗株与野毒株混合感染。综上所述,本研究建立了基于Nsp2基因,建立了快速、灵敏、特异的一步反转录FRET-qPCR方法,每个PCR系统可以检测到单拷贝的Nsp2基因,可以在单一的PCR系统中检测该5种PRRSV毒株,通过溶解曲线中Tm值的差异区分5种PRRSV,分为5组。应用该方法对我国10个省份地区的养殖场健康猪群的临床样品进行检测的结果表明,疫苗株和高致病性株阳性率高,且同时存在疫苗株与野毒株混合感染,为临床PRRS的监测和防控提供重要参考和技术支撑。

关键词：一步反转录FRET-qPCR PRRSV Tm值高致病性毒株疫苗株

PRRSV不同毒株RT-PCR检测方法的建立与应用

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福建畜牧兽医 2020年第5期42卷 1-3页

作者：饶云萍兆丰华生物科技(福州)有限公司福州350014

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株与流行株NADC30-like Nsp2的特点设计特异性引物,建立能够快速区分这三类毒株的RT-PCR检测方法。该方法能够对猪繁殖与呼吸综合征病毒的经典毒株、高致病性毒株与NADC30-lik... 详细信息

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株与流行株NADC30-like Nsp2的特点设计特异性引物,建立能够快速区分这三类毒株的RT-PCR检测方法。该方法能够对猪繁殖与呼吸综合征病毒的经典毒株、高致病性毒株与NADC30-like流行株扩增出特异性片段,其大小分别为1000 bp、900 bp和700 bp。具有快速、特异、通用等特点,可用于实验室快速诊断,为该病的诊断及免疫防控提供参考依据。用本试验所建立的方法对福建省疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的58份样品进行检测,结果显示34份为猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性,其中高致病性毒株占41.18%,NADC30-like占14.71%,多毒株共感染占35.29%,提示高致病性毒株仍占主导,但多毒株共感染成为流行趋势。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征经典毒株高致病性毒株 NADC30-like

猪繁殖与呼吸综合征病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2013年第4期34卷 74-77页

作者：张靖飞张园李志辉王慧煜曹达江梅琳西安市动物疫病预防控制中心陕西西安710061 山西农业大学动物科技学院山西太谷030800 中国检验检疫科学研究院北京100029 天杰仁和生物科技(北京)有限公司北京100029

为了建立一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒并且能够区分普通毒株和高致病性毒株的荧光PCR方法,根据GenBank已经公布的国内发表的高致病性PRRSV NSP2基因序列,针对Nsp2缺失区设计一对引物和探针,在结合PRRSV通用检测引物探针进行荧光... 详细信息

为了建立一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒并且能够区分普通毒株和高致病性毒株的荧光PCR方法,根据GenBank已经公布的国内发表的高致病性PRRSV NSP2基因序列,针对Nsp2缺失区设计一对引物和探针,在结合PRRSV通用检测引物探针进行荧光定量PCR,对反应条件进行优化,用已知PRRSV普通株和高致病性株及其他病毒进行试验。结果表明,该方法可以特异检测并区分高致病性株和普通株。将该方法用于临床标本的检测,通过对32份样本检测,通用阳性为28份,阳性率为87.5%。高致病性株为17份,阳性率为59.38%。表明建立的方法可以用于PRRSV的快速检测,并且可以区分普通株和高致病性株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株双重荧光RT—PCR