检索结果-南通市图书馆

作者：王曌北京协和医学院

学位级别：硕士

研究背景与目的：比较碰撞诱导解离(collision induced dissociation, CID)和高能碰撞解离(high energy collision dissociation, HCD)两种离子裂解方式在蛋白质组学分析方面的差异。研究方法：以牛血清白蛋白和细胞裂解物为研究对象,... 详细信息

研究背景与目的：比较碰撞诱导解离(collision induced dissociation, CID)和高能碰撞解离(high energy collision dissociation, HCD)两种离子裂解方式在蛋白质组学分析方面的差异。研究方法：以牛血清白蛋白和细胞裂解物为研究对象,分别应用碰撞诱导解离(CID)和高能碰撞解离(HCD)两种离子裂解方式对样品进行分析,比较所鉴定到的多肽和蛋白数目,确定两种离子裂解方式在蛋白质组学分析方面的差异。研究结果：在简单样品牛血清白蛋白中,HCD碎裂方式所得的谱图匹配率和多肽Mascot得分较高,表明其质谱图质量较高。在复杂样品细胞裂解物中,CID碎裂方式鉴定到的谱图数、多肽数和蛋白数目较多,表明该方式灵敏度较高;HCD碎裂方式所得质谱图匹配率较高、Mascot得分较高,表明其质谱图质量较好。研究结论：这两种方式均可用于大规模蛋白质组学分析,CID方式可以提供更高的灵敏度,HCD方式可以获得更高质量的质谱谱图。研究目的：研究新疆维吾尔族与汉族IgA肾病患者的尿液差异表达蛋白。研究方法：提取维吾尔族IgA肾病组、维吾尔族健康对照组、汉族IgA肾病组以及汉族健康对照组尿液蛋白质,iTRAQ定量标记后进行2DLC-MS/MS分析。利用scaffold软件对MS/MS肽段进行分析,在Swissprot数据库中搜寻蛋白并定量。差异表达蛋白界值fold change≥2且P<0.05认为二者之间存在显著差异表达。研究结果：总共鉴定出842种蛋白。维吾尔族IgA肾病与维吾尔族健康对照比较,224个蛋白质有显著差异表达(168个蛋白上调,56个蛋白下调);汉族IgA肾病与汉族健康对照比较,96个蛋白质有显著差异表达(74个蛋白上调,22个蛋白下调)。在这些差异表达的蛋白中,维吾尔族与汉族共同鉴定到的蛋白共有45个。维吾尔族和汉族IgA肾病组均有免疫系统的激活,并且存在脂肪酸代谢异常,细胞外基质相关蛋白显著增多,而结合蛋白和细胞内相关蛋白显著减少。维吾尔族IgA肾病差异蛋白集中于细胞存活和细胞活力,凝血系统、补体系统的激活;而汉族IgA肾病差异蛋白多为细胞迁移和细胞运动功能、催化活性和多细胞有机体过程相关蛋白。并用Western Blot方法对ADIPOQ、SERPINC1、ICAM-1、TGFBR1和TIMP-1五个蛋白进行了验证。研究结论：尿液中差异蛋白的表达情况可以反映IgA肾病状态下的病理生理变化,为明确IgA肾病的病理机制奠定了基础,同时也为其无创诊断提供参考依据,具有重要临床意义。

关键词：质谱碰撞诱导解离高能碰撞解离蛋白质组学分析 IgA肾病差异蛋白 iTRAQ定量维吾尔族汉族

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基于Orbitrap-CID/HCD的合成多肽精氨酸侧链低能键的差异化质谱表征研究

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中国药学杂志 2022年第18期57卷 1557-1564页

作者：白海娇韩晓捷李增礼王倩倩鲁鑫天津市药品检验研究院天津300070 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司合肥230088 南开大学药物化学生物学国家重点实验室天津300350

目的解析合成醋酸西曲瑞克的两种难解析杂质氨基酸序列及修饰,探讨氨甲酰基中性丢失效应在质谱氨基酸序列分析中的影响。方法在合成工艺分析的基础上,利用静电场轨道阱质谱碰撞诱导解离,结合高能碰撞解离多级碎裂,解析无法合成纯品并... 详细信息

目的解析合成醋酸西曲瑞克的两种难解析杂质氨基酸序列及修饰,探讨氨甲酰基中性丢失效应在质谱氨基酸序列分析中的影响。方法在合成工艺分析的基础上,利用静电场轨道阱质谱碰撞诱导解离,结合高能碰撞解离多级碎裂,解析无法合成纯品并且单一高能碰撞解离无法解析的两种杂质。结果精氨酸侧链无修饰的杂质形成氢键,避免了氨甲酰基中性丢失。氨甲酰基中性丢失效应和空间位阻效应导致杂质3理论碎片与实测碎片不匹配。在杂质2的结构中,磺酸基与瓜氨酸羰基氧形成的氢键避免氨甲酰基中性丢失,但由于磺酸基位阻较小,发生N-S键断裂。结论氨甲酰基中性丢失效应可能导致单一高能碰撞解离碎片与理论碎片不匹配,空间位阻效应、形成氢键也可能影响氨甲酰基中性丢失,因此当数据解析引擎显示不匹配时,还应深入分析推测氨基酸侧链的低能键,才能实现充分的杂质质控。

关键词：氨甲酰基中性丢失效应静电场轨道阱质谱碰撞诱导解离高能碰撞解离多级碎裂

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酰胺-亚胺醇互变诱导的分子内1,3-羟基迁移裂解反应研究

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理化检验（化学分册） 2017年第7期53卷 838-842页

作者：许杨洁曹小吉浙江工业大学化学工程学院杭州310014 浙江工业大学分析测试中心杭州310014

采用高分辨的电喷雾电离-高能碰撞解离质谱技术,结合同位素标记试验和密度泛函理论计算,对N-吡啶基苯甲酰胺类化合物的质子化离子裂解生成取代2-羟基吡啶阳离子的反应机理进行了研究。结果表明:在高能碰撞解离下,该类化合物的质子化离... 详细信息

采用高分辨的电喷雾电离-高能碰撞解离质谱技术,结合同位素标记试验和密度泛函理论计算,对N-吡啶基苯甲酰胺类化合物的质子化离子裂解生成取代2-羟基吡啶阳离子的反应机理进行了研究。结果表明:在高能碰撞解离下,该类化合物的质子化离子首先酰胺基异构化为亚胺醇基,接着亚胺醇羟基经过分子内的1,3-OH^-迁移重排到吡啶环的C^2位上,最后正电荷诱导C^2-N^3键异裂,中性丢失一分子取代苯腈产生取代2-羟基吡啶阳离子。

关键词：高能碰撞解离酰胺-亚胺醇互变羟基迁移 N-吡啶基苯甲酰胺

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吡啶酰胺类化合物质谱裂解机理研究

吡啶酰胺类化合物质谱裂解机理研究

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作者：许杨洁浙江工业大学

学位级别：硕士

酰胺键不仅是构成多肽和蛋白质的基本骨架结构,也是许多药物分子的重要官能团。因此,众多质谱工作者对酰胺的气相化学非常感兴趣。本工作采用高分辨的电喷雾电离-高能碰撞解离技术(ESI-HCD-MS/MS)结合同位素标记实验和量子化学密度泛函... 详细信息

酰胺键不仅是构成多肽和蛋白质的基本骨架结构,也是许多药物分子的重要官能团。因此,众多质谱工作者对酰胺的气相化学非常感兴趣。本工作采用高分辨的电喷雾电离-高能碰撞解离技术(ESI-HCD-MS/MS)结合同位素标记实验和量子化学密度泛函理论计算对N-吡啶基苯甲酰胺化合物和苯并吡啶酰胺衍生物这两类化合物的气相质谱裂解机理进行了系统研究。主要内容包括两个部分:1.质子化的N-吡啶基苯甲酰胺化合物质谱裂解机理研究质子化的N-吡啶基苯甲酰胺化合物碰撞诱导解离主要生成了取代2-羟基吡啶阳离子a、取代苯甲酰阳离子b以及中性丢失一分子水产生的碎片离子c。理论计算表明,外加质子首先加合在吡啶环的氮原子上,诱导酰胺键发生酰胺-亚胺醇异构化转变为亚胺醇式,接着发生分子内的1,3-OH-重排,正电荷诱导异裂产生取代2-羟基吡啶阳离子,吡啶环上有吸电子取代基或苯环上有推电子取代基不利于该裂解反应的发生,此外,通过对N-(吡啶-3-基)苯甲酰胺化合物的二级质谱图的考察,发现酰胺-亚胺醇互变诱导的羟基迁移机理同样适用于N-(吡啶-3-基)苯甲酰胺。2.质子化的苯并吡啶酰胺衍生物的质谱裂解机理研究主要研究了2-([1,1’-联苯基]-2-基)-N-(喹啉-8-基)乙酰胺衍生物和2-(苯硫基)-N-(喹啉-8-基)苯甲酰胺衍生物两类化合物的气相质谱裂解机理。研究发现,在第一类化合物的质子化离子的HCD质谱图中,观察到4个碎片离子。质子化离子中性丢失水生成的碎片离子a,酰胺键断裂生成的碎片离子b,碎片离子b进一步中性丢失CO生成的碎片离子c以及喹啉-8-胺离子(碎片离子e)。第二类化合物的质子化离子的HCD质谱图中,观察到2个主要碎片离子,质子化离子酰胺键断裂生成的碎片离子b和质子化离子中性丢失水生成的碎片离子c。理论计算表明,外加质子首先加合在吡啶环的氮原子上,当质子从该位点迁移到“解离的质子化位点”酰胺N2原子上时,电荷诱导化学键异裂。取代基效应表明,供电子基团倾向于生成碎片离子b,吸电子基团时倾向于生成碎片离子c。氘代实验也进一步验证了该类化合物的质子迁移反应。

关键词：高能碰撞解离酰胺-亚胺醇互变羟基迁移理论计算离子/中性复合物

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二乙烯基嘧啶重新桥连蛋白质的二硫键和增强二硫键的紫外光解离

二乙烯基嘧啶重新桥连蛋白质的二硫键和增强二硫键的紫外光解离

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作者：孟宪卓中国医科大学

学位级别：硕士

目的:二硫键是蛋白质的两个半胱氨酸的硫原子之间形成的翻译后修饰,维持蛋白质结构和功能。二硫键也是抗体类药物质量控制的关键,对生物类药品开发具有重要意义。二硫键环化了半胱氨酸之间的蛋白质序列,含二硫键的序列区域的诊断碎片离... 详细信息

目的:二硫键是蛋白质的两个半胱氨酸的硫原子之间形成的翻译后修饰,维持蛋白质结构和功能。二硫键也是抗体类药物质量控制的关键,对生物类药品开发具有重要意义。二硫键环化了半胱氨酸之间的蛋白质序列,含二硫键的序列区域的诊断碎片离子释放受到阻碍,很难通过质谱技术直接破译蛋白质序列和结构信息。此外,二硫键的低裂解效率导致酶解肽的碎片离子通过二硫键与另一个完整的肽链相连,这种复杂的碎片很少提供二硫键的定位信息,用常规数据库和程序不能很容易地进行分析。所以增强二硫键解离有助于二硫键和蛋白质结构的表征。由于发色团可以增强紫外光解离(UVPD),本研究引入二乙烯基嘧啶(DVP)作为发色团,使二硫键重新桥连,增强二硫键的紫外光解离。方法:1.将奥曲肽和多个蛋白中二硫键通过DVP重新桥连,利用质谱技术考察了DVP连接剂在奥曲肽、溶菌酶、核糖核酸酶A、β-乳球蛋白和胰岛素中的化学反应性。2.利用质谱技术考察了试剂用量与反应时间对DVP修饰产物转化率的影响。3.利用自上而下质谱分析技术,对无修饰和DVP修饰的溶菌酶和核糖核酸酶A进行高能碰撞解离(HCD)和193 nm UVPD MS/MS分析,系统地研究了重桥连二硫键的裂解途径,计算二硫键裂解效率和蛋白序列覆盖率。4.利用自下而上质谱分析技术,对无修饰和DVP修饰的溶菌酶和核糖核酸酶A的酶解肽进行LC-MS/MS分析,匹配每个肽产生的碎片离子,计算每个肽的二硫键裂解效率。结果:***可以使奥曲肽和蛋白质的二硫键重新桥连。在非变性条件下,溶剂可及性高和与DVP反应时空间位阻小的二硫键容易被DVP修饰;在变性条件下,蛋白质中几乎所有的链内二硫键都可以被修饰。2.奥曲肽和蛋白与DVP反应2 h后,产物转化率趋于稳定。3.试剂用量增加没有显著提高转化率。4.重桥连二硫键通过C-S键裂解产生均裂和氢转移产物离子。5.相比于HCD,UVPD明显提高了完整蛋白的二硫键裂解效率和序列覆盖率。6.通过HCD或UVPD MS/MS分析,二硫键的重桥连提高了完整蛋白的二硫键裂解效率。7.通过HCD或UVPD MS/MS分析,酶解肽的二硫键重桥连可以提高二硫键裂解效率。结论:***可以高效重新桥连蛋白质的二硫键,并具有高度的结构选择性。2.相比于HCD,193 nm UVPD增强了完整蛋白的二硫键解离。3.重桥连增强了完整蛋白和酶解肽二硫键的紫外光解离。4.重桥连提高了HCD裂解完整蛋白和酶解肽二硫键的能力。

关键词：二硫键二乙烯基嘧啶紫外光解离高能碰撞解离质谱重桥连

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