检索结果-南通市图书馆

新型重组人IFN-λ2的高效表达、纯化与抗病毒活性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 232-235页

作者：王刚李武平张成海衣作安郑丽舒张辉段招军侯云德中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

目的在大肠埃希菌中高效表达重组人干扰素λ2(rhIFNλ2),并对其抗病毒活性进行初步研究。方法根据大肠埃希菌的偏爱密码子人工设计合成人干扰素λ2(hIFNλ2)的高表达基因,将其克隆到原核表达载体pBV220,在大肠埃希菌中进行表达,表达产... 详细信息

目的在大肠埃希菌中高效表达重组人干扰素λ2(rhIFNλ2),并对其抗病毒活性进行初步研究。方法根据大肠埃希菌的偏爱密码子人工设计合成人干扰素λ2(hIFNλ2)的高表达基因,将其克隆到原核表达载体pBV220,在大肠埃希菌中进行表达,表达产物经变性、复性、阳离子交换层析及分子筛层析纯化,测定其抗病毒活性、种属特异性及抗HBV活性。结果在大肠埃希菌表达的目的蛋白占细胞总蛋白量的15%左右,纯化后的纯度达到90%以上,在WISH细胞上抗VSV活性约为1.5×106IU/mg。与rhIFNα2b比较,表达产物在非灵长类细胞上的抗病毒活性较在灵长类细胞上弱,目的蛋白在HepG2.2.15细胞上表现有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性。结论hIFNλ2可以在大肠埃希菌内实现高效表达,表达产物具有抗病毒活性,有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性,本型IFN有较严格的种属特异性。

关键词：干扰素类抗病毒药抗病毒活性高效表达层析纯化活性研究 HepG2.2.15细胞 IFN 重组人抗HBV活性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

芍药Actin基因在大肠杆菌中的高效表达

中草药 2015年第11期46卷 1661-1665页

作者：徐杰高水平张文婷史国安范丙友河南科技大学农学院河南洛阳471003 河南科技大学林学院河南洛阳471003

目的构建芍药Paeonia lactiflora Actin（Pl Actin）基因原核表达载体,优化Pl Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。方法基于Pl Actin基因c DNA序列及原核表达载体p ET-32a（＋）多克隆位点序列,设计一对5’末端分别插入Bam H I和Hind... 详细信息

目的构建芍药Paeonia lactiflora Actin（Pl Actin）基因原核表达载体,优化Pl Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。方法基于Pl Actin基因c DNA序列及原核表达载体p ET-32a（＋）多克隆位点序列,设计一对5’末端分别插入Bam H I和Hind III酶切位点的特异性PCR引物,基于RT-PCR技术亚克隆Pl Actin基因;用Bam H I和Hind III双酶切重组质粒p MD18-T-Pl Actin和原核表达载体p ET-32a（＋）,胶回收纯化目的基因和空载体,连接、转化后应用菌落PCR、质粒PCR和双酶切鉴定出重组子p ET-32a（＋）-Pl Actin,转化BL21（DE3）菌株获得基因表达工程菌;分别设置诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓度梯度、诱导的菌体起始密度梯度及表达时间梯度,诱导Pl Actin基因在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝R250染色后制备干胶并比较重组Actin蛋白的表达量。结果亚克隆测序结果表明Pl Actin与目的序列完全一致,且其编码区序列（CDS）上下游成功插入了Bam H I和Hind III酶切位点;成功构建了芍药原核表达载体p ET-32a（＋）-Pl Actin;诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L,诱导的菌体起始密度（A600）为0.4~0.6,最佳表达时间为4 h。结论构建了Pl Actin基因原核表达载体p ET-32a（＋）-Pl Actin,建立了Pl Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。

关键词：芍药 Actin 大肠杆菌 SDS-PAGE电泳高效表达

重组LTB蛋白在水弧菌VSP60中的高效表达与纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第6期23卷 432-435页

作者：王静李琳琳孔令洪于军郑瑾韩俊宏来宝长司履生王一理西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所 710061

目的　优化重组大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (rLTB)工程菌 (VSP6 0 )高效表达的条件。方法　以UVP凝胶照相系统扫描以及改良Lowry′s法检测rLTB表达量并分析各种因素对其影响。利用SephacrylS 10 0凝胶层析纯化rLTB蛋白。结果　工程... 详细信息

目的　优化重组大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (rLTB)工程菌 (VSP6 0 )高效表达的条件。方法　以UVP凝胶照相系统扫描以及改良Lowry′s法检测rLTB表达量并分析各种因素对其影响。利用SephacrylS 10 0凝胶层析纯化rLTB蛋白。结果　工程菌 30℃振荡培养至吸光度 (A6 0 0 )值达0 .2～ 0 .3时加IPTG(终浓度为 0 .5mmol L) ,诱导培养 18～ 2 2h为rLTB蛋白表达的最佳条件。SephacrylS 10 0凝胶柱一步层析后 ,rLTB蛋白纯度可达 98.1%。结论　本研究所用的培养和纯化工艺简单易行 ,可获得高产量、高纯度的rLTB蛋白。

关键词：重组大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位高效表达纯化水弧菌

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

一个水稻高效表达启动子Os252的分离

生物工程学报 2007年第5期23卷 836-840页

作者：钟晓丽张丞崔永兰沈英嘉张永明杨仲南上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 上海师范大学旅游学院环境工程系上海200234

植物基因的表达受启动子的控制,高效表达启动子的分离及功能分析不仅是植物基因工程研究的重要研究方面,也是表达调控研究的重要内容。根据EST数据克隆了一个预测在水稻茎中高效表达的启动子Os252。将该启动子与GUS基因构建成表达载体... 详细信息

植物基因的表达受启动子的控制,高效表达启动子的分离及功能分析不仅是植物基因工程研究的重要研究方面,也是表达调控研究的重要内容。根据EST数据克隆了一个预测在水稻茎中高效表达的启动子Os252。将该启动子与GUS基因构建成表达载体并转入水稻。转基因水稻PCR分析表明,GUS基因已经成功地整合进水稻基因组中。GUS组织化学分析表明,Os252能启动GUS基因在水稻叶、茎以及胚乳中表达。进一步GUS酶活性的测定表明,叶和胚乳中Os252启动子活性分别是35S启动子的1.9和2.5倍。由于Os252来自于水稻,在叶和胚乳中活性高于35S启动子,因此该启动子可望用于水稻基因工程研究。

关键词：水稻高效表达启动子分离

A型肉毒毒素保护性抗原的基因修饰及高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2004年第4期20卷 544-547页

作者：王慧荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上 ,为提高表达水平 ,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列 ,重新设计上游引物 ,通过修饰基因片段N端 ,保持氨基酸序列不变 ,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因... 详细信息

在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上 ,为提高表达水平 ,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列 ,重新设计上游引物 ,通过修饰基因片段N端 ,保持氨基酸序列不变 ,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因中 ,扩增小的突变基因 ,克隆入pGEM T载体进行测序 ,并以pBV2 2 0为表达载体构建重组表达质粒 ,在大肠杆菌中实现高效表达。结果表明 ,重组表达产物占全菌蛋白的 4 0 % ,酶联检测重组表达产物具有特异结合活性。A型肉毒毒素保护性抗原基因的高效表达。

关键词： A型肉毒毒素保护性抗原基因修饰高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

解毒酶基因cDNA克隆和高效表达

生物工程学报 2001年第2期17卷 199-202页

作者：邢建民乔传令黄菁李瑄贾馨丹李典谟中科院化冶所青年室中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理国家重点实验室北京100080

The full\|length cDNA of mosquito esterase B1 had been isolated,and subcloned into *** recombinant vector pBV220B1 was constructed and transformed into *** DH5α.A 60 kD protein was induced by 42℃ and its expression was temperature\|*** 6h induction,the target protein occupied 50% of the total *** expressed product existed in both inclusion body and soluble proteins in the *** amount of the soluble detoxifying enzyme increased along with the induction *** data of detoxifying experiments indicated that the detoxifying enzyme in expression strain of *** can detoxified toxicity of organophosphate insecticides,it showed a clear detoxifying affect on hens poisoned by organophosphate insecticides.

关键词：解毒酶基因分子克隆高效表达解毒昆虫抗药性杀虫剂抗性

口蹄疫病毒P1基因在大肠杆菌中的高效表达及其生物活性的初步分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2005年第1期21卷 163-166页

作者：余晓岚肖少波方六荣胡梦雨严琳董晓辉陈焕春华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

将口蹄疫病毒 (FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pGEX KG中 ,使P1基因与GST融合 ,获得融合表达质粒pKG P1,转化E .coliBL2 1 (DE3) ,经IPTG诱导 ,SDS PADE结果表明GST P1融合蛋白获得高效表达 ,Western blot检测证... 详细信息

将口蹄疫病毒 (FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pGEX KG中 ,使P1基因与GST融合 ,获得融合表达质粒pKG P1,转化E .coliBL2 1 (DE3) ,经IPTG诱导 ,SDS PADE结果表明GST P1融合蛋白获得高效表达 ,Western blot检测证实表达的融合蛋白具有免疫学活性 ,表达产物主要存在于细菌裂解液上清中。进一步采用GST纯化试剂盒纯化P1蛋白并作为诊断抗原 ,建立了P1 ELISA诊断方法 ,与FMD间接血凝 (IHA)检测方法平行检测 86 4份血清样品 ,总的符合率达87%。

关键词：口蹄疫病毒(FMDV) P1基因高效表达生物活性分析

耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

应用与环境生物学报 2008年第4期14卷 534-538页

作者：董晨曹娟张迹沈标南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

高温α-淀粉酶是发酵行业用量最大的酶类,为了实现高温α-淀粉酶基因的高效表达,本研究比较了不同启动子对地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中表达的影响.分别用强启动子P43和地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启... 详细信息

高温α-淀粉酶是发酵行业用量最大的酶类,为了实现高温α-淀粉酶基因的高效表达,本研究比较了不同启动子对地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中表达的影响.分别用强启动子P43和地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启动子构建了表达载体pP43NMK-amy和pUBC19-amy,并在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis1A752S中进行表达.结果表明,与地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启动子相比,采用P43启动子的耐高温α-淀粉酶其表达水平提高了8.9倍.而且在枯草芽孢杆菌***1A752S中分泌表达的α-淀粉酶仍具有耐高温的特性,酶反应的最适温度为90℃,表明酶的热稳定性由蛋白质本身的氨基酸序列决定的.

关键词：耐高温α-淀粉酶基因启动子P43 amy启动子高效表达

高效表达PrP/GFP蛋白神经细胞系的建立以及建立RNA干扰PrP蛋白表达技术的初步探索

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

高效表达PrP/GFP蛋白神经细胞系的建立以及建立RNA干扰PrP蛋白表...

作者：陶利明扬州大学

学位级别：硕士

宿主对朊毒体(prion)的敏感性与细胞型朊蛋白(PrPc)的表达量密切相关,表达量越高,对朊毒体越敏感。拥有高效表达PrPc的细胞系对朊毒体生物学研究具有十分重要的意义。为获得这种对朊毒体敏感的细胞模型,本研究以Neuro-2a细胞为基础,利用... 详细信息

宿主对朊毒体(prion)的敏感性与细胞型朊蛋白(PrPc)的表达量密切相关,表达量越高,对朊毒体越敏感。拥有高效表达PrPc的细胞系对朊毒体生物学研究具有十分重要的意义。为获得这种对朊毒体敏感的细胞模型,本研究以Neuro-2a细胞为基础,利用pCDNA3.1(-)真核表达载体,携带PrP/GFP融合基因,转染至Neuro-2a细胞。经荧光和抗性的双重连续筛选,获得了稳定、高效表达PrPc的细胞系。根据已公布的小鼠PrP基因以及pEGFP载体的GFP基因序列设计引物,分别以小鼠基因组和pEGFP质粒为模板,PCR扩增PrP和GFP基因。将这两个基因分别克隆到pGEM-T载体中,获得pGEM-mPrP和pGEM-GFP两个重组质粒,进行测序分析。分别用EcoRI和BamHI、BamHI和HindIII以及EcoRI和HindIII酶切pGEM-mPrP、pGEM-GFP和pCDNA3.1(-)质粒,电泳、切胶回收。将这三个片段共连接,从而获得融合mPrP/GFP基因的真核表达质粒pCDNA3.1(-)-mPG。由于在PrP C-端融合了绿色荧光蛋白(GFP),使该系统具备了早期筛选的标签。用脂质体Lipofectamine 2000将该质粒转染至Neuro-2a神经细胞,用G418抗性筛选、荧光显微镜检测、Western-Blotting检测、PCR检测、连续传代法筛选能够稳定、高效表达PrP/GFP蛋白的细胞株。本实验成功获得了一株高效表达PrP/GFP蛋白的Neuro-2a细胞株(命名为mPGN2a),为朊毒体的研究提供了较理想的细胞模型。RNA干扰(RNAi)技术能够高效、特异的抑制目的蛋白的表达,因此是一种有利的蛋白功能研究技术。为便于PrP功能研究,本实验初步探索了利用载体表

关键词：朊毒体 PrPc GFP 高效表达 RNA干扰