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狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因在大肠埃希氏菌中的高效表达

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中国兽医科学 2006年第6期36卷 449-453页

作者：蔡月琴叶菊秀李玲燕周继勇浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1... 详细信息

为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,经PCR 和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21 (DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45．4％。经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白膜外区高效表达

来源于Selenomonas ruminantium的高比活植酸酶基因在毕赤酵母中的高效表达

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中国农业科学 2004年第5期37卷 762-768页

作者：王亚茹姚斌罗会颖袁铁铮都占魁史秀云伍宁丰范云六中国农业科学院生物技术研究所中国农业科学院生物技术研究所北京100081 中国农业科学院饲料研究所

应用酶解效率更高的高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的有效途径。根据毕赤酵母对于密码子的选择偏向,对来源于原核瘤胃微生物Selenomonasruminantium的高比活植酸酶基因phyS进行了密码子优化,将优化后的植... 详细信息

应用酶解效率更高的高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的有效途径。根据毕赤酵母对于密码子的选择偏向,对来源于原核瘤胃微生物Selenomonasruminantium的高比活植酸酶基因phyS进行了密码子优化,将优化后的植酸酶基因phyS(m)与未优化的phyS插入到毕赤酵母转移载体pPIC9中,转化毕赤酵母得到重组子,在摇瓶水平上,phyS(m)的表达水平比phyS高10倍。在5L发酵罐中,优化后的植酸酶基因phyS(m)其蛋白表达量达到4mgml-1发酵液,效价达到1.6×106IUml-1,高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。

关键词：高比活植酸酶基因改造高效表达毕赤酵母

逆转录病毒表达系统及其在外源蛋白高效表达中的应用

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中国生物工程杂志 2008年第5期28卷 116-121页

作者：许建李世崇陈昭烈军事医学科学院生物工程研究所北京100071

逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,它由逆转录病毒载体,包膜蛋白载体和包装细胞系构成,在基因治疗和生物制药领域有很大的应用潜力。逆转录病毒和宿主细胞基因组的重组倾向于发生在转录活性区;口炎疱疹病毒-G蛋白(vesi... 详细信息

逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,它由逆转录病毒载体,包膜蛋白载体和包装细胞系构成,在基因治疗和生物制药领域有很大的应用潜力。逆转录病毒和宿主细胞基因组的重组倾向于发生在转录活性区;口炎疱疹病毒-G蛋白(vesicular stomatitis virus G,VSV-G)能有效扩大逆转录病毒感染宿主细胞的范围、提高逆转录病毒的感染效率;用高滴度的重组病毒感染细胞,经过简单的筛选即可获得高表达细胞株。就逆转录病毒表达系统的组成、感染的特点和机制及其应用前景作了概述。

关键词：逆转录病毒表达系统口炎疱疹病毒-G蛋白病毒滴度重组蛋白高效表达

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口蹄疫病毒3A基因在大肠杆菌中的高效表达

微生物学报 2002年第5期42卷 539-542页

作者：薛青红刘湘涛张彦明韩雪清谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046 西北农林科技大学杨凌712100

将口蹄疫病毒 (Foot and MouthDiseaseVirus,FMDV)的 3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX HTb中 ,转化大肠杆菌BL2 1和DH5α ,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆 ,IPTG诱导表达。SDS PAGE和Westbolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富... 详细信息

将口蹄疫病毒 (Foot and MouthDiseaseVirus,FMDV)的 3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX HTb中 ,转化大肠杆菌BL2 1和DH5α ,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆 ,IPTG诱导表达。SDS PAGE和Westbolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富含 3A蛋白 ,说明3A蛋白在表达产物中以包涵体的形式存在 ,所表达的蛋白含量占菌体蛋白的 2 9 2 %。

关键词：口蹄疫病毒 3A基因大肠杆菌高效表达

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重组抗体高效表达的研究进展(Ⅱ)

中国生物制品学杂志 2013年第1期26卷 280-288页

作者：胡迪超张爱华杨晓明武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430060 中国生物技术股份有限公司北京100029

（续上期）2抗体基因序列的优化越来越多的研究表明,抗体基因序列中存在的剪接信号、二级结构、GC含量以及密码子偏爱等影响抗体的表达水平。信号肽会影响抗体折叠、

关键词：重组抗体高效表达基因序列二级结构 GC含量信号肽密码子

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hrpZ基因在大肠杆菌中的高效表达与活性检测

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西北植物学报 2005年第12期25卷 2391-2394页

作者：丁玲孟小林徐进平王健鲁伟武汉大学生命科学学院武汉430072

PCR扩增hrpZ基因片段，克隆到pGEM-T载体中，经EmR Ⅰ／Xho Ⅰ酶切、连接将hrpZ基因插入大肠杆菌表达载体pET32b(+)硫氧还蛋白下游，构建重组表达质粒pET-hrpZ，再将其转化至*** BL21(DE3)中，经筛选得到阳性克隆子，IPTG诱导表达HrpZ... 详细信息

PCR扩增hrpZ基因片段，克隆到pGEM-T载体中，经EmR Ⅰ／Xho Ⅰ酶切、连接将hrpZ基因插入大肠杆菌表达载体pET32b(+)硫氧还蛋白下游，构建重组表达质粒pET-hrpZ，再将其转化至*** BL21(DE3)中，经筛选得到阳性克隆子，IPTG诱导表达HrpZ蛋白。SDS-PAGE显示，目的蛋白在重组菌株中得到了可溶性高效表达。该重组蛋白分子量为55．8 kD，与理论值大小相符。采用叶片穿刺法，融合蛋白具有诱导烟草过敏反应的生物功能。

关键词： hrpZ蛋白高效表达可溶性蛋白超敏反应

抗卵巢癌单链免疫毒素183B_2ScFvPE38融合蛋白的高效表达及活性测定

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解剖学报 2002年第1期33卷 84-87页

作者：尤芳蕾冯捷成夜霞付天云姚煜北京大学人民医院妇科肿瘤研究室北京100044

目的　制备抗人卵巢癌单链免疫毒素融合蛋白 183B2 ScFvPE38,并对其活性进行测定 ,为卵巢癌导向治疗打下基础。　方法　在异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,高效表达免疫毒素 183B2 ScFvPE38,并采用直接ELISA及细胞毒性实验... 详细信息

目的　制备抗人卵巢癌单链免疫毒素融合蛋白 183B2 ScFvPE38,并对其活性进行测定 ,为卵巢癌导向治疗打下基础。　方法　在异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,高效表达免疫毒素 183B2 ScFvPE38,并采用直接ELISA及细胞毒性实验对抗体及毒素部分的活性进行检查。　结果　表达蛋白 183B2 ScFvPE38以包涵体形式为主高效表达 ,并有少量可溶性表达。该蛋白具有较好的抗体活性及毒素活性。　结论　抗卵巢癌单链免疫毒素183B2 ScFvPE38具有良好的免疫学活性及生物学活性。

关键词：单链抗体免疫毒素卵巢癌假单胞外毒素高效表达

重组人截短型IL-6在大肠杆菌DH5α中的高效表达与纯化

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西北大学学报（自然科学版） 2003年第4期33卷 481-484页

作者：韩俊宏孔令洪郑瑾齐旭来宝长司履生王一理西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所陕西西安710061

为研究重组人截短型白细胞介素6(rhIL-6)工程菌高效表达的影响因素及纯化方法的优化。观察不同培养温度对重组人截短型IL-6工程菌生长密度和IL-6表达的影响;复性蛋白终浓度对复性效率的影响;细菌诱导培养后,经破菌-洗包-溶包初步纯化后... 详细信息

为研究重组人截短型白细胞介素6(rhIL-6)工程菌高效表达的影响因素及纯化方法的优化。观察不同培养温度对重组人截短型IL-6工程菌生长密度和IL-6表达的影响;复性蛋白终浓度对复性效率的影响;细菌诱导培养后,经破菌-洗包-溶包初步纯化后,再经柱层析纯化IL-6。其结果为30℃培养后42℃诱导培养5h的IL-6表达效率最高,达32.8%;复性蛋白终浓度在0.5g/L以下时,蛋白复性效率最佳,比活性为4.42×108μmol/min·mg-1;进一步柱层析后,IL-6的纯度达96.5%,得率可达46.5%。最后得出培养和纯化工艺简便易行,可获得高纯度、高比活性的截短型rhIL-6的结论。

关键词：重组人白细胞介素-6 大肠杆菌高效表达纯化

抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定

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中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 98-101,120页

作者：刘德辉何俊林云熊黄毓茂华南农业大学兽医学院广东广州510642

为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37... 详细信息

为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。

关键词：抗菌肽LL-37 基因设计高效表达活性鉴定