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高效疏水色谱法对还原变性核糖核酸酶的折叠研究

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西安文理学院学报（自然科学版） 2006年第2期9卷 18-21页

作者：李敏杨晓慧耿信笃西安文理学院化学系陕西西安710065 西北大学现代分离科学研究所陕西西安710069

用高效疏水色谱(HPHIC)研究了还原变性核糖核酸酶(RNase A)在HIC上流动相中脲浓度、流动相流速及蛋白浓度对还原变性RNase A复性的影响.发现还原变性RNase A在脲浓度为2.0mol/L时,复性效率可达80%以上.在蛋白浓度为20 mg/mL时,复性效率... 详细信息

用高效疏水色谱(HPHIC)研究了还原变性核糖核酸酶(RNase A)在HIC上流动相中脲浓度、流动相流速及蛋白浓度对还原变性RNase A复性的影响.发现还原变性RNase A在脲浓度为2.0mol/L时,复性效率可达80%以上.在蛋白浓度为20 mg/mL时,复性效率可达86.4%,当蛋白浓度过高时,在HIC上因聚集严重导致复性效率降低.流动相的流速对复性影响不大.

关键词：还原变性核糖核酸酶蛋白折叠高效疏水色谱

胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率

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色谱 1997年第4期15卷 284-287页

作者：白泉卫引茂耿信笃西北大学现代分离科学研究所

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不... 详细信息

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时，得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。

关键词：高效疏水色谱蛋白折叠 α-淀粉酶胍变脲变

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活性蚤白质的高效疏水作用色谱法分离和纯化

生物化学与生物物理进展 1990年第1期17卷 15-19页

作者：茅力练鸿振南京医学院预防医学系南京大学现代分析中心

高效疏水作用色谱是最近几年才发展起来的分离蛋白质的新方法,具有分离效率高、容量大、不损伤蛋白质的活性等特点。本文简要阐述该方法的基本概念,并介绍几种常见高效疏水作用色谱固定相的合成及其最新应用。

关键词：高效疏水色谱蛋白分离纯化

用疏水色谱法纯化基因重组牛朊病毒正常成熟蛋白

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纺织高校基础科学学报 2001年第1期14卷 1-5,33页

作者：耿信笃王超展张养军申烨华王大伟田波西北大学现代分离科学研究所陕西西安710069 中国科学院微生物研究所分子病毒学与生物工程研究室北京100080

研究并比较了高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)的流动相组成、固定相、p H值和梯度方式对分离基因重组大肠杆菌高效表达的牛朊病毒正常成熟蛋白的影响 .在此基础上 ,确定了牛朊病毒正常成熟蛋白分离纯化的最优化条件 ,即仅用高效疏水色谱... 详细信息

研究并比较了高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)的流动相组成、固定相、p H值和梯度方式对分离基因重组大肠杆菌高效表达的牛朊病毒正常成熟蛋白的影响 .在此基础上 ,确定了牛朊病毒正常成熟蛋白分离纯化的最优化条件 ,即仅用高效疏水色谱法进一步便可得到纯度和质量回收率均大于 90 %的目标蛋白 .还讨论了用 HPHIC对变性 b Pr Pc L 的分离机理 .

关键词：牛朊病毒高效疏水色谱蛋白分离纯化基因工程

四氢糠醇对α-胰凝乳蛋白酶在液相色谱中复性效率的影响

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分析化学 2002年第12期30卷 1435-1439页

作者：申烨华王海波卫引茂耿信笃西北大学现代分离科学研究所陕西省重点实验室陕西省重点实验室西安710069

用高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)研究了将四氢糠醇加入盐酸胍 (GuHCl)变性剂中或将四氢糠醇键合至硅胶基质时 ,对α 胰凝乳蛋白酶 (α Chy)复性效率的影响情况 ,并以α Chy的生物活性回收率对结果进行了表征。用尺寸排阻色谱 (SEC)与HP... 详细信息

用高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)研究了将四氢糠醇加入盐酸胍 (GuHCl)变性剂中或将四氢糠醇键合至硅胶基质时 ,对α 胰凝乳蛋白酶 (α Chy)复性效率的影响情况 ,并以α Chy的生物活性回收率对结果进行了表征。用尺寸排阻色谱 (SEC)与HPHIC的实验结果进行了比较 ,结果表明 ,四氢糠醇在变性剂中和键合至硅胶上时 ,均可提高α Chy的复性效率 ,但提高的程度不同。四氢糠醇在溶液中或在HPHIC固定相表面时具有辅助α Chy进行复性作用的机理可能是由于四氢糠醇与α Chy形成了复合物的形式。实验中还对GuHCl中加入的四氢糠醇量进行了优化

关键词：蛋白复性 α-胰凝乳蛋白酶高效疏水色谱排阻色谱

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重组人干扰素-γ的制备与鉴定

色谱 2008年第2期26卷 206-211页

作者：吴丹高栋白泉耿信笃西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室陕西西安710069

用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(***)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱... 详细信息

用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(***)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱、离子交换色谱、固定化镍离子亲和色谱上的保留行为也进行了研究。色谱柱纯化的rhIFN-γ收集液经排阻色谱除盐和冷冻干燥得到rhIFN-γ干粉。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对rhIFN-γ干粉进行了测定,rhIFN-γ单体的相对分子质量为17184.0,二聚体的相对分子质量为34204.4。用细胞病变抑制法(CPEI)测定rhIFN-γ干粉的比活性为9.5×108IU/mg。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定rhIFN-γ干粉的纯度高于95%。用色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ的质量回收率达到93.7%,纯度高于95%,比活性为4.3×107IU/mg。结果表明,采用PEG200-STHIC色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ是一种十分高效的方法。

关键词：重组人干扰素-γ 蛋白折叠液相色谱法高效疏水色谱复性纯化

人IFN-γ在大肠杆菌中高效表达和色谱复性研究

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西北大学学报（自然科学版） 2003年第5期33卷 540-544页

作者：王骊丽耿信笃韩骅西北大学现代分离科学研究所/现代分离科学陕西省重点实验室陕西西安710069 第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室陕西西安710032

从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT-PCR扩增hIFN-γ的cDNA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现... 详细信息

从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT-PCR扩增hIFN-γ的cDNA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现了hIFN-γ的高效表达,表达的目的蛋白可占菌体总蛋白的55%。用5L和50L发酵罐放量生产的产物,经高效疏水色谱HPHIC直接复性和纯化得到了重组hIFN-γ纯品,其比活性与天然蛋白相近。

关键词：人干扰素-γ 反转录聚合酶链反应重组蛋白表达复性与纯化高效疏水色谱

不同龋敏感人群唾液富酪蛋白对致龋细菌粘附影响的比较

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现代口腔医学杂志 2005年第2期19卷 155-157页

作者：侯建霞武俊韩燕北京大学口腔医学院 100081

目的比较不同龋敏感人群唾液富酪蛋白(SalivaryStatherin)含量的差别,并观察唾液富酪蛋白对牙菌斑中两种主要细菌(变形链球菌和血链球菌)粘附能力的影响,探讨富酪蛋白与龋病的关系。方法用高效疏水色谱分离提纯唾液富酪蛋白,对比分析15... 详细信息

目的比较不同龋敏感人群唾液富酪蛋白(SalivaryStatherin)含量的差别,并观察唾液富酪蛋白对牙菌斑中两种主要细菌(变形链球菌和血链球菌)粘附能力的影响,探讨富酪蛋白与龋病的关系。方法用高效疏水色谱分离提纯唾液富酪蛋白,对比分析15名无龋者(DMFT =0 )及15名高龋者(DMFT≥6 )唾液中富酪蛋白的含量,并用全唾液及提纯的不同浓度的富酪蛋白作为实验性获得性膜成分,观察经放射性同位素3 H -胸腺嘧啶核苷酸(3 H -TDR)标记的变形链球菌和血链球菌对羟磷灰石的粘附情况。结果高龋个体唾液富酪蛋白的浓度明显较无龋者唾液富酪蛋白的浓度低(P 0 .0 5 )。不同龋敏感人群相同浓度的唾液富酪蛋白对S .mutans粘附的影响无明显差异(P >0 .0 5 )。结论唾液富酪蛋白的含量具有个体差异性,而且对不同细菌粘附的影响不同,从而可能导致不同个体、不同牙面对龋敏感度不同。

关键词：唾液人群血链球菌细菌粘附变形链球菌影响含量酪蛋白高效疏水色谱敏感

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色谱饼对生物大分子的快速纯化

色谱饼对生物大分子的快速纯化

作者：姚文兵西北大学

学位级别：硕士

色谱饼是在计量置换理论和短柱原理的基础上设计制造的。现已成功地应用于基因工程下游产品的分离纯化中。本文将其用于动物组织中活性蛋白与工业粗酶的提取，并在较短时间内得到了纯度较高的目的蛋白，体现出色谱饼在分离过程中使用压... 详细信息

色谱饼是在计量置换理论和短柱原理的基础上设计制造的。现已成功地应用于基因工程下游产品的分离纯化中。本文将其用于动物组织中活性蛋白与工业粗酶的提取，并在较短时间内得到了纯度较高的目的蛋白，体现出色谱饼在分离过程中使用压力低，蛋白回收率高和快速的特点。本文包括五章。第一章文献综述第二章人血清白蛋白的纯化在所选定色谱条件下用色谱饼(10×20minI.D.)对其流动相种类、浓度、缓冲液、pH值、流速进行了优化研究，在优化条件下对标准蛋白混合物进行了在不同流速条件下分离情况的比较，结果显示装填有小颗粒填料的色谱饼在高流速条件下仍然具有良好的分离能力，还在较大流速条件下，在10分钟内对人血清白蛋白进行了快速纯化，其纯化的人血清白蛋白的纯度大于88％，蛋白质回收率大与65％第三章蛋清中溶菌酶的纯化首先采用疏水色谱对溶菌酶进行分离纯化，由于蛋清中多种蛋白质与溶菌酶保留时间相近，无法用HIC将其彻底分离。最后采用离子交换色谱纯化溶菌酶，建立了用高效液相色谱分离溶菌酶的新方法，结果表明，被纯化的溶菌酶可以与杂蛋白进行很好的分离，并且得到活性回收率为94％，活性为该方法具有分离速度快，纯化效率高的特点。第四章 α-淀粉酶的纯化本章采用高效疏水色谱分离纯化α-淀粉酶，详细讨论了纯化的最佳条件，在给定的条件下纯化工业用α-淀粉酶，其活性回收率达90％，比活性为120U/mg，此法纯化α-淀粉酶简单快速，效率高，不仅可以纯化工业粗酶，也可纯化其他来源的淀粉酶。第五章细胞色素C的纯化本章分别采用高效疏水色谱和高效离子交换色谱分离纯化猪心中的细胞色素C，由于亲水性较强，可以与猪心中其他杂蛋白进行有效分离，得到纯度为 90%的目标蛋白，其等电点为10.8，可以很好地在阳离子交换柱中保留，在优化了分离条件的情况下，得到纯度为85%的细胞色素C。

关键词：高效疏水色谱高效离子交换色谱色谱饼纯化人血清白蛋白溶菌酶 α-淀粉酶细胞色素C