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猪圆环病毒2型的分离鉴定及高免卵黄抗体的研制

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中国预防兽医学报 2019年第12期41卷 1256-1260,1274页

作者：丁雨善翟洪月李明亮鲍印杨德全李娜姚伦广阚云超冷超粮南阳师范学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/南阳市兽医生物工程技术研究中心河南南阳473000

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)特异性高免卵黄抗体(IgY),本研究首先对2017年~2018年河南部分地区规模化养猪场采集的19份疑似感染PCV2猪的病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行PCV2全基因组测序分析、病毒分离鉴定、制备灭活疫苗免疫蛋鸡并... 详细信息

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)特异性高免卵黄抗体(IgY),本研究首先对2017年~2018年河南部分地区规模化养猪场采集的19份疑似感染PCV2猪的病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行PCV2全基因组测序分析、病毒分离鉴定、制备灭活疫苗免疫蛋鸡并制备其IgY,对制备的IgY经中和试验检测其中和活性。比较氯仿法与水稀释-硫酸铵沉淀法制备的IgY的纯度差异。结果显示,河南省部分地区的PCV2阳性率为63.2%(12/19)。PCV2全基因组序列分析显示,12株PCV2之间的同源性为96.9%~100%,与其它PCV2代表株之间的同源性为95.1%~99.9%。遗传进化分析显示,8株PCV2属于PCV2d亚型,4株属于PCV2b亚型。病毒分离结果显示,7份阳性样品可以分离出病毒,其中一株病毒效价达106.5 TCID50/mL。用该株病毒制备的PCV2灭活疫苗免疫蛋鸡能够诱导其产生较高水平的特异性IgY。中和试验结果显示,该IgY对PCV2具有较高的中和活性,中和效价达1:181。此外,通过比较氯仿法和水稀释-硫酸铵沉淀法制备IgY的效果显示,两种方法均较为理想,但前者获得的样品纯度更高。本研究为进一步开展IgY抗PCV2研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型病毒分离高免卵黄抗体制备方法

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猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的研制与应用

中国畜牧兽医 2010年第6期37卷 185-187页

作者：索江华吴玉臣唐光武郭爽张桂云郑州牧业工程高等专科学校郑州450011 河南农业大学郑州450002

为制备猪圆环病毒2型(porcine circovirus serotype2,PCV-2)高免卵黄抗体,并对其治疗效果进行研究,通过自制猪圆环病毒2型(PCV-2)灭活苗,免疫SPF产蛋鸡,收集高免蛋,制备PCV-2高免卵黄抗体,对高免卵黄抗体进行无菌检验、活体动物安全性检... 详细信息

为制备猪圆环病毒2型(porcine circovirus serotype2,PCV-2)高免卵黄抗体,并对其治疗效果进行研究,通过自制猪圆环病毒2型(PCV-2)灭活苗,免疫SPF产蛋鸡,收集高免蛋,制备PCV-2高免卵黄抗体,对高免卵黄抗体进行无菌检验、活体动物安全性检测,用琼脂扩散方法进行效价检验和人工感染保育猪治疗试验,并将其应用于临床实践,观察其治疗效果。结果抗体效价达到1∶64;人工感染治疗试验治愈率达100%;临床试验治愈率为96%,应用效果良好。

关键词：猪圆环病毒2型高免卵黄抗体人工感染临床试验

AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究

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动物医学进展 2007年第4期28卷 5-8页

作者：伍海芽喻正军陈剑锋宋云峰周明光杨俊兴周红波金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物研究室湖北武汉430070

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY)。在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY。同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验。结果表明,纯化... 详细信息

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY)。在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY。同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验。结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1∶640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力。以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗。

关键词： AIV H5N1 高免卵黄抗体理化特性

河南省H9N2AI、IBD流行病学调查及抗H9N2AI、IBD二联高免卵黄抗体的研制与初步应用

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河南省H9N2AI、IBD流行病学调查及抗H9N2AI、IBD二联高免卵黄抗体...

作者：宋海杰河南农业大学

学位级别：硕士

H9N2 AI、IBD是危害我国养禽业的两大重要疾病。为更好的了解其流行情况和防控这两种疾病的发生,本文对这两种疫病进行了流行病学调查,并对从临床上分离到的11株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行了遗传进化分析,研制出了抗H9N2 AI、IBD... 详细信息

H9N2 AI、IBD是危害我国养禽业的两大重要疾病。为更好的了解其流行情况和防控这两种疾病的发生,本文对这两种疫病进行了流行病学调查,并对从临床上分离到的11株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行了遗传进化分析,研制出了抗H9N2 AI、IBD二联高免卵黄抗体。具体研究如下:为了解河南省H9N2 AI和IBD的流行情况,对2014年河南农业大学禽病研究所门诊病例进行回顾性流行病学统计分析,结果显示,453份病例中,H9N2阳性率为20.75%(95%CI17.1,24.8),其中蛋鸡阳性率为20.37%(95%CI 16.4,24.8),肉鸡阳性率为22.67%(95%CI13.8,33.8);IBD阳性率为1.55%(95%CI 0.6,3.2),其中蛋鸡阳性率为1.06%(95%CI0.3,2.7),肉鸡阳性率为4.00%(95%CI 0.8,11.2)。H9N2 AIV感染主要集中在1-6月份,IBDV感染主要集中在1-3月份。在养殖密度相对较大的地区感染率高。2014年H9N2 AI和IBD在河南省部分地区普遍流行,IBD发病率较低。本研究为今后有效防控这两种疾病提供了科学依据和参考。对2010-2013年从河南部分地区分离到的11株H9N2 AIV,采用RT-PCR扩增并比较分析其HA基因。11个分离株的HA核苷酸及氨基酸同源性分别为:89.5-99.9%和91.6-99.8%,均属于欧亚型分支。在进化上,CK/HN/XC/10、CK/HN/XC2/10、CK/HN/SQ/11、CK/HN/XY1/11、CK/HN/ZK1/11、CK/HN/XY2/11、CK/HN/LY/13毒株均由Bird/GX/62/05演化而来,与香港分离的G97和Y280毒株关系近而处于同一分支。CK/HN/JZ/11、CK/HN/KF/11、CK/HN/ZK2/12、CK/HN/LH/121毒株与environment/Hunan/1-70/07、feces/Hunan/2-28/07、feces/Hunan/3-91/07属同一分支,均由CK/HN/JZ/11和CK/HN/LH/121毒株演变而来。以上结果显示H9N2 AIV存在一定的变异,存在不同动物宿主(包括人)间的相互传播与演化的潜在威胁,提示应加强对H9N2 AIV的分子流行病学调查和研究。为研制抗H9N2亚型禽流感、法氏囊病二联高免卵黄抗体,用自制的H9N2亚型禽流感、法氏囊油乳剂灭活苗,免疫高产蛋鸡;采用辛酸法提取卵黄抗体。经无菌检测、外源病毒检测、动物安全性试验、鸡胚接种试验检测均合格。人工感染预防和治疗试验以及对临床发病鸡进行初步应用试验结果表明:二联高免卵黄抗体对H9N2 AIV的人工感染的预防保护率为86.7%,治疗保护率为80.0%,对IBDV的人工感染的预防保护率为93.3%,治疗保护率为86.7%,对临床上发生法氏囊病鸡群的保护率为82.3%。研制的二联高免卵黄抗体对H9N2亚型禽流感、法氏囊病有较理想的预防和治疗效果,本试验为高免卵黄抗体的临床推广应用奠定了基础。

关键词： H9N2亚型禽流感法氏囊病高免卵黄抗体 HA基因人工感染

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高免卵黄抗体粗提条件优化及稳定性检测

延边大学农学学报 2008年第1期30卷 72-76页

作者：武振久咸漠许应天吉林市动物检疫站吉林吉林132013 青岛化工学院山东青岛266042 延边大学农学院吉林龙井133400

对高免卵黄抗体（IgY）粗提过程中的水稀释倍数、pH值和4℃下温浴时间等环节进行优化试验，检测纯化后IgY的稳定性．结果表明：IgY的最适粗提条件为卵黄稀释倍数7倍，卵黄稀释液pH值5．0，4℃下温浴5h，纯化后的IgY活性在低于70℃下处理... 详细信息

对高免卵黄抗体（IgY）粗提过程中的水稀释倍数、pH值和4℃下温浴时间等环节进行优化试验，检测纯化后IgY的稳定性．结果表明：IgY的最适粗提条件为卵黄稀释倍数7倍，卵黄稀释液pH值5．0，4℃下温浴5h，纯化后的IgY活性在低于70℃下处理15min，3次以内的反复冻融及pH值4～7范围等条件下几乎不受影响．

关键词：高免卵黄抗体最适粗提条件优化稳定性

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高免卵黄抗体(ND+IBD)的制备与应用

山东家禽 1991年第3期4卷 29-31页

作者：沈冰吴建华林开江济南肉食鸡公司山东农科院畜牧兽医研究所

鸡新城疫、鸡传染性法氏囊炎是目前危害养鸡业十分严重的病毒性传染病。在养鸡生产中,时常由于没有执行合适的免疫程序,而造成二种疫病的爆发流行,给养鸡者带来惨重的损失。如何有效的治疗鸡传染性法氏囊炎与鸡新城疫,已成为急待解决的... 详细信息

鸡新城疫、鸡传染性法氏囊炎是目前危害养鸡业十分严重的病毒性传染病。在养鸡生产中,时常由于没有执行合适的免疫程序,而造成二种疫病的爆发流行,给养鸡者带来惨重的损失。如何有效的治疗鸡传染性法氏囊炎与鸡新城疫,已成为急待解决的课题。为此,我们试制了高免卵黄抗体(ND+IBD),自1990年10月至1991年4月共治疗8.6万余只患病鸡,总保护率达94.2%,取得了较好的效果,现将制备与应用情况报告如下:

关键词：鸡病新城疫高免卵黄抗体 IBD

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使用高免卵黄抗体时应注意的若干问题

中国兽医杂志 1996年第1期22卷 57-58页

作者：陈德华江苏省如东职业高级中学 226404

近年来各地使用高免卵黄抗体,对控制鸡传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)这两大病毒性疾病,收到一定效果。笔者现就临诊应用时遇到的若干问题,谈谈个人的体会。一、疗效与发病后用药时间。我们曾对25个养鸡户5.2万只发生过 IBD 的鸡作过... 详细信息

近年来各地使用高免卵黄抗体,对控制鸡传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)这两大病毒性疾病,收到一定效果。笔者现就临诊应用时遇到的若干问题,谈谈个人的体会。一、疗效与发病后用药时间。我们曾对25个养鸡户5.2万只发生过 IBD 的鸡作过调查,其中19户3.7万只鸡在发病后4～8小时紧急注射抗 IBD 高免卵黄液,每鸡肌注1毫升,注射后6～8小时病鸡精神好转,12小时后停止死亡,发病期内共死亡鸡518只,治愈率达98.6%;而另6户1.5万只鸡在发病后12～16小时才注射抗 IBD 高免卵黄液,每鸡1～1.5毫升,注射后需18～24小时病情才有所好转,48小时后仍有部分鸡死亡,整个发病期共死鸡1880只,治愈率为87.5%。因此,当鸡发生 IBD

关键词：高免卵黄抗体使用免疫

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鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体研制与应用

湖北农业科学 2012年第17期51卷 3789-3790,3793页

作者：杨峻王红琳温国元罗玲罗青平艾地云张蓉蓉邵华斌湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064

用鸭肝炎病毒(DHV)地方分离毒株HB98株经鸡胚连续传53～62代适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为种毒,制备成弱毒疫苗和灭活疫苗分别免疫伊莎产蛋鸡,经3次免疫后,收获卵黄,测定病毒中和效价可达103以上,经30万只雏鸭临床应用,对未发病的雏鸭预防... 详细信息

用鸭肝炎病毒(DHV)地方分离毒株HB98株经鸡胚连续传53～62代适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为种毒,制备成弱毒疫苗和灭活疫苗分别免疫伊莎产蛋鸡,经3次免疫后,收获卵黄,测定病毒中和效价可达103以上,经30万只雏鸭临床应用,对未发病的雏鸭预防保护率达90%以上,发病鸭群治疗保护率达80%以上。

关键词：鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis,DVH) 高免卵黄抗体研制

新城疫高免卵黄抗体和Ⅳ系疫苗联合免疫的效果观察

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黑龙江畜牧兽医 2009年第4期 92-93页

作者：宋阳白城师范学院生物系

新城疫是由新城疫病毒引起的禽类的一种急性高度接触性传染病。本病发病急、致死率高，仍然是影响我国养禽业的主要传染病之一，而且多趋向于非典型化。目前控制该病的主要措施是疫苗的接种和高免卵黄抗体的应用。后者的应用极大地提高... 详细信息

新城疫是由新城疫病毒引起的禽类的一种急性高度接触性传染病。本病发病急、致死率高，仍然是影响我国养禽业的主要传染病之一，而且多趋向于非典型化。目前控制该病的主要措施是疫苗的接种和高免卵黄抗体的应用。后者的应用极大地提高了该病的治疗和紧急预防的效果。注射高免卵黄抗体属于人工被动免疫，它的优点是见效快，注射后即可产生作用，而且无任何毒副作用。

关键词：高免卵黄抗体新城疫病毒联合免疫疫苗接触性传染病紧急预防被动免疫毒副作用