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慢性HCV感染者外周血中髓样和浆样树突状细胞频数和表型研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第5期31卷 448-451页

作者：陈斯勇梁华中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206

目的探讨慢性HCV感染者外周血中髓样树突状细胞（mDC）和浆样树突状细胞（pDC）频数和表型的变化，并分析其与丙型肝炎临床指标间的相关性。方法采用流式细胞术检测HCV感染者及健康对照外周血中mDC和pDC的频数及细胞表面共刺激分子HLA-D... 详细信息

目的探讨慢性HCV感染者外周血中髓样树突状细胞（mDC）和浆样树突状细胞（pDC）频数和表型的变化，并分析其与丙型肝炎临床指标间的相关性。方法采用流式细胞术检测HCV感染者及健康对照外周血中mDC和pDC的频数及细胞表面共刺激分子HLA-DR、CD83、CD86、CD40和共抑制分子PD-L1的表达水平，并分析DC频数与HCV感染者血浆病毒载量、谷丙转氨酶（ALT）的相关性。结果与健康对照组相比，HCV感染者外周血中mDC和pDC的频数明显降低（患者组分别为0．37±0．19和0．19±0．12，对照组为0．51±0．18和0．29±0．13，P〈0．05），且mDC频数与血浆HCV载量和血清AIJT水平呈负相关（r=-0．5878，P〈0．0001；r=-0．4628，P=0．003）。患者mDC和pDC表面共刺激分子HLA-DR、CD83、CD86、CD40以及共抑制分子PD-L1的表达均有不同程度升高，差别有统计学意义（共刺激分子P〈0．01，共抑制分子P〈0．05或0．01）。结论慢性HCV感染者外周血mDC和pDC频数下降，但DC表面共刺激分子和共抑制分子的表达均明显升高。该结果提示mDC数量的减少可能与HCV的慢性持续性感染有关。

关键词：丙型肝炎髓样树突状细胞浆样树突状细胞流式细胞术

显微镜下多血管炎患者外周血髓样树突状细胞和调节性T细胞的表达及意义

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实用医院临床杂志 2022年第1期19卷 11-15页

作者：丁秋燕汪伟罗昊军李怡丁涵露四川省医学科学院·四川省人民医院肾内科四川成都610072 四川省自贡市第四人民医院肾内科四川自贡643000

目的探讨显微镜下多血管炎(MPA)患者外周血髓样树突状细胞(mDC)、调节性T细胞(Treg)水平与伯明翰系统性血管炎活动评分(BVAS)、肾组织病理损伤之间的关系。方法选择27例活跃期MPA患者(MPA活跃组)和18例缓解期MPA患者(缓解组),并以性别... 详细信息

目的探讨显微镜下多血管炎(MPA)患者外周血髓样树突状细胞(mDC)、调节性T细胞(Treg)水平与伯明翰系统性血管炎活动评分(BVAS)、肾组织病理损伤之间的关系。方法选择27例活跃期MPA患者(MPA活跃组)和18例缓解期MPA患者(缓解组),并以性别、年龄相匹配的健康志愿者15例为对照组,采用流式细胞技术三色分析法测定三组人群外周血中mDC占淋巴细胞的百分比、Treg细胞占CD4+细胞的百分比,其中mDC以Lin1^(-)HLA-DR^(+)CD11c^(+)确定,Treg细胞以CD4^(+)CD25^(high)CD127^(low)Treg细胞确定,将进行了肾穿刺的24例MPA患者分为局灶性12例,新月体性5例,混合性7例。结果MPA活跃组外周血mDC占淋巴细胞的百分比及CD4^(+)CD25^(high)CD127^(low)Treg细胞占CD4+细胞的百分比均较缓解组和健康对照组下降(P细胞占比均与BVAS评分负相关(P细胞的百分比、CD4^(+)CD25^(high)CD127^(low)Treg细胞占CD4^(+)细胞的百分比均较局灶性组、混合性组下降(P细胞下降与MPA患者疾病活跃度及肾组织急性病理损伤有关。

关键词：显微镜下多血管炎髓样树突状细胞调节性T细胞

慢性乙型肝炎患者外周血髓样树突状细胞功能分析

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第20期11卷 3904-3907页

作者：侯刚赵莉叶欣范华万宝美宋文刚泰山医学院附属泰安医院病理科山东省泰安市271000 泰山医学院免疫学教研室山东省泰安市271000

目的:对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞来源的髓样树突状细胞进行功能分析。方法:实验于2005-01/2006-07在泰山医学院完成。①髓样树突状细胞来源于2005-07/12泰山医学院附属医院传染科收治的20例慢性乙型肝炎患者,男12例,女8例,年... 详细信息

目的:对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞来源的髓样树突状细胞进行功能分析。方法:实验于2005-01/2006-07在泰山医学院完成。①髓样树突状细胞来源于2005-07/12泰山医学院附属医院传染科收治的20例慢性乙型肝炎患者,男12例,女8例,年龄21～42岁,乙型肝炎病毒标志物均为HBsAg(+)、HbeAg(+)、HbcAb(+),乙型肝炎病毒DNA均为阳性,3个月内均未使用抗病毒药物和免疫调节剂。诊断参照2000年西安全国病毒性肝炎会议修订的临床诊断标准,排除甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎等病毒重叠感染及其他原因引起的肝脏损害。②以14例健康供血员的髓样树突状细胞作为正常对照,男8例,女6例,年龄21～36岁。③慢性乙型肝炎患者与健康供血员各取外周血20mL,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离去除红细胞和粒细胞,收集外周血单个核细胞。应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导培养其分化发育为髓样树突状细胞,锥虫篮染色检测细胞活力并进行细胞计数。④收集培养第10天的1×109L-1髓样树突状细胞,离心管中分别加入荧光标记抗体HLA-DR-FITC和CD86-FITC,终浓度为5mg/L,4℃标记45min,用流式细胞仪检测细胞表面表型。⑤取培养第7天的1×109L-1髓样树突状细胞,加入含体积分数为1的胎牛血清、50μg/L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、10μg/L白细胞介素4、1U/L肿瘤坏死因子α的新鲜培养基继续培养,24h后收集培养上清,ELISA法检测白细胞介素10与白细胞介素12的含量。⑥培养第10天的髓样树突状细胞以30Gyγ放射线灭活后,每孔分别按髓样树突状细胞:T细胞=1∶40,1∶20,1∶10,1∶5加入到已含有纯化T细胞的96孔板中,采用3H-TdR掺入法检测髓样树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖反应的能力。结果:①髓样树突状细胞的形态学特征及生成量:慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞诱导培养10d时,呈典型的髓样树突状细胞,低密度,圆形或不规则形,表面有丰富的伸长毛刺,悬浮不贴壁,与正常人群外周血单个核细胞诱导的髓样树突状细胞形态学无明显区别。锥虫篮染色结果显示两组髓样树突状细胞活力均大于95%。慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞数量明显低于正常人群[(3.4±0.3)×109L-1,(5.2±0.3)×109L-1,t=17.2183,P髓样树突状细胞表型分析及细胞因子含量变化:与正常人群比较,慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞表面CD86和HLA-DR分子表达率均明显降低(t=5.4351～8.7062,P均细胞介素12的含量明显降低(t=13.7208,P细胞介素10的含量无明显变化。③混合淋巴细胞效应:在髓样树突状细胞:T细胞=1∶5,1∶10,1∶20,1∶40时,慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞激活T细胞增殖的能力明显低于正常人群(t=17.7096～28.0225,P均髓样树突状细胞数目减少、功能降低,可能是导致机体对慢性乙型肝炎病毒感染产生免疫耐受的原因之一。

关键词：慢性乙型肝炎 CD86 HLA-DR 细胞因子髓样树突状细胞

Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

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中国病理生理杂志 2015年第9期31卷 1680-1687页

作者：钱江吴健安弘房祥峰李东风杨士芳孟锦绣高兴林南方医科大学研究生院广东广州510515 广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省老年医学研究所呼吸内科广东广州510080 广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省老年医学研究所医学研究中心广东广州510080

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CS... 详细信息

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。

关键词：抗原85B 胸腺基质淋巴细胞生成素髓样树突状细胞胸腺基质淋巴细胞生成素受体 OX40L

负载肿瘤细胞裂解物的髓样与浆细胞样树突状细胞复合疫苗体外抗肺癌效应研究

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中华肿瘤杂志 2019年第7期41卷 501-507页

作者：谭剑峰钟承华陈俊郭权威况军张建华南方医科大学深圳医院胸外科 518000

目的探讨负载热处理Lewis肺癌细胞裂解物的小鼠髓样树突状细胞(mDC)与浆细胞样树突状细胞(pDC)复合疫苗治疗肺癌的可行性。方法利用重组小鼠fms样酪氨酸激酶受体3配体体外诱导骨髓细胞,磁珠分选mDC和pDC,将热处理Lewis肺癌细胞裂解物分... 详细信息

目的探讨负载热处理Lewis肺癌细胞裂解物的小鼠髓样树突状细胞(mDC)与浆细胞样树突状细胞(pDC)复合疫苗治疗肺癌的可行性。方法利用重组小鼠fms样酪氨酸激酶受体3配体体外诱导骨髓细胞,磁珠分选mDC和pDC,将热处理Lewis肺癌细胞裂解物分别加入mDC、pDC和mDC+pDC(比例为1∶1),比较各组刺激淋巴细胞增殖及诱导T细胞在体外杀伤肿瘤细胞的效应;利用流式细胞仪检测各组免疫表型CD80、CD86、CD40和主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ)分子的变化,酶联免疫吸附试验检测细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-12和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌情况。结果在负载热处理肿瘤细胞裂解物后,mDC+pDC组(mDC∶pDC=1∶1)刺激淋巴细胞增殖的能力(10.80±0.66)均高于相同细胞数量下单独培养的mDC组和pDC组(分别为8.63±0.65和7.10±0.46,均P细胞:靶细胞(E∶T)=10∶1的条件下,负载热处理肿瘤细胞裂解物的mDC+pDC组细胞杀伤率(31.68%±2.93%)均高于相同细胞数量下单独培养的mDC组和pDC组(分别为17.44%±0.97%和10.29%±1.33%,均P细胞杀伤率(54.77%±3.28%)均高于相同细胞数量下单独培养的mDC组和pDC组(分别为35.25%±1.51%和15.52%±0.73%,均P细胞杀伤率(73.01%±0.91%)均高于相同细胞数量下单独培养的mDC组和pDC组(分别为51.36%±0.58%和22.65%±1.28%,均P细胞的杀伤率也随之增高。负载热处理Lewis肺癌细胞裂解物的mDC+pDC组表面CD80、CD86、CD40和MHC-Ⅱ分子的平均荧光强度,均高于同等培养条件下相同细胞数量的mDC组和pDC组。在负载热处理肿瘤细胞裂解物条件下,mDC+pDC组、mDC组和pDC组细胞中IL-6水平分别为(586.67±52.52)pg/ml、(323.33±67.14)pg/ml和(166.67±16.07)pg/ml,IL-12水平分别为(2 568.75±119.24)pg/ml、(2 156.25±120.55)pg/ml和(672.92±31.46)pg/ml,TNF-α水平分别为(789.33±48.08)pg/ml、(584.89±116.49)pg/ml和(291.56±40.73)pg/ml;mDC+pDC组细胞中IL-6、IL-12和TNF-α水平均高于相同细胞数量单独培养的mDC组和pDC组(均P细胞裂解物的小鼠pDC与mDC复合疫苗,在体外诱导T淋巴细胞增殖及体外抗肿瘤效应上存在协同作用,且这种协同抗肿瘤作用与共刺激分子表达上调和细胞因子分泌增多等有关。

关键词：肺肿瘤髓样树突状细胞浆细胞样树突状细胞肿瘤细胞裂解物

IL-37对人原代髓样树突状细胞炎症相关因子表达的影响

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山东医药 2017年第42期57卷 40-42页

作者：吴万通崔兆娜天津市东丽区东丽医院天津300300 天津市河西区陈塘庄街社区卫生服务中心

目的观察白细胞介素37(IL-37)对人原代髓样树突状细胞(m DC)表达炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-12的影响。方法使用淋巴细胞分离液将全血细胞分离后提取单个核细胞,流式细胞分选方法分离纯化CD11c+CD123lowHLA-DR+的m DC。将分选后的m D... 详细信息

目的观察白细胞介素37(IL-37)对人原代髓样树突状细胞(m DC)表达炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-12的影响。方法使用淋巴细胞分离液将全血细胞分离后提取单个核细胞,流式细胞分选方法分离纯化CD11c+CD123lowHLA-DR+的m DC。将分选后的m DC分为3组:未处理组加入完全培养基;对照组加入完全培养基培养后,再加入100 ng/mL LPS;IL-37预处理组分别加入0.125、0.25、0.5、1μg/mL IL-37后,再加入100 ng/mL LPS。采用实时荧光定量PCR方法检测m DC中TNF-α、IL-6、IL-12 mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-12水平。结果与未处理组比较,对照组TNF-α、IL-6、IL-12 mRNA表达均升高(P均细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-12水平升高。各浓度IL-37预处理组与对照组相比,TNF-α水平均降低(P均细胞上清液中IL-6、IL-12水平降低(P均<0.05)。结论 IL-37能够降低人原代m DC表达和分泌炎症相关因子。

关键词：白细胞介素37 髓样树突状细胞流式细胞术肿瘤坏死因子α 白细胞介素6 白细胞介素12

小鼠骨髓浆细胞样与髓样树突状细胞的体外培养及对比研究

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河北医学 2021年第10期27卷 1626-1631页

作者：谭剑峰李东方郭权威况军张建华南方医科大学深圳医院胸外科广东深圳518000

目的:建立小鼠骨髓浆细胞样与髓样树突状细胞亚群的体外培养、分离及鉴定的方法,探讨小鼠骨髓树突状细胞亚群间生物学功能的差异。方法:获取C57BL/6小鼠骨髓细胞,利用重组小鼠fms样酪氨酸激酶受体3配体(rmFlt3-L)诱导其向pDC及mDC亚群分... 详细信息

目的:建立小鼠骨髓浆细胞样与髓样树突状细胞亚群的体外培养、分离及鉴定的方法,探讨小鼠骨髓树突状细胞亚群间生物学功能的差异。方法:获取C57BL/6小鼠骨髓细胞,利用重组小鼠fms样酪氨酸激酶受体3配体(rmFlt3-L)诱导其向pDC及mDC亚群分化,并利用流式细胞仪及磁珠抗体对小鼠骨髓DC亚群进行分离与鉴定,计算不同时间点细胞数量及mDC与pDC的占比,确定最佳分选时间,然后将Lewis肺癌细胞裂解物分别刺激mDC及pDC,观察DC细胞形态、利用流式细胞仪检测各组免疫表型分子的变化、ELISA法检测细胞因子的分泌情况及CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果:小鼠骨髓细胞经rmFlt3-L体外诱导培养8~9d,可获得表型为CD11c+CD11b-B220+pDC与CD11c+CD11b+B220-mDC。功能方面,在负载Lewis肺癌细胞裂解物条件下,mDC组分泌的IL-12及TNF-α均高于pDC组(P细胞增殖的能力均高于pDC组(P细胞核不规则,且细胞周边见较多的“突起”;而pDC体积较小,呈类圆形,大部分细胞表面无“突起”。免疫表型方面,负载Lewis肺癌细胞裂解物的mDC组细胞表面CD80、CD86、CD40及MHC-Ⅱ类分子平均荧光强度值高于pDC组。结论:小鼠骨髓细胞在rmFlt3-L的刺激诱导下分化成pDC与mDC亚群,负载肿瘤细胞裂解物的mDC的生物学功能强于pDC,可能与mDC的形态成熟与共刺激分子表达上调相关。

关键词：髓样树突状细胞浆细胞样树突状细胞肿瘤细胞裂解物

HBe Ag对髓样树突状细胞Toll样受体4及NF-κB信号通路的影响

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浙江医学 2019年第2期41卷 128-131页

作者：燕飞汤永志朱坚胜朱敏陈华忠刘均艳浙江省台州医院感染科 317000 浙江省台州医院科教科 317000

目的探讨HBe Ag对髓样树突状细胞(mDC)Toll样受体4(TLR4)及NF-κB信号通路的影响。方法将健康者外周血单核细胞诱导分化为未成熟mDC;加入HBe Ag体外刺激,经脂多糖(LPS)刺激获得成熟mDC。采用Western blot法检测TLR4、NF-κB信号通路蛋... 详细信息

目的探讨HBe Ag对髓样树突状细胞(mDC)Toll样受体4(TLR4)及NF-κB信号通路的影响。方法将健康者外周血单核细胞诱导分化为未成熟mDC;加入HBe Ag体外刺激,经脂多糖(LPS)刺激获得成熟mDC。采用Western blot法检测TLR4、NF-κB信号通路蛋白相对表达量,MTS法检测mDC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。结果培养至第9天,HBe Ag刺激组TLR4、NF-κB相对表达量为0.12±0.01、0.75±0.12,分别低于对照组的0.27±0.03、1.20±0.13(均P细胞比例为1∶5、1∶10、1∶20的反应中,HBe Ag刺激组刺激指数为2.93±0.05、2.56±0.19、1.44±0.09,分别低于对照组的4.83±0.05、3.57±0.35、2.13±0.11(均P细胞增殖能力。

关键词：髓样树突状细胞 HBeAg Toll样受体4 NF-κB

外周血髓样树突状细胞在急性ST段抬高性心肌梗死患者七天不良心脏事件中的预测价值

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中国医师进修杂志 2019年第8期42卷 739-743页

作者：汪亚丽杨浩许丹果基牛牛四川省德阳市人民医院检验科 618000

目的探讨外周血髓样树突状细胞(MDC)在预测急性ST段抬高性心肌梗死(STEMI)患者不良心脏事件中的预测价值。方法选取2016年2月至2017年8月在四川省德阳市人民医院心内科收治的39例STEMI患者为研究对象,依据7d发生不良心脏事件分为非合并... 详细信息

目的探讨外周血髓样树突状细胞(MDC)在预测急性ST段抬高性心肌梗死(STEMI)患者不良心脏事件中的预测价值。方法选取2016年2月至2017年8月在四川省德阳市人民医院心内科收治的39例STEMI患者为研究对象,依据7d发生不良心脏事件分为非合并不良事件组(uncomMI组,23例)和合并不良事件组(comMI组,16例),另外选取同期24例健康体检者作为健康对照组。比较各组一般情况、临床特征以及uncomMI组和comMI组发病第1天和第3天的MDC、浆细胞样树突状细胞(PDC),分析影响STEMI患者发生不良心脏事件的影响因素。结果STEMI患者早期(发病第1天)外周血MDC及PDC水平显著低于正常对照组(P0.05),而comMI组的MDC和PDC水平仍低于健康对照组和uncomMI组。Logistic分析结果显示,高龄、总胆固醇、MDC(发病第3天)均为STEMI患者7d发生不良心脏事件的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,MDC截断点取7时曲线下面积取最大值为0.8286,灵敏度为80.0%,特异度为85.7%。结论外周血的MDC与STEMI患者7d发生不良心脏事件存在一定的相关性,外周血的MDC百分比(发病第3天)对于STEMI患者7d发生不良心脏事件诊断具有一定的临床价值,此外高龄的STEMI患者7d不良心脏事件的发生率增加。

关键词：心肌梗塞不良心脏事件浆细胞样树突状细胞髓样树突状细胞