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镉对小鼠骨髓造血干细胞线粒体功能的影响

军事医学 2018年第2期42卷 97-100页

作者：胡辉刘伟丽张雪莲周坤杨栋谌志强邱志刚金敏陈照立李君文军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所天津300050

目的探究体内镉染毒对昆明小鼠骨髓造血干细胞线粒体功能的影响。方法选用体质量(20±2)g雄性昆明小鼠,随机分为对照组、镉低剂量组(7.5 mg/kg)和镉高剂量组(1 5 mg/kg),镉低剂量组和镉高剂量组小鼠分别于每周一、三、五灌胃给予氯化镉... 详细信息

目的探究体内镉染毒对昆明小鼠骨髓造血干细胞线粒体功能的影响。方法选用体质量(20±2)g雄性昆明小鼠,随机分为对照组、镉低剂量组(7.5 mg/kg)和镉高剂量组(1 5 mg/kg),镉低剂量组和镉高剂量组小鼠分别于每周一、三、五灌胃给予氯化镉溶液,对照组小鼠灌胃同等体积的蒸馏水,连续6周,于第8周提取小鼠骨髓细胞,利用流式细胞仪测定骨髓造血干细胞线粒体膜电位和线粒体活性氧(ROS)水平。结果与对照组相比,镉低剂量、高剂量组小鼠体质量增长受到明显抑制(P造血干细胞线粒体ROS水平显著升高(P造血干细胞线粒体膜电位显著降低(P骨髓造血干细胞氧化损伤,导致线粒体功能异常,且与剂量相关。

关键词：镉小鼠模型骨髓造血干细胞线粒体功能损伤

氢醌暴露对小鼠骨髓造血干细胞中蛋白激酶B和FoxO1 mRNA和蛋白表达的影响

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环境与健康杂志 2015年第9期32卷 775-778页

作者：刘想想白玉娥周胜王红武汉大学公共卫生学院湖北武汉430071 甘肃省疾病预防控制中心结防科

目的探讨苯代谢物氢醌（hydroquinone,HQ）对小鼠骨髓造血干细胞（hematopoietic stem cell,HSC）中蛋白激酶B和Forkhead转录因子1（Forkhead box O1,FoxO1）的m RNA和蛋白表达的影响。方法提取7只健康8周龄SPF级雄性昆明小鼠的骨髓细... 详细信息

目的探讨苯代谢物氢醌（hydroquinone,HQ）对小鼠骨髓造血干细胞（hematopoietic stem cell,HSC）中蛋白激酶B和Forkhead转录因子1（Forkhead box O1,FoxO1）的m RNA和蛋白表达的影响。方法提取7只健康8周龄SPF级雄性昆明小鼠的骨髓细胞,采用免疫磁珠法（magnetic activated cell sorting,MACS）分选出小鼠骨髓造血干细胞,分别暴露于含终浓度为0（对照）、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L HQ的培养基中培养24 h。检测细胞蛋白激酶B和FoxO1的m RNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,各剂量HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B m RNA和20、40μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞FoxO1 m RNA的表达水平均较高,差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。与对照组比较,2.5-40μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞FoxO1蛋白和5、10μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B蛋白的表达水平均较高,而20、40μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。且随着HQ暴露剂量的升高,小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B m RNA和蛋白的表达水平呈先上升后下降的趋势,FoxO1 m RNA和蛋白的表达水平呈波浪式下降的趋势。结论骨髓造血干细胞的调节可能部分依赖于蛋白激酶B和FoxO1。

关键词：氢醌骨髓造血干细胞蛋白激酶B FoxO1

乙型肝炎患者骨髓造血干细胞来源的树突状细胞表型分析

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国际免疫学杂志 2010年第5期33卷 411-414页

作者：石雁梅兰英华单蕾周晋李用国哈尔滨医科大学附属第一医院感染科 150001

目的检测乙型肝炎患者骨髓造血干细胞（HSC）诱导的树突状细胞（DC）的表面分子的表达,评价其相关因素及临床意义.方法收集慢性乙型肝炎患者的骨髓液9例,健康者7例后用磁珠分离仪分离纯化骨髓液CD34＋细胞,在含有干细胞生长因子（SCF... 详细信息

目的检测乙型肝炎患者骨髓造血干细胞（HSC）诱导的树突状细胞（DC）的表面分子的表达,评价其相关因素及临床意义.方法收集慢性乙型肝炎患者的骨髓液9例,健康者7例后用磁珠分离仪分离纯化骨髓液CD34＋细胞,在含有干细胞生长因子（SCF）、酪氨酸激酶受体家族Ⅲ的配体（FLT3）、促血小板生成素（TPO）、IL-3和10%FBS的IMDM培养基中孵育并进行扩增,在干细胞扩增基础上,在GM-CSF和IL-4作用下诱生DC,通过流式细胞仪分析其表面分子的表达并对DC进行形态学观察.结果乙型肝炎患者HSC经诱导为DC后,其免疫表型CD80、CD86、CD1a的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义：CD1a（t=3.94,P＜0.05）,CD80（t=7.08,P＜0.01）,CD86（t=3.65,P＜0.05）,而HLA-DR表达与正常组比较差异无统计学意义（t=0.34,P＞0.05）.结论慢性乙型肝炎患者HSC来源的部分DC的表面分子表达低下可能与HBV感染HSC后出现病态的免疫细胞分化有关.

关键词：乙型肝炎骨髓造血干细胞树突状细胞免疫表型

骨髓动员对骨髓造血干细胞在心肌梗死后心脏中定植及分化的影响

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中国组织化学与细胞化学杂志 2009年第3期18卷 304-310页

作者：田文曾定尹 Michael Kuhl mann Sigrid Nikol 中国医科大学附属第一医院心内科沈阳110001 德国明斯特大学医院心血管内科 d48149

目的观察小鼠心肌梗死后骨髓造血干细胞在心脏内的分化及细胞因子的影响。方法C57/BL6小鼠60只分为骨髓动员组和对照组,先后行脾切除、骨髓移植(骨髓供体为增强绿色荧光蛋白转基因小鼠)、骨髓动员及建立心肌梗死模型。心肌梗死后3周将... 详细信息

目的观察小鼠心肌梗死后骨髓造血干细胞在心脏内的分化及细胞因子的影响。方法C57/BL6小鼠60只分为骨髓动员组和对照组,先后行脾切除、骨髓移植(骨髓供体为增强绿色荧光蛋白转基因小鼠)、骨髓动员及建立心肌梗死模型。心肌梗死后3周将小鼠心脏取出并切片行组织学及激光共聚焦显微镜免疫荧光检查。结果骨髓动员可以增加EGFP阳性细胞在心脏中梗死区和边缘区的定植,但绝大多数EGFP阳性细胞都同时表达CD45。仅发现有极少数骨髓来源的心肌细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞,且与骨髓动员无相关性。结论骨髓动员能够明显促进骨髓来源细胞定植入小鼠心脏的梗死区;极少数骨髓造血干细胞可以分化为心肌细胞,其数量远不足以修复梗死心肌及改善心功能;骨髓造血干细胞不参与梗死区疤痕形成的病理过程。

关键词：骨髓造血干细胞骨髓动员增强绿色荧光蛋白共聚焦激光扫描心肌梗死

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骨髓造血干细胞与肝再生的相关性研究

世界华人消化杂志 2004年第12期12卷 2842-2844页

作者：王鹤桦潘兴华庞荣清高士争成都军区昆明总医院医学实验科云南省昆明市650032 中山大学医学实验动物中心广东省广州市510089

感染、中毒等引起的急慢性肝损伤治疗是临床医学领域的世界性难题,干细胞的研究为肝再生提供了全新的思路.肝再生的细胞学机制涉及肝细胞、肝干细胞和骨髓干细胞等. 新近发现骨髓造血干细胞具有向肝细胞转化的潜能,可以在体内外被诱导... 详细信息

感染、中毒等引起的急慢性肝损伤治疗是临床医学领域的世界性难题,干细胞的研究为肝再生提供了全新的思路.肝再生的细胞学机制涉及肝细胞、肝干细胞和骨髓干细胞等. 新近发现骨髓造血干细胞具有向肝细胞转化的潜能,可以在体内外被诱导分化为肝样细胞,移植到肝损伤动物体内可以修复肝组织损伤,这为肝再生研究开辟了新的途径.对骨髓造血干细胞参与肝细胞再生的深入研究,有可能找到肝损伤治疗的有效措施.

关键词：骨髓造血干细胞肝再生相关性研究肝组织损伤治疗

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痕量小鼠骨髓造血干细胞移植体系的建立

中国实验血液学杂志 2018年第4期26卷 1180-1185页

作者：刘卫刘兵安徽医科大学解放军307临床学院安徽合肥30032 军事科学院军事医学研究院附属医院北京100071

目的:建立痕量小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)移植体系。方法:利用ESLAM(CD45^+EPCR^+CD150^+CD48-)组合流式分选成体GFP/CD45.2小鼠骨髓细胞与保护细胞(CD45.2小鼠),共同移植给致死剂量照射的受体小鼠(CD45.2小鼠),分析移植后不同时间点,受体小鼠外周血嵌合以及其重建效率和谱系分化情况,随后处死受体小鼠,获取骨髓、胸腺、脾脏和外周血等组织的细胞,检测各组织嵌合情况。结果:移植后受体小鼠外周血结果显示第4周之后重建效率为100%,GFP^+细胞在各系细胞(髓系、红系、B细胞、T细胞、巨核)中不同时间点的比例不同,且各系重建水平的变化趋势不同;6个月之后各组织(外周血、骨髓、脾脏、胸腺)嵌合情况显示外周血红系和巨核细胞中有较高比例GFP^+细胞,且在髓系和淋系细胞中无GFP^+细胞,而骨髓的髓系细胞含也有较高比例GFP^+细胞,脾脏中的B细胞也有较高比例的GFP^+细胞,胸腺中的T细胞也含有较高比例GFP^+细胞。结论:ESLAM组合能够较高效率的富集具有长期重建能力的HSCs;这群细胞移植后6个月外周血结果提示可能具有红系和巨核分化倾向。

关键词：造血干细胞骨髓造血干细胞造血干细胞移植

TNF-α通过上调骨髓造血干细胞嘌呤受体促进其分化并加剧绝经后骨质疏松症的机制研究

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TNF-α通过上调骨髓造血干细胞嘌呤受体促进其分化并加剧绝经后骨...

作者：陆嘉佳中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

背景:绝经后骨质疏松（Postmenopausal Osteoporosis,POMP）的发生和发展与雌激素缺乏后体内炎性因子的增加具有密切联系。随着女性年龄增长,维持骨量平衡的雌激素水平降低,导致炎性因子增加,破坏骨质微环境,引起骨质流失和骨质疏松。... 详细信息

背景:绝经后骨质疏松（Postmenopausal Osteoporosis,POMP）的发生和发展与雌激素缺乏后体内炎性因子的增加具有密切联系。随着女性年龄增长,维持骨量平衡的雌激素水平降低,导致炎性因子增加,破坏骨质微环境,引起骨质流失和骨质疏松。增量明显的炎性因子以肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor alpha,TNF-α）为著。前期研究结果已表明,TNF-α通过增加骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem cells,BMMCs）嘌呤能受体P2Y2受体,从而抑制其分化为成骨细胞,减少骨质形成。但是,骨质疏松的形成,一方面受成骨细胞影响,另一方面受破骨细胞影响。因此,我们假设TNF-α的增多亦能通过影响骨髓造血干细胞（Bone Marrow Hematopoietic Stem cells,BMHCs）的P2受体而影响破骨细胞的形成,且目前尚未有明确的研究结论和机制报道。因此,我们设计了相关的实验方法,探究TNF-α通过何种方式影响破骨细胞的形成。目的:1.明确TNF-α能促进BMHCs向破骨细胞分化;2.明确TNF-α能引起BMHCs特定P2受体的表达增加;3.明确特定受体的表达增加能促进BMHCs向破骨细胞分化;4.探索TNF-α促进BMHCs特定受体表达增加的信号通路。方法:1.动物实验构建经典绝经后骨质疏松模型—去卵巢（ovariectomy,OVX）小鼠:将从吉辉购买的30只8周龄雌性小鼠按照随机数表法随机分为三组,第一组行假手术并进行尾静脉注射生理盐水（SHAM组）,第二组行卵巢切除术并进行尾静脉注射生理盐水（OVX组）,第三组行卵巢切除术并进行尾静脉注射anti-TNF-α（OVX+anti-TNF-α组）。在相同条件下饲养12周后,进行无差别取材。取小鼠眼球血清,使用ELISA法测定其TNF-α因子水平,评估去卵巢后小鼠血清TNF-α因子水平。对标本（股骨、胫骨）固定后进行Micro-CT扫描,三维重建后评价骨超微结构的变化,并对标本进行切片和多种染色,包括苏木精——伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色（Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）、免疫组化染色等方法,以评价小鼠骨小梁、破骨细胞的大体结构变化。2.细胞实验2.1收集培养骨髓造血干细胞,用不同浓度TNF-α（10、20、30ng/ml）刺激,培养不同时间（1、3、5天）,进行分化干预,最后进行TRAP染色,并进行计数统计比较,探究TNF-α促进骨髓造血干细胞分化为破骨细胞的适宜浓度和时间;2.2通过对骨髓造血干细胞的不同刺激（TNF-α浓度为0、20ng/ml）培养后,检测不同时间点的P2受体,多次重复、不同方法（实施荧光定量PCR检测、Western blot）,明确高表达特定受体;2.3通过转染特异性敲除质粒,抑制特定受体基因的表达,为检测质粒转染效率,分别通过TRAP染色、免疫染色及特异性基因的Western blot实验来检测小鼠骨髓造血干细胞分化为破骨细胞后各项指标的情况;2.4通过小牛骨片、仿生骨涂片的共培养,检测TNF-α因子（浓度为0、20、20ng/ml）刺激骨髓造血干细胞,分化形成的破骨细胞的骨吸收能力是否增强。结果:1.在体实验结果表明,TNF-α因子升高可促进形成绝经后骨质疏松,增加破骨细胞的产生,并可上调BMHCs P2X7受体的表达,而anti-TNF-α逆转效果显著。通过ELISA法,可以检测到造模后小鼠血清中TNF-α因子的数值,以此验证本实验所用小鼠模型及分组的合理性和可靠性。Micro-CT扫描后进行三维重建,结果分析显示,与假手术对照组（SHAM）相比,去卵巢小鼠（OVX）股骨BMD和BV/Tv降低,Tb.N升高。然而,与单纯去卵巢小鼠（OVX）相比,经anti-TNF-α治疗的OVX小鼠的骨小梁结构明显改善。HE染色（骨小梁结构）结果相似。TRAP染色结果显示,anti-TNF-α处理可明显抑制去卵巢小鼠破骨细胞的形成。免疫荧光结果显示,去卵巢小鼠标本内存在较多破骨细胞呈P2X7阳性。结果表明,去卵巢小鼠血清TNF-α因子水平明显高于其他两组,而去卵巢+抗肿瘤坏死因子-α小鼠血清中TNF-α因子水平明显低于单纯去卵巢小鼠。将三组骨髓造血干细胞取出后提取破骨细胞前体细胞中的蛋白和RNA,结果提示OVX组小鼠细胞蛋白中P2X7蛋白表达量和RNA明显增加,高于其他两组。2.体外实验结果证实,20ng/ml的TNF-α可显著诱导骨髓造血干细胞分化为破骨细胞,并显著上调P2X7的表达。在体外,用不同浓度梯度（0、10、20、30ng/ml）的TNF-α因子刺激骨髓造血干细胞,可通过分化培养获得不同数量TRAP染色阳性的破骨细胞。染色结果提示,在20 ng/ml的刺激下,

关键词：雌激素缺乏性骨质疏松症骨髓造血干细胞肿瘤坏死因子α P2X7受体破骨细胞

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骨髓造血干细胞与肝脏再生相关性研究进展

实用医院临床杂志 2008年第3期5卷 118-120页

作者：魏尉袁丁四川省自贡市第一人民医院消化内科四川自贡643000 四川大学华西医院普外2科四川成都610041

骨髓造血干细胞具有多向的分化能力,当肝脏在严重受损情况下,骨髓造血干细胞具有向肝细胞分化的能力,从而促进肝脏的再生。本文对其发生机制以及应用前景作一综述。

关键词：骨髓造血干细胞肝再生肝移植

小鼠骨髓造血干细胞、外周血组成随年龄的变化趋势及其相关性分析

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中国细胞生物学学报 2011年第11期33卷 1213-1219页

作者：赵凯杨星宇万颖寒孙瑞林费俭同济大学生命科学与技术学院上海200092 上海南方模式生物研究中心上海201210

造血干细胞是具有自我更新能力并能分化为血液中各种血细胞组分的多能干细胞。近来研究显示,不同造血干细胞表面标志物标记的造血干细胞具有分化为不同血细胞的趋势,但是这种分化的内在关系仍不清楚。对小鼠CD34^-/Sca-1^+骨髓造血干细... 详细信息

造血干细胞是具有自我更新能力并能分化为血液中各种血细胞组分的多能干细胞。近来研究显示,不同造血干细胞表面标志物标记的造血干细胞具有分化为不同血细胞的趋势,但是这种分化的内在关系仍不清楚。对小鼠CD34^-/Sca-1^+骨髓造血干细胞、外周血组成随小鼠年龄增长的变化情况进行了分析,结果显示:随着年龄的增长,骨髓中的CD34^-/Sca-1^+骨髓造血干细胞比率显著增加;而外周血各组分则随年龄变化呈现不同的趋势。对不同年龄段小鼠的骨髓造血干细胞及其他组分与外周血组分的同步分析发现,外周血中血小板密度变化趋势与CD34^-/Sca-1^+骨髓造血干细胞变化情况相关系数为0.804 8;外周血中淋巴细胞密度变化趋势与CD34^+/Sca-1^-骨髓细胞的变化情况相关系数为0.947 97;外周血中白细胞密度变化趋势与CD34^+/Sca-1^+骨髓细胞变化情况相关系数为0.763 1(大于0.9为极度相关,0.7到0.9为高度相关)。

关键词：骨髓造血干细胞外周血相关性