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骨髓基质细胞通过TSP-1/CD36通路对急性髓系白血病细胞影响的初步研究

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中国肿瘤临床 2023年第4期50卷 167-171页

作者：郑雅心亢俊楠陈泽慧王丽娜郑国光热西担·努尔买买提田晨天津医科大学肿瘤医院血液科国家恶性肿瘤临床医学研究中心天津市恶性肿瘤临床医学研究中心天津市“肿瘤防治”重点实验室天津市300060 新疆和田地区人民医院中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)

目的:探讨骨髓基质细胞(bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,BM-MSCs)对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞影响的作用机制。方法:构建MLL-AF9过表达诱导的AML小鼠模型,通过PCR比较AML小鼠和野生型小鼠(WT)BM-MSCs内TSP-1的表达差异。通过慢病毒载体使AML小鼠来源的BM-MSCs高表达TSP-1后,与AML细胞行transwell共培养,检测AML细胞表面TSP-1受体CD36及CD47的表达及AML细胞的生长情况。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺,检测AML细胞增殖、凋亡的变化。结果:AML小鼠BM-MSCs中TSP-1的表达低于对照组。过表达TSP-1的BM-MSCs与AML细胞行transwell共培养后AML细胞的生长受到抑制,且AML细胞表面的CD36受体表达升高,但CD47表达无明显差异。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺后,AML细胞增殖加快,凋亡减少。结论:TSP-1/CD36信号通路有望成为治疗AML的潜在靶点。

关键词：骨髓基质细胞急性髓系白血病 TSP-1 CD36

骨髓基质细胞中B4GALT1对与其共培养的人急性髓系白血病细胞株增殖的影响

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中国实验血液学杂志 2020年第1期28卷 283-289页

作者：庞星辰李鸿姣王一关锋李想江南大学生物工程学院糖化学和生物工程重点实验室江苏无锡214122 西北大学生命科学与医学部国际联合糖生物学和医用化学研究室陕西西安710069 陕西省人民医院血液科陕西西安710068

目的:探讨骨髓基质细胞糖基转移酶B4GALT1的表达对造血细胞增殖的影响及其上游调控机制。方法:在人骨髓来源基质细胞HS5中过表达B4GALT1,并与急性髓系白血病细胞KG1a共培养,采用流式细胞术检测其对造血细胞增殖的影响;应用双荧光素酶报... 详细信息

目的:探讨骨髓基质细胞糖基转移酶B4GALT1的表达对造血细胞增殖的影响及其上游调控机制。方法:在人骨髓来源基质细胞HS5中过表达B4GALT1,并与急性髓系白血病细胞KG1a共培养,采用流式细胞术检测其对造血细胞增殖的影响;应用双荧光素酶报告基因检测、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法对调控基质细胞B4GALT1表达的上游转录因子进行预测和验证。结果:HS5中过表达B4GALT1能显著促进共培养体系中KG1a的增殖。基质细胞中B4GALT1表达与上游c-Jun表达呈正相关,并通过JNK/c-Jun抑制剂进行了验证。结论:糖基转移酶及其引起的相应糖基化差异在造血微环境中起到的调控作用,其作用机制有待更深入的研究。

关键词：骨髓基质细胞 B4GALT1基因 KG1a细胞细胞增殖 c-Jun

骨髓基质细胞HS-5分泌物白细胞介素-6对人急性髓细胞性白血病细胞系HL-60抗凋亡的作用

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解剖学报 2020年第1期51卷 32-39页

作者：陈雅琳白天鸽李瑶瑶王文强魏虹石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832000

目的探讨骨髓基质细胞HS-5分泌物白细胞介素-6(IL-6)对人急性髓细胞性白血病(AML)细胞系HL-60增殖与凋亡的影响。方法体外培养HL-60细胞与HS-5细胞,构建共培养体系,应用扫描电子显微镜、ELISA法、细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、Annexin V-F... 详细信息

目的探讨骨髓基质细胞HS-5分泌物白细胞介素-6(IL-6)对人急性髓细胞性白血病(AML)细胞系HL-60增殖与凋亡的影响。方法体外培养HL-60细胞与HS-5细胞,构建共培养体系,应用扫描电子显微镜、ELISA法、细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、Real-time PCR和Western blotting技术分别检测HL-60细胞增殖和凋亡的变化;将不同组的HL-60细胞分别接种于BALB/c裸鼠,观察并记录成瘤情况。结果骨髓基质细胞HS-5分泌的IL-6能够促进HL-60细胞增殖、抑制其凋亡,并下调HL-60细胞中的促凋亡基因Bax的表达,上调抗凋亡基因Bcl-2的表达。共培养组HL-60细胞在BALB/c裸鼠中成瘤能力最强,HL-60细胞单独培养组成瘤能力最弱。结论骨髓基质细胞HS-5促进HL-60细胞增殖、抑制其凋亡的部分作用机制是通过分泌IL-6实现的。

关键词：人急性髓细胞性白血病骨髓基质细胞白细胞介素-6 免疫印迹法裸鼠

骨髓基质细胞对急性淋巴细胞白血病细胞化疗敏感性的影响

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中华肿瘤杂志 2017年第12期39卷 885-890页

作者：王燕韩正祥张敬川东南大学附属徐州市中心医院肿瘤内科 221000 徐州医科大学附属医院肿瘤内科 221000

目的探讨骨髓基质细胞及其细胞外基质成分和基质细胞因子对急性淋巴细胞白血病细胞Sup－B15阿糖胞苷（Ara－C）化疗敏感性的影响。方法构建急性淋巴细胞白血病细胞Sup－B15与骨髓基质细胞OP9共培养模型。将Sup－B15细胞分为Sup－B15与OP... 详细信息

目的探讨骨髓基质细胞及其细胞外基质成分和基质细胞因子对急性淋巴细胞白血病细胞Sup－B15阿糖胞苷（Ara－C）化疗敏感性的影响。方法构建急性淋巴细胞白血病细胞Sup－B15与骨髓基质细胞OP9共培养模型。将Sup－B15细胞分为Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组、Sup－B15单独培养组、Sup－B15与OP9共培养液组、OP9单独培养液组和Sup－B15单独培养液组。采用细胞计数盒8法观察不同浓度的Ara－C对各组Sup－B15细胞增殖活力的影响；采用流式细胞仪检测Ara－C对各组Sup－B15细胞凋亡的影响；采用Western blot法检测各组Sup－B15细胞中bcl－2蛋白的表达情况。结果CCK－8法检测结果显示，随着Ara－C浓度的增加，Ara－C对Sup－B15细胞的抑制率也随之增强。不同浓度Ara－C处理各组Sup－B15细胞48 h，Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组的IC50分别为0.510和0.339 μg/ml，均明显高于Sup－B15单独培养组的IC50（0.091 μg/ml，P〈0.05）。Sup－B15与OP9共培养液组的IC50为0.204 μg/ml，明显高于OP9单独培养液组（0.087 μg/ml，P〈0.05）和Sup－B15单独培养液组的IC50值（0.097 μg/ml，P〈0.05）。流式细胞仪检测结果显示，0.1 μg/ml Ara－C处理各组Sup－B15细胞24 h后，Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组、Sup－B15单独培养组的早期凋亡细胞百分数分别为（6.67±2.19）%、（8.95±3.04）%和（20.46±2.63）%，Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组的早期凋亡细胞百分数均明显低于Sup－B15单独培养组，差异有统计学意义（P〈0.05）。Sup－B15与OP9共培养液组、OP9单独培养液组和Sup－B15单独培养液组的早期凋亡细胞百分数分别为（11.16±2.97）%、（22.08±2.71）%和（19.25±1.57）%，Sup－B15与OP9共培养液组的早期凋亡细胞百分数明显低于Sup－B15单独培养液组，差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blot法检测结果显示，Sup－B15单独培养组、Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组、Sup－B15与OP9共培养液组、OP9单独培养液组和Sup－B15单独培养液组Sup－B15细胞中bcl－2蛋白的相对表达量分别为1.00±0.00、1.53±0.03、1.38±0.01、1.26±0.05、1.03±0.01和0.98±0.02，Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组Sup－B15细胞中bcl－2蛋白表达量均高于Sup－B15单独培养组（P〈0.05）；Sup－B15与OP9共培养液组Sup－B15细胞中bcl－2蛋白的表达量明显高于Sup－B15单独培养液组（P〈0.05），而OP9单独培养液组与Sup－B15单独培养液组的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论骨髓基质细胞OP9及其细胞外基质成分和基质细胞因子等骨髓微环境成分参与诱导了Sup－B15细胞对Ara－C的化疗抵抗。

关键词：白血病细胞骨髓基质细胞微环境耐药

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骨髓基质细胞衰老对造血细胞氧化应激的影响

解剖学报 2015年第6期46卷 757-763页

作者：宋小英景鹏伟熊丽溶贾道勇王亚平王璐重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室组织学胚胎学教研室重庆400016

目的探讨骨髓基质细胞衰老对骨髓造血细胞氧化应激的影响。方法取6-8周雄性健康C57小鼠,全骨髓贴壁法培养骨髓基质细胞（BMSCs）,建立衰老骨髓基质细胞体外模型。实验分为常规对照组和衰老组。对照组：常规培养基培养48h;衰老组：常规... 详细信息

目的探讨骨髓基质细胞衰老对骨髓造血细胞氧化应激的影响。方法取6-8周雄性健康C57小鼠,全骨髓贴壁法培养骨髓基质细胞（BMSCs）,建立衰老骨髓基质细胞体外模型。实验分为常规对照组和衰老组。对照组：常规培养基培养48h;衰老组：常规培养基内加入30g/L D-半乳糖,作用48h。衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测衰老骨髓基质细胞百分率;流式细胞术分析骨髓基细胞周期。骨髓单个核细胞（BMNCs）与骨髓基细胞共培养,锥虫蓝计数BMNCs活细胞数;流式细胞术检测骨髓基细胞周期;髓系多向性造血祖细胞（CFU-Mix）半固体培养集落计数;DCFH-DA荧光染色流式检测BMNCs和骨髓基细胞的活性氧簇（ROS）水平;激光扫描共焦显微术半定量检测骨髓基细胞连接蛋白43（Cx43）表达。结果 D-半乳糖体外诱导骨髓基细胞衰老,骨髓基细胞SA-β-Gal染色阳性率显著上升,细胞周期G1期阻滞。BMNCs与衰老组骨髓基细胞共培养48h,锥虫蓝计数BMNCs活细胞数量下降;细胞周期阻滞;CFU-Mix集落形成数量较对照组显著下降。衰老组骨髓基细胞胞内ROS含量增加,Cx43表达明显下调;与衰老骨髓基细胞共培养的BMNCs胞内ROS含量较与常规对照骨髓基细胞共培养的BMNCs胞内ROS含量上升。结论衰老骨髓基质细胞抑制骨髓造血细胞增殖分化,其机制可能与衰老骨髓基质细胞氧化应激增强,缓解造血细胞氧化应激能力下降有关。

关键词：衰老骨髓基质细胞造血细胞氧化应激流式细胞术小鼠

急性髓系白血病细胞对骨髓基质细胞增殖、凋亡的影响

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中国实验血液学杂志 2022年第2期30卷 430-434页

作者：陈泽慧郑雅心司君齐袁田张志蓉田晨天津医科大学肿瘤医院血液科国家肿瘤临床医学研究中心天津市“肿瘤防治”重点实验室天津市恶性肿瘤临床医学研究中心天津300060 新疆和田地区人民医院肿瘤科新疆和田848000

目的:研究在白血病微环境下,急性髓系白血病细胞对骨髓基质细胞(BM-MSC)增殖、凋亡的影响。方法:选取过表达MLL-AF9的急性髓系白血病(AML)小鼠模型与野生型(WT)小鼠为研究对象。应用流式细胞分选仪分选WT小鼠与AML小鼠来源的BM-MSC并计... 详细信息

目的:研究在白血病微环境下,急性髓系白血病细胞对骨髓基质细胞(BM-MSC)增殖、凋亡的影响。方法:选取过表达MLL-AF9的急性髓系白血病(AML)小鼠模型与野生型(WT)小鼠为研究对象。应用流式细胞分选仪分选WT小鼠与AML小鼠来源的BM-MSC并计数。通过倒置荧光显微镜分析不同来源的BM-MSC的形态及生长差异性。采用Brdu法检测不同来源的BM-MSC增殖率。采用Annexin V/PI法检测不同来源的BM-MSC凋亡率。结果:与WT小鼠来源的BM-MSC比较,AML来源的BM-MSC数量显著增加(P细胞增殖率显著增高(P细胞能够促进BM-MSC增殖,抑制其凋亡。

关键词：急性髓系白血病骨髓基质细胞增殖凋亡小鼠

骨髓基质细胞介导的微环境对人肺腺癌A549细胞的作用

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中国病理生理杂志 2018年第4期34卷 599-604页

作者：李汪陈思成孙艳婷李具琼朱颖张盟浩陈彬施琼重庆医科大学检验医学院临床诊断教育部重点实验室重庆400016 新乡医学院河南新乡453003

目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肺腺癌A549细胞的作用及机制。方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理A549细胞,分别通过MTT实验和划痕愈合实验观察A549细胞的活力和迁移能力,应用q PCR... 详细信息

目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肺腺癌A549细胞的作用及机制。方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理A549细胞,分别通过MTT实验和划痕愈合实验观察A549细胞的活力和迁移能力,应用q PCR检测CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)的表达;加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinases,MAPK/ERK)通路抑制剂U0126后,应用Western blot法检测MAPK/ERK信号通路活化相关蛋白ERK及其磷酸化水平,划痕愈合实验检测抑制MAPK/ERK通路对HS-5-CM效果的影响,应用Western blot检测CX3CR1的表达情况。结果:HS-5-CM可以促进A549细胞的活力和迁移能力(P细胞中CX3CR1的表达升高(P细胞迁移的能力(P细胞介导的微环境可以促进A549细胞的活力和迁移,其机制可能涉及MAPK/ERK信号通路的活化和CX3CR1的表达。

关键词：骨髓基质细胞肺癌肿瘤微环境 MAPK/ERK信号通路

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骨髓基质细胞衰老对造血细胞衰老的影响

解剖学报 2016年第6期47卷 750-755页

作者：陈雄斌陈粼波刘颖景鹏伟侯吉颖夏婕妤宋小英熊丽溶王璐王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)衰老对骨髓造血细胞衰老的影响及其可能的机制。方法贴壁培养大鼠骨髓基质细胞,传代BMSCs至P3代时分组。对照组:常规培养;衰老组:常规培养基础上加入D-半乳糖(D-Gal)诱导BMSCs衰老,两组细胞分别培养48h。收... 详细信息

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)衰老对骨髓造血细胞衰老的影响及其可能的机制。方法贴壁培养大鼠骨髓基质细胞,传代BMSCs至P3代时分组。对照组:常规培养;衰老组:常规培养基础上加入D-半乳糖(D-Gal)诱导BMSCs衰老,两组细胞分别培养48h。收集培养上清液,ELISA法检测细胞因子:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β,IL-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,CCK-8检测细胞增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMSCs衰老。分离提取正常骨髓单个核细胞(BMMNCs),在衰老组与对照组BMMSCs上种植正常BMMNCs共培养24h,收集上层悬浮BMMNCs。CCK-8法测定细胞增殖能力;多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)半固体培养法检测细胞增殖及分化能力;SA-β-Gal染色观察衰老细胞百分率;流式细胞术分析细胞周期与细胞凋亡;DCFH-DA荧光染色检测细胞活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测细胞内丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果衰老组BMSCs增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,细胞分泌GM-CSF、SCF、IL-6、IL-1β水平明显降低,IL-2、TNF-α水平显著升高。与衰老BMSCs共培养后,BMMNCs的增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著上升,BMMNCs形成CFUMix集落数量明显降低,细胞周期呈现阻滞且细胞凋亡率上升,细胞内ROS、MDA含量上升,SOD含量下降。结论本实验中D-Gal成功复制了BMSCs衰老,衰老的BMSCs可诱导骨髓造血细胞衰老,其机制可能与BMSCs导致造血细胞氧化损伤有关。

关键词：骨髓造血细胞骨髓基质细胞衰老生物学酶联免疫吸附测定法大鼠

骨髓基质细胞对SOD1转基因小鼠的作用及机制探讨

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中华医学杂志 2013年第29期93卷 2324-2328页

作者：周畅张晨姚倩倩赵翠萍张成青岛大学医学院附属医院神经内科 266003 广州中山大学第一附属医院神经内科

目的研究脑脊液内移植小鼠骨髓基质细胞（MSCs）对铜锌超氧化物歧化酶1（SODI）转基因小鼠的作用及机制。方法将5×10^5MSCs经枕大池移植（8、10和12周龄时）到SODl转基因小鼠的脑脊液中。通过悬线试验和运动神经元计数来评估小鼠的疾... 详细信息

目的研究脑脊液内移植小鼠骨髓基质细胞（MSCs）对铜锌超氧化物歧化酶1（SODI）转基因小鼠的作用及机制。方法将5×10^5MSCs经枕大池移植（8、10和12周龄时）到SODl转基因小鼠的脑脊液中。通过悬线试验和运动神经元计数来评估小鼠的疾病进展。应用免疫荧光染色观察15周龄SODl小鼠脊髓前角胶质细胞的活化。应用反转录一聚合酶反应检测MSCs神经营养因子mRNA的表达。结果鞘内移植MSCs能够改善SODl小鼠的运动行为，并保护运动神经元。MSCs鞘内移植明显减轻SODl小鼠脊髓前角小胶质细胞（52±7比38±7；F=69．3，P=0．02）和星形胶质细胞（79±9比63±9；F=40．7，P=0．03）的活化。另外，在炎症环境中，MSCs神经生长因子mRNA的表达明显增多（P〈0．05）。结论鞘内移植MSCs对SODl转基因小鼠有治疗作用，可能与减轻神经炎症和分泌神经生长因子发挥了神经保护作用有关。

关键词：肌萎缩侧索硬化骨髓基质细胞细胞移植神经生长因子胶质细胞