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人骨诱导因子和绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体的构建和鉴定及在HT-29细胞中的表达

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中国老年学杂志 2017年第6期37卷 1332-1334页

作者：霍永旭李宇刘雁军郭元彪杨春蕾赵聪四川大学生命科学院四川成都600031 成都市第三人民医院消化内科成都市第三人民医院普外科成都市第三人民医院实验医学研究部

目的构建和鉴定人骨诱导因子基因(hOGN)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人大肠癌细胞株HT-29中的表达水平。方法采用PCR方法克隆hOGN基因;将hOGN基因连接到带有GFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的... 详细信息

目的构建和鉴定人骨诱导因子基因(hOGN)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人大肠癌细胞株HT-29中的表达水平。方法采用PCR方法克隆hOGN基因;将hOGN基因连接到带有GFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒pEZ-hOGN-SV40-eGFP-IRES-Puro(pEZ-hOGN)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-PacHIVmix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的pEZ-hOGN感染HT-29细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后HT-29细胞中GFP表达情况和目的基因hOGN的表达情况。结果基因测序分析证实克隆的hOGN基因与GenBank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实OGN正确插入pEZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×10~9~1×10~9TU/ml。在HT-29细胞中重组病毒感染96h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在HT-29细胞中hOGN蛋白过表达。结论成功构建携带hOGN基因的重组慢病毒载体,在HT-29细胞中有效表达。

关键词：骨诱导因子绿色荧光蛋白慢病毒载体 HT-29细胞

骨诱导因子通过NF2/Hippo信号通路抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭

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山西医科大学学报 2024年第3期55卷 269-279页

作者：樊东齐玉娟赵华栋空军军医大学第二附属医院普通外科西安710032

目的探究骨诱导因子(osteoglycin,OGN)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的作用和调控机制。方法利用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析甲状腺肿瘤组织和正常组织中OGN表达的差异及患者无病生存期。采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析我院... 详细信息

目的探究骨诱导因子(osteoglycin,OGN)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的作用和调控机制。方法利用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析甲状腺肿瘤组织和正常组织中OGN表达的差异及患者无病生存期。采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析我院的52例PTC肿瘤组织和相应的癌旁正常组织中OGN表达。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析PTC细胞系(K1,TPC-1,IHH-4,KTC-1和BCPAP)和正常甲状腺细胞系(Nthy-ori3-1)中OGN表达水平。使用对照质粒和pcDNA3.1-OGN质粒分别转染TPC-1和KTC-1细胞,分为:control组、pc-NC组和pc-OGN组;随后,将si-RNA-si-RNA-NF2或si-RNA-LATS1共转染至pcDNA3.1-OGN组TPC-1细胞中,分为:pc-NC组、pc-OGN组、pc-OGN+si-NF2组和pc-OGN+si-LATS1组。采用CCK-8、流式细胞术、Transwell和划痕实验分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移水平;蛋白免疫印迹法检测上皮间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及NF2和Hippo信号通路关键蛋白Yes关联蛋白1(YAP1)、哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)和大肿瘤抑制因子1(LATS1)的蛋白表达。结果GEPIA数据库分析结果显示,与正常组织相比,肿瘤组织中OGN表达水平减少(P<0.01),低水平的OGN表达与较短的无病生存期显著正相关。同时,临床患者样本中肿瘤组织OGN表达水平也较正常组织有明显减少(P<0.01)。与Nthy-ori3-1细胞比较,5种PTC细胞系中OGN mRNA和蛋白表达均有不同程度的减少(P<0.01)。与pc-NC组比较,pc-OGN组TPC-1和KTC-1细胞活力、侵袭和迁移能力减弱(P<0.01),上皮间充质转化相关蛋白N-cadherin和Vimentin表达减少(P<0.01),而细胞凋亡率增加(P<0.01),E-cadherin蛋白表达增加(P<0.01)。与pc-NC组比较,pc-OGN组细胞中NF2表达水平升高(P<0.01),Hippo通路YAP1磷酸化水平减少,MST1和LAST1磷酸化水平增加(P<0.01)。与pc-OGN组细胞相比,pc-OGN+si-NF2组和pc-OGN+si-LATS1组细胞凋亡率显著抑制(P<0.01),细胞侵袭和迁移水平显著增加(P<0.01)。结论OGN通过NF2/Hippo通路抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,OGN有望成为PTC的治疗靶点。

关键词：骨诱导因子甲状腺乳头状癌细胞活力凋亡侵袭迁移 NF2/Hippo通路

骨诱导因子mRNA表达与乳腺癌发生和转移的关系

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天津医科大学学报 2008年第2期14卷 203-206页

作者：潘秀华陈晓慧李晓青冯玉梅天津医科大学肿瘤医院生物化学及分子生物学实验室乳腺癌防治教育部重点实验室天津300060

目的:探讨骨诱导因子(OGN)基因mRNA表达与乳腺癌发生、发展及转移的关系。方法:采用实时定量RT-PCR方法检测30例乳腺良性肿瘤、108例乳腺原发癌组织和其中30例的癌旁正常组织、30例的淋巴结转移癌中OGN mRNA的表达状态,并分析乳腺原发癌... 详细信息

目的:探讨骨诱导因子(OGN)基因mRNA表达与乳腺癌发生、发展及转移的关系。方法:采用实时定量RT-PCR方法检测30例乳腺良性肿瘤、108例乳腺原发癌组织和其中30例的癌旁正常组织、30例的淋巴结转移癌中OGN mRNA的表达状态,并分析乳腺原发癌中OGN mRNA表达水平与临床病理因素的关系。结果:OGN mRNA在乳腺癌旁正常组织、良性肿瘤、原发癌和转移癌的高表达率分别为76.7%、83.3%、44.4%和6.7%,其中在非癌的良性肿瘤与正常组织间无差异,在乳腺原发癌的表达比非癌组织下调(P<0.05),在转移癌的表达比原发癌下调(P<0.001)。乳腺原发癌中OGN mRNA表达水平仅与患者年龄相关,而与肿瘤大小、临床分期、组织学分级和淋巴结状态等临床病理因素无关。结论:OGN mRNA低水平状态与乳腺癌的发生和转移相关,有望作为乳腺癌诊断和监测肿瘤进展的分子标志物。

关键词：乳腺癌骨诱导因子 mRNA表达

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高效的骨诱导生长因子——成骨蛋白-1

生物化学与生物物理进展 1999年第3期26卷 205-208页

作者：王健吴惠联韩金祥山东省医药生物技术研究中心山东省医学科学院基础所微生物研究室

成骨蛋白１（ＯＰ１）又称骨形态发生蛋白７（ＢＭＰ７），属转化生长因子β（ＴＧＦβ）超家族成员．重组人ＯＰ１（ｒｈＯＰ１）在体内和体外都显示了高效的骨诱导活性，可使多种实验动物的骨缺损满意愈合。

关键词：成骨蛋白-1 转化生长因子β 骨诱导因子 op-1

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高效的骨诱导生长因子──成骨蛋白-1

中国生化药物杂志 1999年第5期20卷 262-264页

作者：王健吴惠联韩金祥山东省医药生物技术研究中心济南250062 山东省医学科学院微生物研究室

成骨蛋白－１（ＯＰ－１）是９０年代发现的一种成骨能力最强的骨形成蛋白。重组人ＯＰ－１（ｒｈＯＰ－１）在体内和体外都显示了高效的骨诱导活性，可使多种实验动物的骨缺损愈合。综述了ＯＰ－１的分子生物学、成骨活性机制及临床应... 详细信息

成骨蛋白－１（ＯＰ－１）是９０年代发现的一种成骨能力最强的骨形成蛋白。重组人ＯＰ－１（ｒｈＯＰ－１）在体内和体外都显示了高效的骨诱导活性，可使多种实验动物的骨缺损愈合。综述了ＯＰ－１的分子生物学、成骨活性机制及临床应用前景。

关键词：成骨蛋白-1 骨诱导因子骨折愈合骨缺损

美Collagen公司发现促进骨生长的关键性因子

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生物技术通报 1989年第9期5卷 26-27页

作者：金人一

美 Collagen 公司(加州帕洛阿尔托)宣布发现了引起骨生长的物质。这是一个新的细胞生长因子,与转化生长因子β(TGFb)结合后就能促进骨生长。公司声称,已申请专利的这个新蛋白质——骨诱导因子(OIF)是一个突破,能由此开发一些可治疗骨损... 详细信息

美 Collagen 公司(加州帕洛阿尔托)宣布发现了引起骨生长的物质。这是一个新的细胞生长因子,与转化生长因子β(TGFb)结合后就能促进骨生长。公司声称,已申请专利的这个新蛋白质——骨诱导因子(OIF)是一个突破,能由此开发一些可治疗骨损伤、缺损和有关疾病的新产品。

关键词： Collagen 性因子转化生长因子帕洛阿尔托骨诱导因子骨损伤新蛋白质体外试验骨移植物软骨基质

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右归丸对大鼠膝骨关节炎的干预作用及其机制

中国应用生理学杂志 2020年第5期36卷 511-516页

作者：颜春鲁安方玉汪永锋金华赵崇博王统香邓婕张蕾蕾无甘肃中医药大学中西医结合学院甘肃兰州730000 甘肃中医药大学教学实验实训中心甘肃兰州730000 甘肃中医药大学基础医学院甘肃兰州730000 甘肃中医药大学中医临床学院甘肃兰州730000 甘肃中医药大学临床医学院甘肃兰州730000 甘肃省高校重大疾病分子医学与中医药防治研究重点实验室甘肃兰州730000 敦煌医学与转化省部共建教育部重点实验室甘肃兰州730000 兰州市疾病预防控制中心甘肃兰州730000

目的:探讨右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠关节软骨组织骨诱导因子(OGN)、骨黏连蛋白(ON)和纤维蛋白原2(FBN2)的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组,模型组,硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖),右归丸(高、中、低剂量)组,每组10只。采用改... 详细信息

目的:探讨右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠关节软骨组织骨诱导因子(OGN)、骨黏连蛋白(ON)和纤维蛋白原2(FBN2)的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组,模型组,硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖),右归丸(高、中、低剂量)组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别灌胃给予右归丸4.8,2.4,1.2 g/kg,硫酸氨基葡萄糖组灌胃给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g/kg,连续给药8周。干预结束24 h后取鼠膝关节软骨,采用HE染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中OGN、ON和FBN2的表达;Western blot法检测各组关节软骨组中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分显著升高,软骨组织FBN2蛋白表达水平上显著增加,OGN、ON和GSK-3β蛋白表达水平上的显著降低(P骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分和FBN2蛋白表达水平显著降低,GSK-3β蛋白表达水平上显著增加,且右归丸中、高剂量组OGN、ON蛋白表达水平均显著增加(P骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸能够延缓关节软骨退变,其可能机制是通过提高骨诱导因子和骨粘连蛋白的表达水平来促进关节软骨的骨化和重构。

关键词：膝骨关节炎右归丸骨诱导因子骨黏连蛋白纤维蛋白原2

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隔膜技术下引导性骨再生机制探讨

中国生物医学工程学报 2002年第2期21卷 128-131页

作者：张永刚卢世璧解放军总医院骨科北京100853

目的 :通过观察隔膜技术下引导性骨再生组织学过程以及BMP、TGF β、bFGF的表达规律 ,进而结合骨诱导理论探讨引导性骨再生的机制。方法 :在成年、雄性新西兰兔双侧桡骨中段制作 10mm标准骨缺损不愈合模型 ,随机选择一侧为实验侧 ,用硅... 详细信息

目的 :通过观察隔膜技术下引导性骨再生组织学过程以及BMP、TGF β、bFGF的表达规律 ,进而结合骨诱导理论探讨引导性骨再生的机制。方法 :在成年、雄性新西兰兔双侧桡骨中段制作 10mm标准骨缺损不愈合模型 ,随机选择一侧为实验侧 ,用硅胶膜成管状包裹骨缺损 ,另一侧为对照侧。术后分别进行组织学以及BMP、TGF β、bFGF单克隆抗体的免疫组化染色和cDNA探针原位杂交观察。结果 :(1)组织学发现隔膜能够在骨缺损处形成密闭腔室 ,隔膜管内骨折端各种细胞增殖共同形成肉芽组织 ,占据骨缺损并提供成骨细胞来源。 (2 )术后在不同的时间由不同的细胞表达bFGF、TGF β、BMP ,两组中无明显不同。 (3) 3种骨诱导因子在实验组总体含量明显高于对照侧 (P 骨再生成功的关键是由于隔膜在骨折局部形成了一个相对独立的骨再生环境 ,排除了周围组织的干扰 ,能够防止骨诱导因子扩散 ,使骨缺损局部的骨诱导因子含量相对增加 ,最终成功地诱导骨再生修复骨缺损。

关键词：硅胶囊引导性骨再生骨诱导因子表达骨缺损

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应力与骨组织再生的生物学和生物力学基础

中华创伤骨科杂志 2013年第10期15卷 871-875页

作者：李刚夏和桃中国香港、香港中文大学医学院骨科、香港新界威尔斯亲王医院北京骨外固定技术研究所

骨的形态发生、生长、塑形是一个动态过程，并不断进行着重建。在胚胎发育过程中，形态发生于肢芽特定的控制中心，并通过信号调控其他纽胞，如骨诱导因子调节骨原细胞。成骨细胞及破骨细胞的增殖、分化及代谢等功能，通过自分泌及旁分... 详细信息

骨的形态发生、生长、塑形是一个动态过程，并不断进行着重建。在胚胎发育过程中，形态发生于肢芽特定的控制中心，并通过信号调控其他纽胞，如骨诱导因子调节骨原细胞。成骨细胞及破骨细胞的增殖、分化及代谢等功能，通过自分泌及旁分泌机制来启动和调控骨再生过程。除了生物学的内在因素，

关键词：骨组织再生生物学力学基础应力胚胎发育过程形态发生信号调控骨诱导因子