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硬腭骨膜牵张成骨过程中ACTA和FS的表达研究

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实用口腔医学杂志 2012年第1期28卷 34-38页

作者：姚淑东宋庆高邓金勇陈尚蒋练遵义医学院附属口腔医院口腔颌面外科贵州563003

目的:检测犬腭裂骨膜牵张成骨各时期ACT A和FS mRNA的表达,探讨ACT A/FS系统对其修复的调节模式。方法:用幼犬15只建立腭裂模型,2月后,于腭裂裂隙缘骨膜下安放牵张器,牵张力(2.45±0.20)N。牵张器放置后10、20、30、40和60 d,各处死3只... 详细信息

目的:检测犬腭裂骨膜牵张成骨各时期ACT A和FS mRNA的表达,探讨ACT A/FS系统对其修复的调节模式。方法:用幼犬15只建立腭裂模型,2月后,于腭裂裂隙缘骨膜下安放牵张器,牵张力(2.45±0.20)N。牵张器放置后10、20、30、40和60 d,各处死3只,取牵张侧及对照侧骨组织,提取RNA并用RT-PCR检测ACT A和FS mRNA的表达。结果:对照侧10～60 d标本检出少量ACT A和FS mRNA,各组间比较无统计学意义(P>0.05)。牵张侧10 d标本可检出ACT A和FS mR-NA;20、30、40及60 d ACT A mRNA含量分别为10 d的1.78、2.82、4.27及3.04倍,FS mRNA分别为1.52、2.12、2.47及1.90倍。结论:在牵张期间,ACT A可能直接或间接地增强膜内成骨,FS参与ACT A生物活性的调节。

关键词：腭裂骨膜牵张成骨激活素卵泡抑素

腺病毒介导的人骨形成蛋白2基因转染促进骨膜牵张成骨的实验研究

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腺病毒介导的人骨形成蛋白2基因转染促进骨膜牵张成骨的实验研究

作者：叶展超山东大学

学位级别：硕士

目的：探讨骨膜牵张成骨新技术，为牙槽骨缺损及其它骨缺损寻找新的修复方法，并通过在骨膜牵张成骨的模型上局部应用Ad-hBMP-2，评价其在骨膜牵张成骨过程中的作用，以寻找一种缩短骨膜牵张成骨疗程的新方法。方法：实... 详细信息

目的：探讨骨膜牵张成骨新技术，为牙槽骨缺损及其它骨缺损寻找新的修复方法，并通过在骨膜牵张成骨的模型上局部应用Ad-hBMP-2，评价其在骨膜牵张成骨过程中的作用，以寻找一种缩短骨膜牵张成骨疗程的新方法。方法：实验一，选用16只成年雄性新西兰大白兔，将自制的骨膜牵张成骨装置牢固固定在兔的一侧下颌骨体部外侧面，术后原位固定7d，于术后第8d对术侧下颌骨骨膜牵张两次，每次1mm。从术后第9d开始每4d牵张1mm，连续牵张20d，最终将骨膜牵离骨面7mm。另一侧未手术的下颌骨作为空白对照侧。于术后第28d，35d、42d和56d随机处死4只动物。取下颌骨标本，并通过X线摄片、组织学检查和新生骨量分析观察牵张间隙新骨形成的情况。实验二，选用成年雄性新西兰大白兔32只，随机分为两组，每组16只。按实验一所述方法建立下颌骨骨膜牵张成骨的动物模型并进行牵张，术后动物下颌骨于原位固定7d，于术后第8d对术侧下颌骨骨膜牵张两次，每次1mm。然后随机选取一组动物，在牵张侧牵张间隙内注射100μl滴度为1×10pfu／ml的Ad-hBMP-2病毒液，为Ad-hBMP-2治疗组;另外一组16只未注射Ad-hBMP-2病毒液，为单纯骨膜牵张组。从术后第9d开始每4d牵张1mm，连续20d。术后第28d，骨膜被牵离骨面共7mm。分别于术后35d、42d、56d和84d，随机处死8只动物，包括4只Ad-hBMP-2组和4只单纯牵张组。取动物标本行X线摄片、组织学检查和新生骨量分析，结果采用两样本均数比较的t检验进行统计学分析。

关键词：重组腺病毒骨形成蛋白2 牵张成骨骨膜牵张成骨基因治疗

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腭裂骨膜牵张成骨修复与机理的初步研究

腭裂骨膜牵张成骨修复与机理的初步研究

作者：邓金勇遵义医学院

学位级别：硕士

目的:在建立骨膜牵张成骨犬实验腭裂模型的基础上,通过自行设计的镍钛记忆合金牵张器对腭裂裂隙缘的骨膜进行牵张,检测不同时期激活素A(activin,ACT A)和卵泡抑素(follistatin,FS)mRNA的表达,探讨ACT A/F S系统对腭裂边缘骨膜牵张成骨... 详细信息

目的:在建立骨膜牵张成骨犬实验腭裂模型的基础上,通过自行设计的镍钛记忆合金牵张器对腭裂裂隙缘的骨膜进行牵张,检测不同时期激活素A(activin,ACT A)和卵泡抑素(follistatin,FS)mRNA的表达,探讨ACT A/F S系统对腭裂边缘骨膜牵张成骨修复的调节模式,同时观察不同时期新骨形成的结构特点,研究新骨形成的连续过程及规律,对骨膜牵张成骨修复腭裂的机理进行初步探讨。材料与方法: 本研究分为两个部分: 1.犬硬腭骨膜牵张成骨术中激活素A和卵泡抑素表达的研究 1.1选用健康杂种幼犬15只,手术建立骨膜牵张成骨的犬实验腭裂模型,并于腭裂模型制作后两个月,于腭裂裂隙缘骨膜下安放镍钛合金骨膜牵张器,以钛钉固定,牵张器即以250±20g牵张力持续牵引骨膜。 1.2在骨膜牵张器放置后10、20、30、40和60天,各处死3只动物,切取牵张侧的新生骨组织及对照侧骨切开处未牵张的骨组织提取RNA,用RT-PCR检测ACTA、FSmRNA各时期的表达。 2.腭裂缘骨膜牵张成骨的新骨形成研究 2.1选用健康杂种幼犬10R,其中8只动物的手术及牵张器的放置方法同第一部分,2只动物不作任何处理。 2.2在骨膜牵张器放置后20、30、40和60天,各处死动物2只,共8只,骨膜牵张器放置一侧为实验组,未放置一侧为对照组。另2只不作任何处理动物为空白对照组,于饲养60天后处死。在处死动物前14天和前3天肌肉注射四环素(50 mg/kg),处死后切取含实验组新骨组织、对照组以及空白对照组骨组织的0.5cm×1cm大小骨块,采用硬组织骨切片技术,进行组织学分析和骨组织计量学动态参数检测,探讨新骨形成规律。结果:(1)RT-PCR实验结果:对照侧骨切开未牵张的骨组织10至60天标本检测出少量ACT A和FS mRNA,各组间比较无明显统计学意义(p＞0.05)。牵张侧的新骨组织在骨膜牵张器放置后10天已有ACT A和FS mRNA的表达,随着骨膜牵张器放置时间延长,ACT A和FS mRNA的表达量逐渐上升,骨膜牵张器放置后20、30、40及60天ACT A mRNA表达量分别为lO天的1.78、2.82、4.27及3.04倍;骨膜牵张器放置后20、30、40及60天FS mRNA表达量分别为10天的1.52、2.12、2.47及1.90倍。牵张侧ACT A mRNA的表达量10天与20天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);10天与30、40及60天标本比较,差异均有统计学意义(p＜0.05);20天与30天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);20天与40、60天标本比较,差异均有统计学意义(p＜0.05);30天与40、60天标本比较,差异有统计学意义(p＜0.05);40与60天标本比较,差异有统计学意义(p＜0.05)。牵张侧FSmRNA的表达量10天与20天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);10天与30、40及60天标本比较,差异均有统计学意义(p＜0.05);20天与30、40、60天标本比较,差异均无统计学意义(p＞0.05):30天与40、60天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);40与60天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05)。ACT A mRNA表达量对照侧与牵张侧10天样本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);对照侧与牵张侧20天样本比较,差异有统计学意义(p＜0.05);对照侧与牵张侧30、40、60天样本比较,差异有非常显著意义(p＜0.01)。FS mRNA的表达量对照侧与牵张侧10、20天样本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);对照侧与牵张侧30、40、60天样本比较,差异有统计学意义(p＜0.05);(2)腭裂模型的裂隙缘骨膜受牵张后,最终在骨膜下形成了新骨。组织学观察结果显示了新生骨在成骨细胞数量上的增长,以及胶原纤维和骨小梁排列方向上的变化。大量沿牵张方向排列的胶原纤维组织在增生成骨细胞作用下,钙化沉积为新骨,并逐渐改建成熟;(3)四环素荧光标记结果:在骨膜牵张器放置后不同牵张时期荧光标记带长度及面积上的变化,荧光亮度由弱变强,双标记线由无到有,双标间距由窄变宽,显示了新骨形成过程的一个动态变化规律;(4)骨组织计量学动态参数测量结果:对照组在靠近骨切开处仅见少量散在荧光带分布,未见有明显四环素双标线形成;实验组20、30、40及60天四环素双标平均间距分别为:46.07±0.58μm、77.36±2.5μm、97.18±1.6μm、115.2±2.91μm,各组间比较差异有非常显著意义(p＜0.01);实验组20、30、40及60天平均矿化沉积率分别为:4.18±0.05μm/d、7.03±0.23μm/d、8.83±0.15μm/d、10.47±0.2μm/

关键词：骨膜牵张成骨激活素卵泡抑素四环素荧光标记

牵张成骨与骨膜牵张成骨过程中肝细胞生长因子mRNA表达的实验研究

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牵张成骨与骨膜牵张成骨过程中肝细胞生长因子mRNA表达的实验研究

作者：马锋山东大学

学位级别：硕士

目的：在建立兔下颌骨牵张成骨与骨膜牵张成骨模型的基础上，采用原位杂交的方法检测肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）的表达规律，探讨HGF发挥的作用及作用机制，以期为该因子的外源性应用及基因治疗来加... 详细信息

目的：在建立兔下颌骨牵张成骨与骨膜牵张成骨模型的基础上，采用原位杂交的方法检测肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）的表达规律，探讨HGF发挥的作用及作用机制，以期为该因子的外源性应用及基因治疗来加速骨形成提供理论依据。方法：选取成年新西兰大白兔56只分别进行牵张成骨与骨膜牵张成骨实验，牵张成骨实验中动物分为牵张组与骨折组，每组20只，牵张组行两侧下颌骨切开术，经7天间歇期后以0.5mm／12h的速度牵张，7d后固定，分别于间歇期末、牵张期末、固定期1w、3w、5w末处死4只动物;骨折组不牵张，分别于术后1w、2w、3w、5w、7w末处死4只动物。骨膜牵张成骨实验中对兔一侧下颌骨体外侧骨膜牵张，术后第8d牵张两次，每次1mm，从第9d开始每4d牵张1mm，连续20d，另一侧作为空白对照侧，分别于术后28d、35d、42d、56d随机处死4只动物。取下颌骨标本，通过HE染色和原位杂交对标本进行组织学分析并检测肝细胞生长因子的表达规律。结果：牵张成骨实验牵张组间歇期末牵张间隙内充满成纤维细胞和胶原纤维，可见炎症细胞散在于纤维之间，牵张期末可见少量新生的骨小梁及类骨质沿牵引力方向形成，固定5w时可见大量骨组织形成，纤维组织减少。HGF mRNA在间歇期末有少量表达，主要位于牵张间隙内炎性细胞的细胞浆，牵张期末可见阳性染色主要位于牵张间隙内血管内皮细胞及血管壁间充质细胞，骨断端新骨形成区开始出现阳性染色，固定1w周时，阳性表达强度达到峰值，随着时间的延长，阳性表达强度减弱，固定5w时，基本检测不到目的基因的阳性表达，牵张组与骨折组之间无明显差别。骨膜牵张成骨实验中，术后28d牵张侧骨膜与骨皮质接触部位开始出现细胞活跃增生，骨膜与骨接触部位细胞体积增大，出现骨基质沉积，部分骨细胞被基质包绕;术后42d可见骨小梁结构出现，平行于牵张方向，术后56d新生骨质更加成熟，骨小梁增粗增多。HGF mRNA在正常骨膜组织中呈弱阳性表达，仅位于少数间充质细胞，在受到外力牵张的条件下，表达增强，术后35d时于新生骨基质处可见阳性表达，随着时间的延长，表达逐渐减弱，至术后56d时，与正常骨膜组织中表达水平接近。结论：肝细胞生长因子在牵张成骨与骨膜牵张成骨的组织形成过程中呈阳性表达，其中间充质细胞和血管壁细胞表达HGF mRNA的时间较长，阳性染色也较强，这些细胞合成的内源性HGF可能对细胞增殖、分化及组织形成具有促进作用。本实验结果能够为通过基因治疗的方法，应用HGF促进牵张成骨提供实验依据。

关键词：肝细胞生长因子牵张成骨骨膜牵张成骨原位杂交信使RNA

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骨膜牵张成骨修复腭裂的荧光组织化学分析

遵义医学院学报 2012年第4期35卷 294-297页

作者：蒋程程邓金勇宋庆高何苇陈尚遵义医学院附属口腔医院口腔颌面外科贵州遵义563099

目的分析镍钛记忆合金进行骨膜牵张成骨修复犬腭裂的成骨过程及规律。方法用健康杂种犬8只建立腭裂动物模型。2月后在裂隙缘一侧安置镍钛记忆合金牵张器进行骨膜牵张,牵张力为250±20g。分别于20、30、40和60 d取材,在取材前14 d与前3 ... 详细信息

目的分析镍钛记忆合金进行骨膜牵张成骨修复犬腭裂的成骨过程及规律。方法用健康杂种犬8只建立腭裂动物模型。2月后在裂隙缘一侧安置镍钛记忆合金牵张器进行骨膜牵张,牵张力为250±20g。分别于20、30、40和60 d取材,在取材前14 d与前3 d对家犬进行肌肉注射四环素(50 mg/kg),采用组织荧光化学法对实验侧及对照侧骨组织形成过程进行观察及评价,并进行骨组织计量学动态参数检测。结果不同牵张时期荧光亮度由弱变强,荧光双标记线间距逐渐变宽,各组间比较差异有统计学意义(P骨膜牵张成骨效果稳定,为腭裂修复提供了一种新思路。

关键词：骨膜牵张成骨腭裂四环素荧光标记

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骨膜牵张成骨的实验研究

口腔医学 2004年第2期24卷 108-110页

作者：邹锋邢树忠宋晓陵南京医科大学口腔医学院口腔颌面外科教研室南京210029 南京医科大学口腔医学院病理教研室南京210029

目的　建立骨膜牵张成骨模型 ,探讨骨膜牵张成骨新技术 ,为牙槽骨缺损及其他骨缺损寻找新的修复方法。方法　将自制骨膜牵张成骨装置及钛网植入 12只成年兔的一侧下颌升支外侧面 ,从术后第 7天开始牵张 ,第 1次牵拉 2mm ,后每 3d牵拉 1m... 详细信息

目的　建立骨膜牵张成骨模型 ,探讨骨膜牵张成骨新技术 ,为牙槽骨缺损及其他骨缺损寻找新的修复方法。方法　将自制骨膜牵张成骨装置及钛网植入 12只成年兔的一侧下颌升支外侧面 ,从术后第 7天开始牵张 ,第 1次牵拉 2mm ,后每 3d牵拉 1mm ,共牵拉 15d ,最终将钛网牵拉离开骨面 7mm。术后第 2 8、35、4 2、5 6天分别处死 3只动物 ,进行组织计量学、X线片及组织学观察。结果　所有标本在计量学及X线片上均显示有新骨形成 ,术后第 2 8、35、4 2和 5 6天形成的新骨厚度平均分别为 (1 90± 0 13)mm、(2 2 2± 0 30 )mm、(3 17± 0 14 )mm和 (4 5 6± 0 4 6 )mm。组织学观察显示了新形成骨在成骨细胞数量上的增长 ,以及胶原纤维排列方向上的变化。结论　骨膜牵张法可以形成新骨 ,用于增加骨量。

关键词：骨膜骨膜牵张成骨牵张成骨钛网

3D打印PLLA支架联合BMSCs对骨膜牵张成骨的影响

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3D打印PLLA支架联合BMSCs对骨膜牵张成骨的影响

作者：赵丹阳上海交通大学

学位级别：硕士

目的:探讨3D打印的PLLA支架进行骨膜牵张成骨的可行性,联合自体BMSCs,研究不同孔隙的牵张装置对骨膜牵张成骨效果的影响,为临床修复大块骨缺损提供实验依据。方法:全骨髓贴壁培养法获取新西兰大耳白兔BMSCs,在体外扩增培养并进行成骨、... 详细信息

目的:探讨3D打印的PLLA支架进行骨膜牵张成骨的可行性,联合自体BMSCs,研究不同孔隙的牵张装置对骨膜牵张成骨效果的影响,为临床修复大块骨缺损提供实验依据。方法:全骨髓贴壁培养法获取新西兰大耳白兔BMSCs,在体外扩增培养并进行成骨、成脂和成软骨多向诱导分化鉴定。根据填充率的不同,利用3D打印技术设计并打印三种不同孔隙的PLLA牵张支架。通过扫描电镜、CCK8法以及力学测试仪器等检测支架的结构、毒性和力学等方面的特性。在兔的颅骨上建立体内生物反应器,根据支架孔隙的不同将实验分为三组,分别使用不同孔隙的PLLA支架牵张兔的颅骨骨膜,每组均注射兔自体BMSCs,牵张完成8周后取材,对牵张区域的颅骨进行显微CT扫描,HE染色以及免疫组化检测和分析。结果:全骨髓培养法获取的兔BMSCs具有良好的增殖和分化能力。3D打印的可降解PLLA骨膜牵张支架具有较小的毒性和较好的生物相容性。然而随着填充率的降低,支架的孔隙逐渐增大,力学强度却逐渐减弱。体内实验表明不同孔隙的支架均可以满足牵张兔颅骨骨膜的要求,取材后显微CT和HE染色显示,随着骨膜牵张成骨装置孔隙的增大,新生骨组织在数量和质量上均逐渐增高,主要表现为新生骨骨量、骨密度以及骨小梁厚度的增高。另外免疫组化结果显示,随着材料孔隙的增大,OCN和CD31的表达也逐渐升高,表现为新生骨在分化上更加接近皮质骨,新生骨血管化程度的增高。结论:利用3D打印技术设计并打印的可降解PLLA支架作为骨膜牵张成骨装置具有可行性。在力学条件范围内,联合自体BMSCs,增大牵张支架孔隙有利于促进骨膜牵张成骨。

关键词：三维打印左旋聚乳酸骨髓间充质干细胞骨膜牵张成骨骨缺损

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下颌骨骨膜牵张成骨的实验研究

遵义医学院学报 2008年第1期31卷 30-32页

作者：刘亚宋庆高尹鑫海满城遵义医学院附属口腔医院口腔颌面外科贵州遵义563003

目的探讨骨膜牵张诱导成骨在不做骨皮质切开的情况下是否可用于口腔颌面部成骨。方法选成年健康遵义地区产山羊9只,用自制的骨膜牵张装置分别固定于山羊的两侧下颌骨体部,不做皮质骨切开,使牵张器对一侧骨膜施以牵张力,而另一侧不加力,... 详细信息

目的探讨骨膜牵张诱导成骨在不做骨皮质切开的情况下是否可用于口腔颌面部成骨。方法选成年健康遵义地区产山羊9只,用自制的骨膜牵张装置分别固定于山羊的两侧下颌骨体部,不做皮质骨切开,使牵张器对一侧骨膜施以牵张力,而另一侧不加力,分别在实验后第30、45和60天处死山羊,对标本分别以游标卡尺测量其新生骨厚度。结果实验侧术后均有新生骨组织,而对照侧未见有新生骨组织厚度变化。结论对山羊下颌骨在不做骨皮质切开的情况下进行骨膜牵张有新骨生成,对口腔颌面部骨组织缺损的修复提供新的思路。

关键词：骨膜骨膜牵张成骨牵张成骨钛合金

腭裂缘骨膜牵张成骨不同阶段的组织学变化分析

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国际口腔医学杂志 2011年第2期38卷 141-144,149页

作者：宋庆高邓金勇陈尚黄桂林蒋练遵义医学院附属口腔医院口腔颌面外科遵义563000

目的对腭裂裂隙缘的骨膜进行牵张,研究新骨形成的过程及规律,初步探讨骨膜牵张成骨方法修复腭裂的机制。方法选用健康杂种幼犬8只制作腭裂动物模型,采用安置骨膜牵张器的方法对裂隙缘的一侧骨膜进行牵张,牵张力为(2.45±0.20)N。在牵张... 详细信息

目的对腭裂裂隙缘的骨膜进行牵张,研究新骨形成的过程及规律,初步探讨骨膜牵张成骨方法修复腭裂的机制。方法选用健康杂种幼犬8只制作腭裂动物模型,采用安置骨膜牵张器的方法对裂隙缘的一侧骨膜进行牵张,牵张力为(2.45±0.20)N。在牵张器放置后20、30、40、60d各处死动物2只,未放置一侧为对照侧。结果裂隙缘骨膜受牵张后,新生成骨细胞数量随时间变化而增多,大量沿牵张方向排列的胶原纤维组织在增生的成骨细胞作用下,钙化沉积成新骨,并逐渐改建成熟。结论新骨形成是沿牵张方向的膜内成骨方式完成的,在骨膜牵张器放置20d后牵张区已有新骨形成,随着牵张时间的延长,成骨量逐渐增加,40d时的成骨活动最活跃,至60d时新骨钙化程度较成熟,以骨改建和塑形为主。

关键词：腭裂骨膜牵张成骨腭裂整复术组织学