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马立克氏病易感鸡和抗性鸡脾脏组织转录组的特征差异分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第14期 67-72页

作者：金元昌李玉峰杨坤炫韦平黄腾曾伯平遵义师范学院生物与农业科技学院贵州遵义563006 百色大学农业与食品工程学院广西百色533000 湖南科技大学生命科学学院湖南湘潭411201 广西大学养禽与禽病研究所南宁530005 赤水河流域环境保护与山地农业发展人才基地贵州遵义563006

为了探究马立克氏病(MD)易感鸡和抗性鸡脾脏组织转录组的特征差异,试验选择200只7日龄、健康的霞烟鸡(MD抗性品系核心群的后代),每只试验鸡腹腔注射含2500 pfu血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV-1)超强毒株GX0101的血毒,攻毒210 d后,选取感染M... 详细信息

为了探究马立克氏病(MD)易感鸡和抗性鸡脾脏组织转录组的特征差异,试验选择200只7日龄、健康的霞烟鸡(MD抗性品系核心群的后代),每只试验鸡腹腔注射含2500 pfu血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV-1)超强毒株GX0101的血毒,攻毒210 d后,选取感染MDV-1超强毒株GX0101且脾脏明显具有MD肿瘤的鸡只作为易感组,未感染MDV-1超强毒株GX0101且无任何MD临床症状的鸡只作为MD抗性组,处死后提取脾脏组织总RNA,采用转录组测序技术进行差异表达基因(DEGs)的筛选,并进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析和原发性免疫缺陷通路相关基因的表达分析。结果表明:在MD易感组与MD抗性组脾脏组织中共筛选得到152个DEGs,相对于MD易感组,MD抗性组脾脏组织有92个DEGs显著下调,60个DEGs显著上调(|lbFold Change|>1,FDR<0.05);共发现48个显著富集(P<0.05)GO条目,其中生物学过程共富集到23个条目,细胞组分共富集到16个条目,分子功能共富集到9个条目;筛选得到的DEGs在细胞周期、嘧啶代谢和原发性免疫缺陷通路等13个信号通路中显著富集。在原发性免疫缺陷通路中,与MD易感组比较,MD抗性组脾脏组织TNFRSF13B基因[编码钙调节因子(TACI)]显著下调(P<0.05),CD8α基因显著上调(P<0.05)。说明MD抗性鸡可通过下调体液免疫缺陷相关基因TACI和上调细胞免疫缺陷相关基因CD8α来提高机体对MD的抗性。

关键词：鸡马立克氏病转录组测序钙调节因子(TACI) CD8α

马立克氏病病毒编码LORF9参与致病的分子机制研究

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马立克氏病病毒编码LORF9参与致病的分子机制研究

作者：朱潇静河南农业大学

学位级别：硕士

马立克氏病(Marek’s Disease,MD)是由马立克氏病病毒(Marek’s Disease Virus,MDV)感染鸡引起的以严重免疫抑制和内脏肿瘤为主要特征的疾病。MDV的基因组大小约为177kb,由一个长独特序列(U)区和一个短独特序列区(U),以及位于U两端的反... 详细信息

马立克氏病(Marek’s Disease,MD)是由马立克氏病病毒(Marek’s Disease Virus,MDV)感染鸡引起的以严重免疫抑制和内脏肿瘤为主要特征的疾病。MDV的基因组大小约为177kb,由一个长独特序列(U)区和一个短独特序列区(U),以及位于U两端的反向重复序列区(TR和IR)以及U两端的反向重复序列区(TR和IR)组成。位于U和U区的基因与其他疱疹病毒(HSV-1,VZV)具有高度的同源性,然而大多数基因的功能仍然未知。其中,LORF9是MDV编码的独特基因,早期研究表明,LORF9缺失导致MDV特超强毒株致病性显著降低,但其参与致病的分子机制仍不清楚。为了进一步明确LORF9在MDV致病过程中的作用以及探索参与致病的分子机制,本研究以超强毒株Md5BAC为亲本毒株,利用细菌人工染色体技术(Bacterial artificial chromosome,BAC)平台,通过Red两步同源重组技术构建了LORF9基因缺失(Md5BAC△LORF9)和回复突变株(Md5BAC△LORF9-Re)。为了探究LORF9基因缺失毒株在体内的致病作用,将1日龄的SPF鸡随机分成4组,未接种病毒组为阴性对照组,另外3组SPF鸡颈部皮下分别接种2,000 PFU的Md5BAC、Md5BAC△LORF9和Md5BAC△LORF9-Re病毒。利用荧光定量PCR(q PCR)检测感染后5、7、14、60 d脾脏中的病毒拷贝数,发现Md5BAC△LORF9的复制拷贝数比Md5BAC和Md5BAC△LORF9-Re显著降低。在感染后第14 d,与阴性对照组相比,Md5BAC和Md5BAC△LORF9-Re感染鸡胸腺和法氏囊发生显著萎缩,而Md5BAC△LORF9感染鸡没有显著变化。对所有试验组的SPF鸡进行60 d的致病性监测,发现阴性对照组未发病,Md5BAC△LORF9组发病率为23.8%,死亡率为14.2%,而Md5BAC和Md5BAC△LORF9-Re感染的SPF鸡发病率分别为63.0%和84.2%,死亡率分别为44.4%和84.2%。为了进一步研究LORF9缺失与免疫保护相关,将1日龄的SPF鸡随机分成4组,其中2组分别颈部皮下免疫接种500 PFU的Md5BAC△LORF9和CVI988/Rispens病毒,接种后第5 d对免疫组和另外1组进行Md5BAC攻毒,未攻毒组为阴性对照组。在攻毒后第14 d,Md5BAC感染组的平均体重显著降低,但Md5BAC△LORF9组的平均体重与阴性对照组相比没有显著差异。Md5BAC感染组引起显著的免疫器官萎缩;在Md5BAC△LORF9或CVI988/Rispens免疫组中的鸡中均未发生免疫器官萎缩。在60 d的致病性监测中,阴性对照组未发病,Md5BAC感染组SPF鸡发病率为85%,死亡率为80%,Md5BAC△LORF9和CVI988/Rispens免疫组中免疫保护率分别为94.4%和93.7%。以上结果表明:LORF9缺失后MDV毒株具有较强的免疫保护力。为了进一步探索LORF9参与MDV致病的分子机制,通过RACE实验分析表明LORF9仅有一个转录本且大小与预测的开放阅读框序列一致,表明基因内无内含子;Western blot和q PCR检测结果表明,LORF9的表达随着病毒体外CEF细胞增殖而增加;而在体内病毒感染早期表达水平较高。细胞亚定位和核质分离试验结果表明LORF9在细胞质和细胞核中均有表达。转录组测序结果表明Md5BAC△LORF9感染显著引起免疫基因的表达变化,但进一步研究发现LORF9可能不参与调控天然免疫反应中的I型干扰素信号通路;对LORF9蛋白进行表观遗传验证,表明LORF9不能被Us3进行磷酸化修饰,但LORF9是一个泛素化蛋白,可以发生K48和K63泛素化修饰,同时MDV USP能够抑制LORF9的泛素化。综上所述,本研究成功构建了Md5BAC△LORF9基因缺失毒株和Md5BAC△LORF9-Re回复毒株,证明LORF9基因缺失不影响MDV体外增殖,但显著降低病毒体内复制和致病性。LORF9基因编码一个转录本并在细胞质和细胞核均有表达,通过转录组测序表明LORF9缺失后会显著改变机体免疫相关基因的表达,但进一步研究表明LORF9可能不参与调控天然免疫反应中的I型干扰素信号通路,LORF9是可以被K48和K63修饰的泛素化蛋白,且MDV USP能够抑制LORF9的泛素化。本研究为阐明MDV致病分子机制提供理论基础,也为MDV基因缺失疫苗的研发提供新思路。

关键词：马立克氏病马立克氏病病毒 LORF9 转录组免疫保护性

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马立克氏病液氮苗的使用及其注意事项

养禽与禽病防治 2022年第3期 37-38页

作者：王谷瑶华南农业大学兽医学院广州510642

马立克氏病(MD)目前仍是危害养禽业的重要疾病之一,免疫接种是MD防控中最为关键的一环,因此是否正确使用液氮苗直接决定了MD的免疫防控效果。本文以马立克氏病液氮苗为例浅析孵化场冷冻疫苗的使用及注意事项。

关键词：马立克氏病液氮苗冷冻疫苗

一例鸡马立克氏病病毒和禽白血病病毒混合感染病例的实验室诊断与分析

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黑龙江畜牧兽医 2022年第2期 64-66,69,138页

作者：李芷珊陈俊宏徐玲玉张萌萌吴一凡柳腾飞王新凯宁章勇廖明贾伟新华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室/农业农村部人畜共患病重点实验室/农业农村部兽用疫苗创制重点实验室/广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642 岭南现代农业科学与技术广东省实验室广州510642

2020年11月份,江西省宜春市某散养鸡场50日龄鸡出现消化不良、精神萎靡、死前倒地抽搐并呈"劈叉姿势"症状,部分病鸡体表存在明显肿瘤。为了对发病鸡所患疾病进行诊断,采用发病情况调查、剖检病变、病理组织学观察及PCR检测方法进行鉴定... 详细信息

2020年11月份,江西省宜春市某散养鸡场50日龄鸡出现消化不良、精神萎靡、死前倒地抽搐并呈"劈叉姿势"症状,部分病鸡体表存在明显肿瘤。为了对发病鸡所患疾病进行诊断,采用发病情况调查、剖检病变、病理组织学观察及PCR检测方法进行鉴定,同时对阳性条带测序比对,构建系统进化树。结果表明:剖检病死鸡可见心脏、肝脏、肾脏、肺脏有大量灰白色肿瘤灶,脾脏明显肿大。送检病料病理组织切片符合马立克氏病的病理特征;病原核酸检测显示马立克氏病病毒、禽白血病病毒和禽网状内皮组织增殖病病毒为阳性;阳性条带测序比对结果显示禽网状内皮组织增殖病病毒序列与马立克氏病流行毒株有高度相似性,为假阳性结果。说明该鸡场鸡群感染了马立克氏病病毒和禽白血病病毒,可采取改善养殖环境并结合疫苗免疫等方式科学防控,养鸡场应重视马立克氏病的实验室鉴别诊断和防控。

关键词：马立克氏病病理学鉴定鉴别诊断核酸检测肿瘤

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白Ⅰ的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国家禽 2013年第6期35卷 13-15页

作者：李巧玲崔红玉牛军伟王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

提取感染MDV 814A3毒株的鸡胚成纤维细胞(CEF)总基因组,利用PCR技术扩增获得gI基因。将鉴定正确的gI基因克隆至pET-32a(+),构建原核表达载体pET-gI。将诱导表达获得的gI重组蛋白免疫新西兰大白兔,产生的抗血清能够与MDV814A3病毒发生特... 详细信息

提取感染MDV 814A3毒株的鸡胚成纤维细胞(CEF)总基因组,利用PCR技术扩增获得gI基因。将鉴定正确的gI基因克隆至pET-32a(+),构建原核表达载体pET-gI。将诱导表达获得的gI重组蛋白免疫新西兰大白兔,产生的抗血清能够与MDV814A3病毒发生特异性反应。本试验所制备的gI重组蛋白和多克隆抗体将在MDV检测、血清学诊断等方面具有重要应用价值。

关键词：马立克氏病 gI基因原核表达多克隆抗体

端粒酶与鸡马立克氏病及禽白血病关系的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2020年第21期 30-33页

作者：张兆博张思诗汉可欣汉丽梅沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 东北畜禽疫病研究教育部重点实验室沈阳110866

马立克氏病与禽白血病分别是由马立克氏病毒与禽白细胞增生病病毒引起的家禽免疫抑制性传染病,它们同属于国家二类动物疫病,都是严重危害我国家禽养殖业发展的重要疫病。端粒酶作为一种DNA聚合酶,在维持真核生物端粒的长度、保持细胞遗... 详细信息

马立克氏病与禽白血病分别是由马立克氏病毒与禽白细胞增生病病毒引起的家禽免疫抑制性传染病,它们同属于国家二类动物疫病,都是严重危害我国家禽养殖业发展的重要疫病。端粒酶作为一种DNA聚合酶,在维持真核生物端粒的长度、保持细胞遗传物质稳定及调节细胞周期等方面发挥了十分重要的作用。端粒酶异常与这两种疾病的发生之间存在重要联系,文章对近年来国内外关于马立克氏病和禽白血病与端粒酶关系的研究进展进行了综述,旨在为后续对马立克氏病与禽白血病进行深入研究及防治提供参考。

关键词：鸡端粒酶端粒马立克氏病禽白血病

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关注鸡马立克氏病

兽药市场指南 2023年第3期 40-42页

作者：衣志颖不详

马立克氏病是鸡的一种淋巴组织增生性肿瘤病,其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤肿瘤病灶。本病是一种世界性疾病,是危害养鸡业健康发展的三大主要疫病(马立克氏病、鸡新城疫... 详细信息

马立克氏病是鸡的一种淋巴组织增生性肿瘤病,其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤肿瘤病灶。本病是一种世界性疾病,是危害养鸡业健康发展的三大主要疫病(马立克氏病、鸡新城疫及鸡传染性法氏囊病)之一,引起鸡群较高的发病率和死亡率。

关键词：马立克氏病肿瘤病鸡传染性法氏囊病淋巴样细胞浸润主要疫病鸡新城疫淋巴组织增生外周神经

一种用于马立克氏病病原检测的PCR技术研究

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江西农业大学学报 2014年第1期36卷 216-220页

作者：张丽娟龚振华管远红胡永浩邢小勇温峰琴王志亮甘肃农业大学甘肃兰州730070 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300

根据马立克氏病Meq基因序列特点设计的一对检测引物,与其他4对已发表的检测引物进行特异性和敏感性的比较研究,对PCR产物进行测序分析。结果显示,5对PCR检测引物均具有较好的特异性,但敏感性不完全相同,自行设计的Meq5引物在DNA浓度为3... 详细信息

根据马立克氏病Meq基因序列特点设计的一对检测引物,与其他4对已发表的检测引物进行特异性和敏感性的比较研究,对PCR产物进行测序分析。结果显示,5对PCR检测引物均具有较好的特异性,但敏感性不完全相同,自行设计的Meq5引物在DNA浓度为3.81×10-3μg/mL时仍能够扩增出目的条带,明显优于其他4对引物。序列测定结果显示,新的分离株SD2012-1与国内外其他参考毒株之间同源性较高。组织样品检测结果显示,羽髓、心脏、肝脏、脾、肾脏、腺胃及十二指肠病料中均能检测到马立克氏病病毒,为今后马立克病的流行病学调查和检测提供了依据。

关键词：马立克氏病 Meq基因引物

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒的优化及生物安全性评价

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表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒的优化及...

作者：王子书江西农业大学

学位级别：硕士

马立克氏病（Marek’s disease,MD）和传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是两种高度接触性的病毒性传染病,因具有较高的发病率和死亡率给世界养禽业造成严重的经济损失。使用疫苗免疫是防控MD和IBD的主要手段。然而,大... 详细信息

马立克氏病（Marek’s disease,MD）和传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是两种高度接触性的病毒性传染病,因具有较高的发病率和死亡率给世界养禽业造成严重的经济损失。使用疫苗免疫是防控MD和IBD的主要手段。然而,大量使用疫苗导致病毒变异,使毒力增强的毒株不断涌现,传统疫苗已不能很好地控制疾病的发展。近年来,基因工程疫苗成为疫苗研发的重要方向,重组活载体疫苗是基因工程疫苗中具有代表性的种类之一。由于重组活载体疫苗采用的是转基因技术,任何转基因微生物带有新目的基因和表达产物在使用过程中都有可能带来新的风险。因此,本着保障人类和动物健康以及生态环境安全为目的,我们必须对转基因微生物产品进行生物安全评价。本研究将表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒进行BAC骨架的敲除,再利用有限稀释法对已敲除BAC骨架的重组病毒进行纯化。对优化后的重组病毒进行PCR鉴定,结果显示,成功敲除了重组病毒的BAC骨架。经PCR、Western blot和IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白,并具有良好的遗传稳定性。同时对优化后的重组病毒进行转基因生物安全评价,通过对靶动物和非靶动物进行安全性试验结果显示,各组试验动物精神状态良好,与对照组相比发育正常,体重无显著性差异。对试验动物进行剖检,各组织器官发育正常,没有出现肿大或萎缩现象,与对照组相比没有显著性差异,组织病理学检测均无明显的病理变化。同居试验结果表明,重组病毒的水平传播能力极低,在外界环境中基本无存活能力。综上所述,重组病毒属于转基因生物安全等级I级的动物用转基因微生物,具有良好的安全性,可以用于开发二联疫苗。

关键词：马立克氏病传染性法氏囊病重组病毒生物安全评价